PDF QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA csak in vitro diagnosztikához - CLIA Complexity High - Free

Rövid leírás

Töltse le a QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA in-Vitro diagnosztikához CLIA komplexitás: magas.

csak

Leírás

QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA

Csak „In-Vitro Diagnostics” esetén: CLIA komplexitás: magas

Rendeltetésszerű felhasználás A QUANTA LiteTM F-Actin IgA egy enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat (ELISA) az emberi szérum simaizomzatának F-aktin elleni IgA antitestjeinek félkvantitatív kimutatására. Celiaciára utaló klinikai leletekkel rendelkező betegeknél az IgA osztályú anti-F-aktin antitestek jelenlétét használják fel a jelentős villi atrófia valószínűségének felmérésében.

A vizsgálati elv Az affinitáskromatográfiával tisztított F-aktin antigént az eredeti konfiguráció megtartása mellett a polisztirol mikrotiter lemez üregeihez kötöttük. Az előhígított kontrollokat és a hígított betegszérumokat különböző üregekbe pipettázzuk. A meglévő F-aktin antitestek kötődnek az antigénhez. A minta/kontroll maradékát mosással eltávolítjuk. Az enzimmel jelölt anti-humán IgA-t a lyukakba pipettázzák, és egy második inkubáció során a páciens antitestjéhez kötődnek. Miután a maradék konjugátumot egy további mosási lépésben eltávolítottuk, kromogén szubsztrátot adunk hozzá. A kapott színreakció intenzitását a mikrotiter lemezes fotométerrel való leállítás után mérjük. A kvantitatív értékelést úgy végezzük, hogy összehasonlítjuk a betegek extinkciós értékeit a kalibrátor értékével.

A tesztcsomag tartalma 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Mikrotiter ELISA lemez, nagymértékben tisztított F-aktin antigénnel (12-1 x 8 üreg) bevonva, fólia csomagolású csíptartóval és szárítószer ELISA negatív kontrollval, 1 üveg stabilizátorral ellátott puffer és humán szérum, F-aktin elleni emberi antitestek nélkül, felhasználásra előre hígítva, 1, 2 ml F-Actin IgA ELISA alacsony pozitív (kalibrátor), 1 üveg stabilizátorral ellátott puffer és emberi szérum F-Actin elleni antitestekkel, előre hígított használatra kész, 1,2 ml F-Actin IgA ELISA magas pozitív (pozitív kontroll), 1 üveg puffer stabilizátorral és humán szérummal F-aktin elleni antitestekkel, előre hígított, használatra kész, 1,2 ml HRP minta hígítóval, 1 üveg - rózsaszínűre Tris-pufferolt sóoldattal, Tween 20, fehérje stabilizátorokkal és tartósítószerekkel, 50 ml HRP mosó koncentrátummal, 1 üveg 40x koncentrátummal - Pirosra festett pufferolt sóoldattal és Tween 20-mal, 25 ml. A hígításhoz lásd az utasítások megfelelő fejezetét. 1

HRP IgA konjugátum, (kecske), anti-humán IgA, 1 üveg - sárga színű, pufferrel, fehérje stabilizátorokkal és tartósítószerekkel, 10 ml TMB kromogén, 1 üveg stabilizátorokkal, 10 ml HRP stop oldat, 0,344 M kénsav, 1 üveg - színtelen, 10 ml

Óvintézkedések 1. 2. 3. 4.

Az összes reagenset 2-8 ° C-on tárolja. Ne fagyjon le. A reagensek az elhasználódásuk végéig stabilak, ha az előírásoknak megfelelően tárolják és kezelik. Helyezze vissza a fel nem használt mikrohullámú csíkokat az eredeti csomagolásba, zárja le őket légmentesen és tegye vissza a hűtőszekrénybe. A hígított mosópuffer egy hétig stabil, 2-8 ° C-on.

Minták A vizsgálatot szérummintákkal kell elvégezni. Azidok vagy más stabilizátorok hozzáadása a szérummintákhoz hátrányosan befolyásolhatja az eredményeket. Mikrobakteriálisan szennyezett, hemolitikus, lipémiás vagy hő által inaktivált mintákat nem szabad használni. A vérvétel után a szérumot el kell választani a vértől. Az NCCLS H18-A3 dokumentum a következő mintavételi feltételeket ajánlja a betegminták számára: 1) A mintákat ne tárolja szobahőmérsékleten 8 óránál tovább. 2) Ha a vizsgálatot nem lehet 8 órán belül elvégezni, tárolja a mintákat hűvös helyen, 2-8 ° C-on. 3) Ha a vizsgálatot 48 órán belül nem lehet elvégezni, a mintát -20 ° C vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten kell lefagyasztani. A fagyasztott mintákat felolvasztás után és a vizsgálat előtt alaposan fel kell rázni

Vizsgálati eljárás A tesztkészletben lévő anyag 1 1 1 1 1 1 1 1 1

F-Actin ELISA mikrotiter lemez (12-1 x 8 üreg), csíptartóval 1,2 ml előhígított ELISA negatív kontroll 1,2 ml előhígított F-Actin IgA ELISA alacsony pozitív kontroll 1,2 ml előhígított F-aktin IgA ELISA magas pozitív kontroll 50 ml HRP minta hígító 25 ml HRP mosó koncentrátum, 40-szeres koncentrátum 10 ml HRP IgA konjugátum (kecskéből), anti-humán IgA 10 ml TMB Chromogen 10 ml HRP stop oldat, 0,344 M kénsav

Szükséges kiegészítő anyag Pipetták 5, 100, 200-300 és 500 µL eldobható pipettahegyekhez bikromatikus méréshez)

Vizsgálati előkészítési módszer 1. 2.

Az összes reagenst és mintát szobahőmérsékletre (20-26oC) hozza, és alaposan keverje össze. Cserélje ki a mosókoncentrátum teljes tartalmát (25 ml) 975 ml desztillált vízzel. keverjük össze (1:40 hígítás). A hígított pufferoldat egy hétig stabil, 2-8 ° C-on. Ha a teljes mikrotiter lemezt nem akarja egyszerre használni, akkor 2 ml koncentrátumot és 78 ml desztillált vizet adhatunk 16 üreg kialakításához. vegyesen. Hígítsuk a szérummintákat 1: 101 arányban úgy, hogy 5 µL szérumot és 500 µL használatra kész mintahígítót összekeverünk. A hígított mintákat 8 órán belül meg kell vizsgálni. Ne hígítsa az F-Actin IgA ELISA alacsony pozitív kontrollt, az F-Actin IgA ELISA magas pozitív kontrollt és az ELISA negatív kontrollt. Minden vizsgálathoz két üreg szükséges a három kontroll mindegyikéhez, és egy vagy két üreg a beteg mintájához (ajánlott, hogy az összes mintát készítsük két példányban, amíg el nem érjük a kívánt pontosságot és reprodukálhatóságot).

Az F-Actin IgA ELISA alacsony pozitív kontrollt, az F-Actin IgA ELISA magas pozitív kontrollt és az ELISA negatív kontrollt minden tesztfuttatással együtt kell végezni annak biztosítása érdekében, hogy az összes reagens és a tesztfutás megfelelően működjön. Mivel az F-Actin IgA ELISA alacsony pozitív kontroll, az F-Actin IgA ELISA magas pozitív kontroll és az ELISA negatív kontroll előzetesen hígított, a kontrollmintákhoz nem szükséges a beteg minta hígítási lépése. A minőségbiztosítás további ellenőrzései a nemzeti vagy a 3. irányelvek szerint hajthatók végre

nemzetközi szabályozó vagy akkreditáló hatóságok. Megfelelő kontrollokat humán szérumból nyerhetünk és 25 ° C-on tesztelhetünk

Negatív Kétséges Pozitív 1. 2. 3.

A lisztérzékenységben szenvedő betegek pozitív anti-F-aktin IgA eredménye a súlyos villi atrófia valószínűségének növekedését jelzi. A negatív eredmény azt jelzi, hogy nincsenek F-aktin IgA antitestek vagy koncentrációk a tesztrendszer kimutatási határa alatt. Javasoljuk a laboratóriumi eredményekhez a következő megjegyzés hozzáadását: „Az INOVA QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA alkalmazásával a következő eredményeket kaptuk. Az F-aktin IgA értékeket, amelyeket más gyártók tesztrendszereivel határoztak meg, nem lehet felcserélni. A talált IgA-titer szintje nem korrelálható a végpont-titerrel. "

Az eljárás korlátai 1. 2. 3. 4.

A páciens szérumában lévő immunkomplexek vagy más immunglobulin-aggregátumok nem specifikus kötődést és hamis pozitív eredményt okozhatnak. Nem minden celiakia pozitív az F-aktin IgA antitestekre. Nem minden SMA pozitív mintában vannak F-aktin IgA antitestek. Az F-aktin-IgA antitestek kimutatását májbetegségben körültekintően kell értelmezni, mivel az F-aktin-IgG antitestek jelenléte ebben a betegségcsoportban gyakran összefügg az F-aktin-IgA antitestekkel, amelyek esetleg nem állnak kapcsolatban a bélpatológiával. Az F-aktin IgA antitesteket csak lisztérzékenységben szenvedő betegeknél szabad mérni a bélkárosodás felmérésének segédeszközeként. Ennek a tesztnek az eredményeit a klinikai eredményekkel és más szerológiai vizsgálatokkal együtt kell felhasználni. A szérumtól eltérő minták teljesítményjellemzőit nem határozták meg. 4

Teljesítményadatok Várható értékek Normál tartomány A látszólag egészséges személyek (250 férfi és 250 nő) 500 mintájú paneljét teszteltük a QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA készlettel. Az életkor 18 és 80 év között volt (mediánérték = 41). A vizsgálat specifitása 92,2% (461/500) volt. A 39 mintából 3-ban pozitívnak találták a tTG-IgA antitesteket, így ezek diagnosztizálhatatlan cöliákiás betegek lehetnek. E három minta egyike szintén endomysium-pozitív volt, és gyakorlatilag biztos, hogy celiakia. Becslések szerint a celiakia gyakorisága az Egyesült Államok normális lakossága körében 133-ból 1; Ezért a normál kohorszban nem diagnosztizált cöliákiás betegek bizonyítékai nem váratlanok

Klinikai érzékenység és specifitás Mivel a QUANTA LiteTM F-Actin IgA Assay-t a celiakia betegekben a bélkárosodás valószínűségének felmérésére tervezték, az érzékenységet és a specificitást 445 biopsziás eredetű minta alapján határozták meg. A 445 minta közül 157-nek volt 3-as és 288-as típusú patológiája Marsh szerint. 27 N = 445 Marsh bevágása F-aktin IgA egységek M3a/b/c M0, M1, M2 összes mennyisége Pos (> 24, 9 egység) 76 14 90 Neg (24,9 egység) 60 30 90 Neg (