Az étkezési búza csökkentése csökkenti a vizelet dezoxinivalenol szintjét felnőtteknél

búza

  • Absztrakt
  • bevezetés
  • A módszerek
  • A tervezés tanulmányozása
  • Food Journal
  • Vizelet DON extrakció
  • A kivont DON LC - MS elemzése
  • Kreatinin elemzés
  • Statisztikai elemzések
  • Eredmények
  • Vita
  • Szójegyzék

Absztrakt

A módszerek

A tervezés tanulmányozása

A vizsgálat 7 napos időtartamon keresztül zajlott, és 25 önkéntes vett részt benne, köztük 16 nő és 9 férfi, 21-59 évesek. Az 1. és a 2. napon ("normál étrend") félig lemért étkezési naplókat tartottak, a 3. napon pedig reggel elkészítették az első üres vizeletmintát. A 3-6. Napon („csökkentett búzaintervenció”) arra kérték az önkénteseket, hogy korlátozzák azoknak az élelmiszereknek a listáját, amelyek tartalmazhatnak búzát (kenyér, sütemények, tészták, reggeli gabonapelyhek stb.), És helyettesítsék azokat a listán szereplő tételekkel. javasolt alternatívák (pl. rizs, burgonya). A tápláléknapló 5. és 6. napját ismét tartották, és a 7. napon elkészítették az első üres vizeletmintát reggel. A vizsgálat előtt minden önkéntestől tájékozott beleegyezést kaptak, és etikai jóváhagyást kaptak. Beszerezték az NHS Kutatási Etikai Testületétől, Bradford, Egyesült Királyság. .

Food Journal

Az élelmiszer-naplókat teljesen kódolták a Microsoft Access-en alapuló belső élelmiszer-elemző szoftver segítségével, amely az Egyesült Királyságbeli élelmiszer-összetételt használja (Holland et al., 1992). A beavatkozásnak való megfelelés értékeléséhez összehasonlítottuk az egyes élelmiszercsoportok (kenyér, sütemények, reggeli gabonafélék és tészta) fogyasztásának gyakoriságát a szokásos étrend (1. és 2. nap) és a beavatkozásé (5. és 6. nap) során. Ezenkívül megbecsülték egyes élelmiszerek súlyát, és meghatározták a búza alapú élelmiszerek fogyasztását az egyes egyének számára a fő búzaforrások (kenyér, reggeliző gabonafélék, tekercs, tészta, sütemények és egyebek. Sütik) alapján. Az étrendben egyéb búzaforrások találhatók, például szószok és sűrítők. A teljes búza bevitelhez való hozzájárulásuk azonban viszonylag csekély jelentőségűnek számított.

Vizelet DON extrakció

A teljes vizelet DON értékét Meky és mtsai módszerének módosításával mértük. (2003) és a 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Ausztria) használata SI-ként. Az IS olyan keverék volt, amely főleg 13 C 15-DON-ot (molekulatömeg (M) 311), de 13 C 14-DON-t (M. 310; 16,8%) is tartalmazott. Nemrégiben megállapították ennek a vegyületnek az IS-nek való alkalmasságát a DON-szennyezett gabonafélék LC-MS/MS elemzésében (Haubl et al., 2006).

A vizeletvizsgálat során a mintákat centrifugáltuk (2000 g; 15 perc; 4 ° C), és 4 ml vizeletnél SI-t adtunk hozzá, hogy 5 ng/ml végkoncentrációt kapjunk. Az egyes minták pH-ját 6, 8-ra állítottuk, és 23 000 U β-glükuronidázt (IX-A típus Escherichia coli-ból; Sigma) 1 ml KH2P04-ben 75 mmólban inkubáltunk vízfürdőben 18 órán át. . Emésztés után a mintákat centrifugáltuk (2000 g; 15 perc; 4 ° C), és a felülúszót 16 ml-re hígítottuk PBS-sel (pH 7,2). A hígított anyagot DONtest ​​immunoaffinitás oszlopokon (Vicam, Watertown, MA, USA) engedtük át, hogy a DON-t a gyártó utasításainak megfelelően extraháljuk. A DON-ot 4 ml metanollal eluáltuk az oszlopokból, és az extraktumokat vákuumban szárítottuk Savant Speed ​​Vac alkalmazásával, és elemzés céljából 250 ul 10% (v/v) etanolban oldottuk fel. Az ismert DON-szinttel rendelkező vizeletminta két alikvot részét szintén SI-vel egészítették ki, és mindegyik mintadarabot elemezték minőségellenőrzésként (QC).

A kivont DON LC - MS elemzése

A DON-t HPLC-vel (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, USA) analizáltuk MS-sel (Micromass Quattro Micro triple quadrupole tömegspektrométer, Manchester, Egyesült Királyság). A DON elválasztást Luna C18 oszlopon (150 × 4,6 mm, 5 µm részecskeméret (Phenomonex, Macclesfield, Egyesült Királyság)) végeztük. A mozgó fázist 20% -os metanolban indítottuk el, és 10 percig izokromatikus kezelésnek vetettük alá. fázis 6 percig Ezután egy percet hajtunk végre 75% metanollal, majd 20% metanolt vezetünk be a rendszer további 11 percen át ezen a koncentrációban történő kiegyensúlyozásával, az áramlási sebesség 1 ml/perc és az injektálási térfogat 25 μl. a HPLC-oszlopból az eluenst az MS deszolvációs kamrájába irányítottuk, a maradékot pedig a kisülésre juttattuk.