Immunszabályozás nyálkahártya szabályozó Foxp3 pozitív T-sejtekkel gyermekeknél és serdülőknél
Immunszabályozás nyálkahártya szabályozó Foxp3 pozitív T-sejteken keresztül lisztérzékenységben szenvedő gyermekeknél és serdülőknél Értekezés tudományos fokozatért Dr. med. a Lipcsei Egyetem Orvostudományi Karán, benyújtotta: Michael Bauch, született 1986. április 24-én Karl-Marx-Stadtban, a Lipcsei Egyetem gyermek- és serdülőkorúak klinikáján és poliklinikáján Témavezető: PD Dr. med. habil. Holm H. Uhlig döntés a doktori fokozat odaítéléséről: 2012.09.18
Tartalomjegyzék Tartalomjegyzék Bibliográfiai leírás. 2 Tartalomjegyzék. 3 Rövidítések listája. 5 1. Bevezetés. 6 1.1 Cöliákia. 6 1.1.1 Epidemiológia. 6 1.1.2. Etiopatogenezis. 6 1.1.3 Diagnosztika. 10 1.1.4 Terápia. 11 1.1.4.1 Gluténmentes étrend. 11 1.1.4.2. Kísérleti terápiás stratégiák. 11 1.2 Szabályozó T-sejtek. 12 1.2.1 A szabályozó T-sejtek típusai. 13 1.2.2 CD4 + CD25 + Foxp3 + szabályozó T-sejtek szuppressziós mechanizmusai. 14 1.3 A dolgozat célja. 17 2. Anyag és módszerek. 19 2.1 Etikai szavazás. 19 2.2 A vizsgálat menete. 19 2.3 A vizsgált populáció toborzása. 20 2.3.1 Celiaciás betegek csoportja. 22 2.3.2 Kontrollcsoport. 22 2.4 Telefonos interjú Anamnesztikus adatok gyűjtése. 23 2.5 Antropometriai adatok. 23 2.6 Klinikai kémia. 24 2.7 Celiac betegség - specifikus antitestek. 24 2.8 A szövettani metszetek festése. 25 2.8.1 A szövetminták előkészítése. 25 2.8.2 Hematoxilin-eozin (HE) festés. 25 2.8.3 Immunhisztokémiai festés. 26 2.8.4 Immunfluoreszcens festés. 27 2.8.5 Mikroszkópia és fényképezés. 28 2.9 A szövettani metszetek morfometriai mérése. 28 2.9.1 Villi és kriptamérés. 28 3
Rövidítések listája Rövidítések listája BMI testtömeg-index CD differenciálódási klaszter CTLA-4 Citotoxikus T-limfocitákhoz kapcsolódó antigén 4 Cy5 Cianin 5 DAB 3,3-Diaminobenzidin DAPI 4,6-Diamidino-2-fenilindol-dihidroklorid FITC Fluoreszcein-tiocianát Foxp3 3 Forkhead Box Prk Fúziós peptid HA hipoallergén HE hematoxilin és eozin HLA humán leukocita antigén HRP Torma peroxidáz Torma peroxidáz IDO Indolamin-2,3-dioxigenáz IEL Intraepithelialis limfociták IgA/IgG immunglobulin A vagy immunglobulin G, IL IP interleukinopulin, IL interleukinopulin, interglukin Gulin, IL interleukinopulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglobulin, poliglutin enteropátia X-kapcsolt szindróma LAG-3 limfocita antigén 3 MCV átlagos korpuszkuláris térfogat (átlagos eritrocita térfogat) MHC Fő hisztokompatibilitási komplex MICA MHC I. osztályú polipeptidhez kapcsolódó szekvencia A MMP mátrix metalloproteinázok Természetes gyilkos sejtek NKG2D receptorai PBST foszfáttal pufferolt sóoldat Tween-20-mal Referencia egységek SDS Standard Dev iation pontszám TBS Tris pufferolt sóoldat TGF-β transzformáló növekedési faktor béta Th T segítő sejt (CD4 + CD3 + T sejtek) TNFα tumor nekrózis faktor alfa 5
1. Bevezetés Jelen tanulmány a következő témákat kívánja megvizsgálni: 1. A lisztérzékenységben szenvedő gyermekek és serdülők csoportját klinikailag, paraklinikusan, anamnesztikusan és szövettanilag kell jellemezni. Különösen a celluláris és humorális immunjelzőket hasonlítják össze a lisztérzékenységben szenvedők és a celiakia nélküli betegek csoportja között. 2. Az egyik hangsúly a Foxp3 + szabályozó T-sejtek kimutatására és mennyiségi meghatározására a lisztérzékenységben szenvedő gyermekek és serdülők vékonybél nyálkahártyájában és a kontrollokban villous atrophia nélkül. 3. Cél, hogy megvizsgáljuk, vajon a nyálkahártya Foxp3 + szabályozó T-sejtjeinek száma a gyulladás helyén korrelál-e anaaltesziás, antropometrikus, szerológiai, hematológiai és szövettani markerekkel celiaciás betegeknél. Különösen a korfüggőséget és a szabályozó T-sejtek lehetséges nemi különbségeit kell megvizsgálni. 18
2. Anyag és módszerek Az anamnesztikus adatok összegyűjtése érdekében az első kapcsolatfelvétel után rövid interjút készítettek a szülőkkel. Amint megkapta az írásbeli beleegyezést, archivált vékonybél szövetmintákat kértek a Kórtani Intézettől. Ugyanakkor retrospektíven rögzítették az endoszkópia idején az egyes betegek antropometriai, klinikai, paraklinikai és szerológiai adatait. A szövetminták átadása után kivágták, szövettanilag megfestették és kiértékelték. Az összes rögzített paraméter egy Excel adatbázisba került (2.1. Ábra). 2.1. Ábra A tanulmány gyakorlati menetének áttekintése. 2.3 A vizsgálati populáció toborzása Kezdetben 195 gyermek és serdülő szüleivel vették fel a kapcsolatot. Ezen betegek közül 63-nál diagnosztizálták a lisztérzékenységet. A celiaciát biopsziával kizárták 132 betegnél. Csak 17 szülő (8,7%) volt hajlandó részt venni a vizsgálatban az első kapcsolatfelvétel után. A végső részvételhez a 20. írásbeli beleegyezése