A neurális áramkör topográfiájának feltárása többszínű protokollban (francia nyelvre fordítva)
Összegzés
Gyakorlati útmutatót adunk a nyomjelzők in vivo szállításához és a spinocerebelláris út mint modell rendszerként történő felhasználásához, hogy bemutassuk az egerek sikeres idegsejt-elemzésének alapvető lépéseit. Részletesen leírjuk sokoldalú nyomkövetési protokollunkat, amely az Alexa fluoroforokhoz konjugált búzacsíra agglutinint (WGA) hasznosítja.
Absztrakt
Jegyzőkönyv
1. Ajánljon nyomjelzőket in vivo steril műtét alkalmazásával (01.01–01.16. Szakasz)
Az eljárás során azt javasoljuk, hogy szabványos steril sebészeti technikákat alkalmazzanak. Ez magában foglalja a steril kesztyű, a köntös és az arcmaszk használatát. Az eszközöket használat előtt vagy autoklávban kell tartani, vagy vízzel, majd etanollal meg kell tisztítani. A műtét során, és különösen az állatok között, a szövetdarabok megtisztítják az eszközöket és szárazon sterilizálják a műszereket forró golyós sterilizátorral (Steri 250 kat. # 18000-45, Fine Science Tools). Ezenkívül elengedhetetlen, hogy a munkaterületét úgy szervezze meg, hogy kijelöljön egy területet az állatok előkészítésére (borotválkozás stb.), Műtétre, valamint egy helyreállítási területre, ahol az állat könnyen ellenőrizhető, felmelegedhet és szükség esetén fájdalomcsillapítókkal is ellátható. A sikeres műtétek túlélésének kulcsa a fertőzés kockázatának csökkentése és az agresszív műtét utáni ellátási stratégia fenntartása. Kérjük, olvassa el azt a táblázatot, ahol megtalálhatja a protokollhoz szükséges összes felszerelést és reagenst.
2. Anterográd módon követhető mohaszálak kimutatása
4. Mikroszkópia és adatelemzés
Valamennyi állatkísérletet az Albert Einstein Orvostudományi Főiskola intézményi irányelveinek megfelelően jóváhagyott IACUC állatprotokoll szerint hajtották végre. Hím és nőstény beltenyésztett svájci Webster (Taconic, Albany, NY) vagy beltenyésztett C57BL6J (JAX, Bar Harbor, ME) egereket tartottunk telepünkön, és minden vizsgálathoz felhasználtuk őket. A hüvelyi dugó észlelésének napján a déli nap embrióinak tekinthető a 0,5.
5. Reprezentatív eredmények:
Finom spinocerebelláris afferensek a kisagy ttal parazagibandáiban (3. ábra; Voogd et al 1969; Grishkat és Eisenman 1995; Vogel és Prittie 1994; Vig és mtsai 2005;. Apps és Hawkes 2009; Sillitoe és mtsai 2010; . Reeber és mtsai. al. 2011). Fecskendeztük a WGA-Alexa nyomjelzőket az alsó mellkasi felső ágyéki gerincvelőbe, hogy bemutassuk: 1) hogy ezek a nyomjelzők még mindig alkalmazhatók a kisagyban lévő terminálok meghatározott részhalmazainak címkézésére (3. ábra; Reeber et al 2011, 2). hogy a WGA-Alexa nyomjelzők erősen fényesek, és felhasználhatók a teljes kisagy mohás rostok domborzatának általános mintázatának megjelenítésére (3. ábra;. Reeber és mtsai 2011), 3), hogy a WGA-Alexa 488 és 555 használható kombinációban több útvonal követésére ugyanazon állatnál (4. ábra) és 4.) a WGA-Alexa nyomjelzők kompatibilisek az immunhisztokémiai festéssel (5. ábra). A közelmúltban végzett munkánk során megmutattuk, hogy a kisagy WGA-Alexa címkével ellátott nyomjelzői már a gerincvelőbe történő bejuttatás után 6 órával a kisagyban találhatók, és kiváló választás a fejlődési utak architektúrájának nyomon követésére (Reeber et al., 2011).
2. ábra Az alsó mellkas illusztrációja -. Az ágyéki felső csigolya szegmens a háti laminectomia előtt és után egy szegmens vázlata NÁL NÉL. csigolya ép az egér gerincének alsó fa-mellkasi-felső régiójából B. A Dorsalaminectomia L-t egy vagy két gerincszakasz spinális folyamatának eltávolításával hajtják végre, miután az ízületi laminátum és a spinous dorsalis folyamat között félúton levágták.