Apasági teszt Anatómia és fiziológia
Az apasági teszt egy genetikai teszt, amely meghatározza, hogy az egyén a gyermek biológiai apja-e. Az apaság genetikai bizonyítása nagyon hasznos, különösen az igazságügyi orvostudományban. Vannak sokkal kevésbé használt szülési tesztek is, különösen szülési szabadság, csecsemőgyilkosság vagy örökbefogadás esetén. A múltban különféle módszereket alkalmaztak az apaság megállapítására, mint például a vércsoport antigén elemzése, a HLA antigén elemzés, a leukocita antigén elemzés vagy a különféle fehérjék és enzimek elemzése, de ezek mind nem szolgáltattak megbízható eredményt.
Az apasági teszt meghatározása
Az apasági teszt 16 különböző kromoszómán elhelyezkedő DNS-szekvencia laboratóriumi elemzése annak biztosítása érdekében, hogy az egyén a gyermek biológiai apja. Biológiai mintákra van szükség az állítólagos apától és gyermektől, mindegyikből 16 markert vagy DNS-szekvenciát elemezve, a DNS-elemzés az egyetlen, amely bizonyosságot nyújt a rokonság mértékének meghatározásában. A két egyéntől származó mintákat összehasonlítjuk úgy, hogy mindegyiket külön elemezzük, és megállapítjuk a komplementaritást a gyermek és az apa markerei között. Ha az anyától is vesznek mintákat, akkor a vizsgálat specificitása fokozódik, de ez nem feltétlenül szükséges, mivel a teszt specifitása 99,9%, két minta gyűjtése esetén pedig egy a feltételezett apától és egy a gyermek. A teszt elvégezhető mind prenatális, mind posztnatális időszakban.
Romániában az apasági teszt költségei 750 (anyát teszteltek, feltételezett apa és 1 gyermek) és 1500 RON (anyát teszteltek, két feltételezett apa és két gyermek) között vannak, a vizsgálati módszertől, a begyűjtött biológiai mintától és az elemzett minták száma.
Az eredmény a tesztek laboratóriumba történő elküldésétől számított 3–7 munkanapon belül elérhető, de ez még tovább is elhúzódhat, az elemzést végző laboratórium által alkalmazott technikától függően.
Meg is határozható testvériség (rokonság 2 vagy több gyermek között) és a rokonság mértékének meghatározása a gyermek és a különféle családtagok (nagynénik, nagybácsik, nagyszülők) között. Megállapíthatja az egyén DNS-profilját is, mindkettőt nukleáris DNS-profil és még Mitokondriális DNS valamint Y kromoszóma teszt a férfi rokonság kialakítására (apai rokonság).
Ikertartás-teszt ugyanolyan módszerekkel történik, mint az apasági teszt, és meg tudja állapítani, hogy az ikrek monozigóták (azonosak) vagy dizigóták.
Prenatális vizsgálat
1. Amniocentézis.
2. Korionos villus biopszia.
Lehetővé teszi a korai tesztelést, a terhesség 10-13. Hetétől kezdve. Ez magában foglalja a méhlepény kis részének betakarítását a méhből. Ez egy invazív eljárás, amely elvégezhető transzcervikálisan (megközelítés a hüvelyből, áthaladás a méhnyakon a méhig) vagy transzabdominálisan finom és vékony tű segítségével, ultrahang irányítással. A chorial villi a méhfalból kiemelkedő kesztyűujj finom szöveti növekedései. Genetikai anyaguk megegyezik a magzat genetikai anyagával. A szövődményeket a beavatkozás utáni transzvaginális vérzés és a placenta membránjának repedése jelenti. A teszthez 2-3 mm szövetet kell betakarítani.
Az amniocentézis és a chorionus villus biopszia is rutinvizsgálat, amelyet prenatálisan végeznek nemcsak az apaság megállapításához, hanem a genetikai anyag rendellenességeinek meghatározásához, valamint a genetikai betegségek és kromoszóma rendellenességek diagnózisának megállapításához, amely diagnózis választható az abortuszra (abortusz). gyógyászati). A chorionus villus biopsziának ebben a tekintetben előnye van, mert gyorsabban elvégezhető, a terhesség 13. hetétől kezdve. A gyűjtést, mind az amniocentézis, mind a chorionus villus biopszia esetén, csak a nőgyógyász végzi, és csak ultrahangos útmutatással.
3. SNP mikroarray (egy nukleotid polimorfizmus mikroray)
egy nem invazív technológia az apaság meghatározására az anyai vérből kivont keringő magzati DNS elemzésével. A teszt a terhesség 10. hetétől kezdődően végezhető el. A magzati DNS-t, az anyai DNS-t és a feltételezett apa DNS-ét elemzik. A nukleotidok által képviselt 317 000 genetikai markert elemezzük, és komplementaritásuk alapján megállapítjuk az apaságot. Ennek a tesztnek a pontossága 99,9%, és hajlamos az invazív tesztek, például az amniocentézis és a chorionus villus biopszia helyettesítésére.
Szülés utáni tesztelés
Az elvégzendő elemzéshez kötelező a minta, amelyet a gyermektől és a feltételezett apától gyűjtöttek. Nem kötelező az anyától származó mintát tesztelni, de jelenléte növeli az eredmény bizonyosságát és az apaság megerősítésének valószínűségét.
Vizsgálati módszerek
1. Láncpolimerizációs reakció
PCR technika
Ez az a módszer, amellyel a DNS-szekvenciát in vitro amplifikálják. A természetes DNS replikációs vagy szintézis folyamaton megy keresztül, amelynek során egy új DNS-szekvenciát szintetizálnak egy anya-DNS-szekvencia segítségével, az úgynevezett mátrixot. A PCR a DNS-replikációt végzi a laboratóriumban. Ez nagyobb mennyiséget eredményez egy adott DNS-szekvenciából, amelyet aztán elemezni lehet. A reakcióhoz szükség van:
- az elemezni kívánt DNS-minták (feltételezett apa, anya és gyermek), amelyeket fel kell használni (úgynevezett templát DNS-nek)
- egy DNS-polimeráz
- primerek (oligonukleotidok)
- reakciópuffer
- Magnéziumionok
A reakció magában foglalja a DNS-templát termikus denaturálását a kettős spirál felszabadulásával, a primerek kapcsolódásával és a polimerizációval. Az első polimerizációs ciklus (amplifikáció) végén dupla mennyiségű DNS-t kapunk a templát DNS mennyiségéhez viszonyítva. 25 és 40 amplifikációs ciklust hajtunk végre. A reakció sikeréhez a templát DNS minimális mennyisége 500 nanogramm mag DNS. Az alkalmazott primerek mesterségesek, és komplementereknek kell lenniük az amplifikálandó DNS-régió 5'- és 3'-végével. A reagensekhez használt DNS-polimerázt termofil mikroorganizmusokból nyerik, és hőstabilisnak kell lennie ahhoz, hogy ellenálljon azoknak a hőmérsékleteknek, amelyeken a láncpolimerizációs reakció lejátszódik (100 Celsius fok). Leggyakrabban használják DNS polimeráz Taq, vagy Taq Pol, a Termus Aquaticus mikroorganizmusból nyerjük. A Taq Pol ellenáll mind a három hőmérsékleti tartománynak, amelyen PCR-t hajtanak végre, nevezetesen: 90–95 Celsius fok a DNS-templát denaturálásához és a kettős spirál letekercseléséhez, 55–60 fok a primerek rögzítéséhez a denaturált templát DNS mindkét szálához és 72-75 fok a polimerizációs reakcióhoz.
A lánc polimerizációs reakciójának szakaszai:
a) A kettős szálú DNS denaturálása
90 fok feletti hőmérsékleten, 20-30 másodpercig készítik, a kettős szálú DNS két komplementer templátszálra történő szétbontásával, amelyekhez azután a primerek kapcsolódnak. Ezért ennek a lépésnek a végén két szabad egyszálú DNS-szál eredményezi a reakcióközeget.
b) Egyszálú DNS-primerek összekapcsolása
20-40 másodpercig tart, ezalatt a hőmérsékletet 55-60 fokig süllyesztik. Az eredmény egy hibrid kettős szálú DNS.
c) A primerek meghosszabbítása
A DNS-polimeráz a hibrid kettős szálú DNS-szálhoz kötődik a templát DNS-szál szekvenciájának leolvasásával, és meghosszabbítja a primereket a nitrogénbázisok közötti komplementaritás szabálya alapján.
Erősítési fázisok:
- Exponenciális erősítés - a DNS mennyiségének megduplázása az egyes polimerizációs ciklusok végén
- Kiegyenlítődik - A reagensek elfogyasztása után a reakciók lassabban haladnak
- fennsík - a reagensek kimerülése
2. Korlátozási töredék hossza polimorfizmus
A technika magában foglalja a DNS-szekvencia fragmentálását a restrikciós enzimek. A kapott fragmenseket hosszuk szerint szétválasztjuk agar gélelektroforézissel, majd Southern Blot eljárással egy speciális membránra visszük át. Az anya, a feltételezett apa és a gyermek összes mintáját azonos módszerrel elemzik és összehasonlítják az azonos hosszúságú DNS-szekvenciák komplementaritása szerint. Az RFLP módszert a genotipizálás arany standardjának tekintik, de korlátozza az a tény, hogy a tesztbe bekerülő minták DNS-jének kivételes minőségűnek kell lennie ahhoz, hogy fragmentumokra lehessen szétválasztani. A teszt időtartama szintén nagyon hosszú, 3 hét és 3 hónap között mozog, míg a PCR teszt 3 és 9 nap között tart.
Az apasági teszt képviseli az egyetlen módszer a gyermek biológiai atyájának megállapításával kapcsolatos bizonytalanság kiküszöbölése, amely 100% -os pontosságú genetikai teszt a biológiai apa státuszának nem megfelelő egyedek és 99,9% -os pontossággal a biológiai apa státusú egyének meghatározásában. Az eredmény a minták beérkezését követően körülbelül egy hét múlva szabadul fel, de még Romániában is vannak olyan laboratóriumok, amelyek sürgősen 8 órán belül elküldik az eredményt.