Aspergillus niger otomycosisban, kik a fekete férfiak az otomycosisban PDF Free Download

Szakdolgozat Aspergillus niger otomycosisban Kik a fekete férfiak az otomycosisban? Marcel Schöpfer Mat.Nr .: 0412267 nyújtotta be az orvostudomány doktorának (Dr.med.univ.) megszerzéséhez a grazi Orvostudományi Egyetemen. Priv.-Doz. Ing. Mag. Dr. Walter Buzina, Higiénés, Mikrobiológiai és Környezetgyógyászati Intézet Univ. Prof. Dr. Doris Lang-Loidolt, az ENT Graz Graz Egyetemi Klinikája, 2011. július

Nyilatkozat a becsületről Nyilatkozom a becsületemről, hogy ezt a tudományos munkát magam készítettem el, és hogy a vele közvetlenül összefüggő tevékenységeket végeztem. Kijelentem továbbá, hogy a megadottakon kívül semmilyen segédeszközt nem használtam. Megfigyeltem a felhasznált irodalmi források összes szerzői és szerződéses jogát, csak a megjelölt forrásokat használtam fel, és szó szerint vagy a felhasznált források tartalmát tekintve megjelöltem a részleteket. A munkafolyamat során nyújtott támogatást - ideértve a jelentős mentori utasításokat is - teljes körűen meghatározzuk. Ezt a szakdolgozatot nyomtatott és elektronikus formában nyújtották be, és más vizsgahatósághoz még nem nyújtották be. Graz, 2011. július (Marcel Schöpfer)

Köszönetnyilvánítás Ezúton szeretnék köszönetet mondani mindenkinek, aki segített nekem ennek a munkának az elvégzésében: Higiéniai, Mikrobiológiai és Környezetgyógyászati Intézetnek, valamint Graz és Innsbruck Egyetemi Fül-, Orr- és Torokgyógyászati Klinikáinak a szükséges eszközök és anyagok biztosításáért. Ass-Prof. Priv.-Doz. Ing. Mag. Dr. Walter Buzina és egyetemi tanár. Dr. Doris Lang-Loidolt a tudományos felügyeletért. Minden kollégának, különösen Bettina Heilingnek, gyakorlati támogatásukért. Peter Tschuffer mag. Ennek a munkának a javításáért. Patrick bátyámnak grafikai és technikai segítségért. Szerető szüleim, Werner és Elfriede, a beteg kíséretéért és támogatásáért az emberi orvoslás tanulmányozása során, valamint az élet fontos és pótolhatatlan szakaszának lehetővé tételéért. Keresztapámnak, Dr. Helmut Schöpfer, aki nélkül soha nem tanultam volna orvostudományt.

Tartalomjegyzék 1. Bevezetés. 1 1.1 Történelem. 1 1.2 Mi az otomycosis. 4 1.3 A külső hallójárat anatómiája és szövettana. 6 1.4 A gombák biológiája. 9 1.4.1 Besorolás és nómenklatúra. 9 1.4.2 D-H-S rendszer: orvosilag fontos gombák osztályozása. 11 1.4.3 A gomba sejt felépítése. 12 1.4.4 Élettan. 14 1.4.5 Orvosilag fontos gombák életkörülményei és életmódja. 15 1.4.6 Mikopátiák. 17 1.5 A munka célja. 18 2. Anyag és módszerek. 20 2.1 Munka lépései. 20 2.2 Mintaanyagok. 20 2.3 Kultúrás közeg. 21 2.4 Molekuláris biológiai azonosítás. 21 2.4.1 DNS-izolálás. 22 2.4.2 PCR. 22 2.4.3 DNS szekvenálás. 25 2.4.4 Szekvenciaelemzés és adatbázis. 26 3. Eredmények. 27 3.1 Morfológia. 27 3.2 Molekuláris biológiai eredmények. 31 3.2.1 DNS-izolálás és PCR. 32 3.2.2 DNS-szekvenálás. 33 3.3 Orvosi dokumentumok. 57 3.4 A fülből származó összes pozitív gombás lelet demográfiai adatainak statisztikai értékelése (2006-2010). 63 4. Megbeszélés. 67 4.1 Biológiai vita. 67 4.2 Klinikai megbeszélés. 69 5. Összegzés. 74 6. Kivonat. 76 7. Irodalom. 77 Függelék. 81.

Rövidítések A. d. Aqua desztillátum, desztillált víz bp bázispár ddntp dideoxinukleotid trifoszfát dntp dezoxinukleotid trifoszfát DNS dezoxiribonukleinsav, dezoxiribonukleinsav EDTA etiléndiamintetraecetsav Eppi 1,5 ml reakcióedény EtBr etidium bromsav ETS belső átírva reakcióköz centrifugális erő RT szobahőmérséklet A. Aspergillus Taq Thermus aquaticus GG jobb hallójáratból. jobb bal bal oldali RNS ribonukleinsav bt2a/b tubulin primer o. B. leletek nélkül sp./spp. Faj/Több faj

Dobhártya (Membrana tympanica) A dobhártya a külső hallójárat és a dobüreg között háromrétegű felépítésű, hüvelyes bőr, a külső és a középfül közötti határ. Aspergillus niger otomycosisban 8

2. Anyag és módszerek 2.1 Munkalépések A munkafolyamatok szervezeti felépítése, amelyekről az alábbiakban részletesebben foglalkozunk: Jelentkezés az etikai bizottsághoz, szavazással a függelékben ENT mentőautó + a külső hallójárat kenetjei tamponok használatával A kenetek tenyésztése bakteriológiai és mikológiai táptalajon Morfológiai azonosítás Túloltás oltás Molekuláris biológiai azonosítás: Izolálás a DNS 24 óra elteltével az ITS-PCR TS-szekvenáló tubulint a két típus pontosabb megkülönböztetése érdekében. 2.2 Mintaanyagok A vizsgálatba a graz és innsbrucki fül-orr-gégészeti egyetemi ambulanciákon fülfertőzéssel diagnosztizált személyek vehettek részt. Miután a vizsgálatban résztvevőket tájékoztatták és beleegyezésüket adták, keneteket vettek a külső hallójáratból tamponokkal (Copan Sterile Transport Swabs). Aspergillus niger otomycosisokban 20

len gomba használt. A nem kódoló ITS régió variációját használják a nemzetségek és a populációk megkülönböztetésére. A PCR reakcióhoz először mesterkeveréket készítenek, amelyben az összes komponens (primer pár, a négy nukleotid, puffer és DNS polimeráz) benne van, kivéve a DNS-t. Ebből 18,8 μl-t 0,2 ml reakcióedény-láncba pipettázunk, és mindegyikhez 1,2 μl DNS-t adunk. Minden tételhez tartozik egy pozitív és egy negatív kontroll is. Az Aspergillus tubingenisis és az Aspergillus foetidus pontos megkülönböztetése érdekében a tubulin gént amplifikáltuk és szekvenáltuk a bt2a és bt2b primerekkel. Aspergillus niger otomycosisban 23

3. Eredmények 3.1 Morfológia A tenyészetet először makroszkopikus és mikroszkópos kontrollnak vetettük alá (2-7. Ábra). Részünkről nem lehetett különbséget tenni. Aspergillus niger otomycosisokban 27

2. ábra: Aspergillus foetidus tenyészet Sabouraudon 3. ábra: Aspergillus foetidus mikroszkóposan Aspergillus niger otomycosisokban 28

4. ábra: Aspergillus niger tenyészet Sabouraudon 5. ábra: Aspergillus niger mikroszkóposan Aspergillus niger otomycosisokban 29

6. ábra: Aspergillus tubingensis tenyészet Sabouraudon 7. ábra: Aspergillus tubingensis mikroszkóposan Aspergillus niger otomycosisokban 30

Az egyes Aspergillus fajok között nem találtunk szignifikáns különbséget. 3.2 Molekuláris biológiai eredmények Mivel a fekete aspergillus között nem voltak makroszkóposan vagy mikroszkóposan látható különbségek, a molekuláris biológiai azonosításra törekedtünk a riboszomális DNS ITS régiójának segítségével, amely változó és nem kódoló sok gomba számára, valamint a tubulin génhez. Gombáinkból izoláltuk a DNS-t, és a szekvenciaelemzés a PCR után kezdődött. Aspergillus niger otomycosisokban 31

3.2.1 DNS izolálás és PCR A sikeres PCR első kontroll lépése az agaróz gél volt, a mi PCR termékeinkkel. A tisztítást és a szekvenálást meg lehetett kezdeni azokon a mintákon, amelyek sávjai jól láthatóak voltak. 8. ábra: PCR-termékek (ITS) agaróz-gélje, EtBr-vel festve 9. ábra: PCR-termékek agaróz-gélje (-Tubulin), EtBr Aspergillus niger-rel festve otomycosisokban 32

3.2.2 DNS-szekvenálás ITS régió Az Aspergillus niger (CBS 554.65), az Aspergillus foetidus (CBS 56465) és az Aspergillus tubingensis (CBS 134.48) CBS-törzseit használtuk referenciaként. Az Aspergillus niger-t megkülönböztették az Aspergillus foetidustól és az Aspergillus tubingensistől a G 56 A, C 109 T, C 514 T báziskülönbségei alapján (illesztés lásd alább). Az utóbbi kettő közötti különbséget a tubulint kódoló gén alapján keresték. Aspergillus niger otomycosisokban 33

3.3 Orvosi dokumentáció 15 betegnél a pontos molekuláris biológiai azonosítás mellett a gombás eredményeket retrospektív módon hasonlították össze a klinikai eredményekkel. Az adatok a MEDOCS klinikai kommunikációs és információs hálózatból származnak. Aspergillus niger otomycosisokban 57

3.4 A fülből származó összes pozitív gombalelet demográfiai adatainak statisztikai értékelése (2006-2010) A Higiénés, Mikrobiológiai és Környezetgyógyászati Intézet mikológiai laboratóriumának 2006 és 2010 közötti időszakában a fülből származó összes pozitív gombás eredmény statisztikai értékelése 425 pozitív gombás eredményt mutatott a 360-ból. Türelmes. Összesen 478 gombát találtak, amelyek az egyes betegek ismételt megjelenésének és vegyes vagy többszörös leleteknek tulajdoníthatók. A talált gombák 28 különböző fajt tartalmaztak. Elemzésünk során a Candida parapsilosis leggyakrabban a hallójáratban volt megtalálható, majd az A. niger sensu lato következett. (6. táblázat, 10. és 11. ábra) Aspergillus niger otomycosisokban 63

6. táblázat: Gomba spektrum (2006-2010) Csíra név száma/csíra név% szám/csíra név alapján Candida parapsilosis 139 29,08% Aspergillus niger 97 20,29% Aspergillus fumigatus 85 17,78% Candida albicans 83 17,36% Aspergillus flavus 23 4,81% Pseudallescheria boydii 7 1,46% Candida glabrata 6 1,26% Candida lusitaniae (Clavispora lusitaniae) 4 0,84% gomba 3 0,63% Scopulariopsis brevicaulis 3 0,63% Aspergillus candidus 3 0,63% Trichophyton mentagrophyták 2 0,42% Candida non-albicans 2 0,42% Candida guilliermondii (Pichia guilliermondii) 2 0,42% Aspergillus sclerotiorum 2 0,42% Steril micélium 1 0,21% Scopulariopsis sp. 1 0,21% Scedosporium apiospermum 1 0,21% Paecilomyces sp. 1 0,21% Microsporum canis 1 0,21% Exophiala dermatitidis 1 0,21% Chrysosporium queenslandicum 1 0,21% Candida utilis 1 0,21% Candida tropicalis 1 0,21% Candida magnoliae 1 0,21% Candida famata 1 0,21% Candida ciferrii (Stephanoascus ciferrii) 1 0,21% Aspergillus terreus 1 0,21% Aspergillus sydowii 1 0,21% Aspergillus sp. 1 0,21% Aspergillus oryzae 1 0,21% Aspergillus glaucus 1 0,21% Összesen 478 100% Aspergillus niger otomycosisban 64

Rostos gombák (n = 233) és csírák (n = 245) (n = 478) Rostos gombák 49% Csíragomba 51% 10. ábra: A fonalas gombák és az összes pozitív gombalelet csíra diagramja (2006-2010) Rostos gombák százalékban (n = 233) 10 % 36% 12% 42% Aspergillus niger Aspergillus fumigatus Aspergillus flavus Egyéb 11. ábra: Az összes pozitív gombás lelet filamentális gombáinak diagramja (2006-2010)

Nemek szerinti megoszlás (n = 360) nő 43% férfi 57% 12. ábra: Az összes pozitív gombalelettel rendelkező betegek nemi megoszlása (2006-2010) A férfi betegeknél gyakrabban kerültek szembe gombás leletekkel a fülben. Az eredmények azonban nem vezethetők vissza a diagnosztizált otomycosisokra, és csak áttekintést nyújtanak a fülben az elmúlt öt évben talált gombákról. A pozitív gombaleletek kor szerinti megoszlása% -ban (n = 360) 20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 18 18 16 13 13 8 8 3 4 0-10 11-20 21-30 31-40 41-50 51-60 61 -70 71-80> 80 13. ábra: Minden pozitív gombalelettel rendelkező betegek életkor szerinti megoszlása (2006-2010) Az átlagos életkor 52,3 év volt, medián értéke 52, szórása pedig 19,88 év volt. A 41-50 éves és 51-60 éves korosztályok (egyenként 18%) szembesültek pozitív gombás eredményekkel. Aspergillus niger otomycosisokban 66

mint az élesztő esetében, ugyanúgy jelen voltak, mint az Aspergillus niger egyedüli jelenlétében. Végül a Graz nagyobb területén az elmúlt öt év gombás leletét ellenőrizték. 425 pozitív gombás lelet és 360 beteg közül szűk többséget találtunk az élesztők javára (51%), szemben a fonalas gombákkal (49%). A 28 különféle faj között az uralkodó izolátum a Candida parapsilosis volt (29%), a második leggyakoribb és így a leggyakoribb penész az Aspergillus niger sensu lato volt (20%). Az átlagos életkor 52,3 év volt (mediánérték: 52), szórása 19,88 év volt. A 41-50 éves és 51-60 éves korosztályok (egyenként 18%) szembesültek pozitív gombás eredményekkel. A férfiak (57%) gyakrabban szembesültek pozitív gombás eredménnyel, mint a nők (43%). Aspergillus niger otomycosisokban 75