Phospho-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4) Nyúl mAb

Kezeletlen (-) vagy hTGF-β3 # 8425 (+) -val kezelt HaCaT-sejtek kivonatainak Western blot-analízise az SB 431542 TGFR inhibitor hiányában vagy jelenlétében, Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) nyúl mAb (felső) vagy Smad2/3 (D7G7) XP ® nyúl mAb # 8685 (alsó).

Foszfo-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Nyúl mAb 8828

phospho-smad2

Kezeletlen (-) vagy hTGF-β3 # 8425 (+) -val kezelt HaCaT-sejtek kivonatainak Western blot-analízise az SB 431542 TGFR inhibitor hiányában vagy jelenlétében, Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) nyúl mAb (felső) vagy Smad2/3 (D7G7) XP ® nyúl mAb # 8685 (alsó).

  • Helyi képviselője
  • A helyi vásárlási információk
  • Antitest-garancia
  • GYIK
  • Technikai segítség
  • Vizsgálati jegyzőkönyv
  • Támogató adatok
  • Kapcsolódó termékek
  • Termékhasználat
  • Protokollok
  • Háttér
  • Útvonalak és fehérjék
  • Idézetek és vélemények

Támogató adatok

REAKCIÓKÉPESSÉG H M R Mk
ÉRZÉKENYSÉG Endogén
MW (kDa) 52, 60
Forrás/izotípus Nyúl IgG

Alkalmazáskulcs:

  • W.-Nyugati film
  • IP-Immuncsapadék
  • IHC-Immunhisztokémia
  • Forgács-Chromatin immunprecipitáció
  • HA-Immunfluoreszcencia
  • F.-Áramlási citometria
  • E-P-ELISA peptidek

Faj keresztreaktivitási kulcs:

  • H-Emberi
  • M.-Egér
  • R.-tanács
  • Hm-hörcsög
  • Mk-Majom
  • Házasodik-Nyérc
  • C.-Csirke
  • Dm-D. melanogaster
  • x-Xenopus
  • Z-Zebrafish
  • B.-Szarvasmarha
  • Dg-Kutya
  • Oldal-malac
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • úr-Ló
  • Alles-Minden faj várható
Smad2/3 (D7G7) XP® nyúl mAb # 8685
Smad2/3 antitest # 3102
Smad2 (D43B4) XP® nyúl mAb # 5339
Smad2/3 antitest # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) Nyúl mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Nyúl mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Nyúl mAb # 3108
Smad3 (C67H9) nyúl mAb # 9523
Phospho-Smad1/5 (Ser463/465) (41D10) Nyúl mAb # 9516
Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Nyúl mAb # 18338

Termékhasználati információk

Tárolás

10 mM nátrium-HEPES-ben (pH 7,5), 150 mM NaCl-ban, 100 ug/ml BSA-ban, 50% glicerinben és kevesebb, mint 0,02% nátrium-azidban tartalmazzák. -20 ° C-on tárolandó. Ne ossza meg az antitestet.

Jegyzőkönyv

Western Blotting Protocol

Western-blotok esetén inkubáljuk a membránt hígított primer antitesttel 5% w/v BSA-ban, 1X TBS, 0,1% Tween® 20-ban 4 ° C-on, enyhe rázással egy éjszakán át.

FOKOZAT: Kérjük, olvassa el az elsődleges antitest termék weboldalát az antitest ajánlott hígításához.

A. Oldatok és reagensek

A minta előkészítésétől a detektálásig a Western Blot-hoz szükséges reagensek egy kényelmes készletben vannak: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

FOKOZAT: Készítsen oldatokat fordított ozmózisú ionmentes (RODI) vagy azzal egyenértékű minőségű vízzel.

B. Fehérje blotolás

A minta előkészítésének általános protokollja.

  1. A sejteket úgy kezeljük, hogy a szabályozót tartalmazó friss táptalajt adunk a kívánt ideig.
  2. Szívja be a táptalajokat kultúrákból; mossa a sejteket 1X PBS-sel; hehezetes.
  3. A sejteket lizáljuk 1X SDS mintapuffer hozzáadásával (100 µl/üreg 6-lyukú lemez vagy 500 µl 10 cm átmérőjű lemez esetén). Azonnal kaparja le a sejteket a lemezről, és helyezze az extraktumot egy mikrocentrifuga csőbe. Jégen tartani.
  4. Szonikáljon 10-15 másodpercig a sejt lízisének befejezéséhez és a DNS nyírásához (a minta viszkozitásának csökkentése érdekében).
  5. 20 µl mintát melegítünk 95-100 ° C-on 5 percig; jégen hűtsük le.
  6. Mikrocentrifuga 5 percig.

Tegyen 20 µl-t SDS-PAGE gélre (10 cm x 10 cm).

FOKOZAT: Előre festett molekulatömeg-markerek (# 13953, 5 µl/sáv) betöltése az elektrotranszfer ellenőrzésére és a biotinilezett fehérje létra (# 7727, 10 µl/sáv) ajánlása a molekulatömeg meghatározásához.

  • Elektrotranszfer nitrocellulóz membránra (# 12369).

    • C. Membrán blokkoló és antitest inkubációk

    FOKOZAT: A térfogat 10 cm x 10 cm (100 cm 2) membránra vonatkozik; különböző méretű membránok esetén állítsa be ennek megfelelően a hangerőt.

    I. A membrán blokkolása

    1. (Opcionális) Az átvitel után mossuk a nitrocellulóz membránt 25 ml TBS-szel 5 percig szobahőmérsékleten.
    2. Inkubálja a membránt 25 ml blokkoló pufferben 1 órán át szobahőmérsékleten.
    3. Háromszor 5 percig mossuk 15 ml TBST-vel.

    II. Elsődleges antitest inkubáció

    1. Inkubálja a membránt és az elsődleges antitestet (a termék weboldalán ajánlott megfelelő hígítással és hígítóval) 10 ml elsődleges antitest-hígító pufferben, enyhe keverés mellett egy éjszakán át 4 ° C-on.
    2. Háromszor 5 percig mossuk 15 ml TBST-vel.
    3. Inkubálja a membránt anti-nyúl IgG-vel, HRP-hez kapcsolt antitesttel (# 7074 1: 2000-nél) és anti-biotin, HRP-hez kötött antitesttel (# 7075 1: 1000–1: 3000-nél), hogy kimutassa a biotinilezett fehérje markereket 10 ml oldatban. blokkoló puffer enyhe keverés mellett 1 órán át szobahőmérsékleten.
    4. Háromszor 5 percig mossuk 15 ml TBST-vel.
    5. Folytassa az észlelést (D. szakasz).

    D. Fehérjék kimutatása

    Használati útmutató:

    1. A membránhoz kötött HRP-t (antitest konjugátum) háromszor mossuk 5 percig TBST-ben.
    2. Készítsen 1X SignalFire ™ ECL reagenst (# 6883) egy rész 2X A reagens és egy rész 2X B reagens hígításával (pl. 10 ml-re, adjon hozzá 5 ml A reagenst és 5 ml B reagenst). Jól összekeverni.
    3. Inkubálja az aljzatot membránnal 1 percig, távolítsa el az oldat feleslegét (a membrán nedves marad), csomagolja műanyagba és tegye röntgenfilmnek.

    * Kerülje a bőr ismételt érintkezését.

    2005. június

    felülvizsgált 2020 június

    Specifitás/érzékenység

    Foszfo-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) A nyúl mAb felismeri a Smad2 fehérje endogén szintjét, amikor a Ser465-nél és a Ser467-nél foszforilálódik. Ez az antitest a Smad3 fehérje endogén szintjét is felismeri, ha csak Ser422-et foszforilez, vagy mind Ser423, mind Ser425-nél.

    Faj reaktivitás:

    Ember, egér, patkány, majom

    Forrás/tisztítás

    Monoklonális antitestet állítunk elő állatok immunizálásával egy szintetikus peptiddel, amely megfelel az emberi Smad2 fehérje Ser465/467 körüli maradékainak.

    Háttér

    A szignál transzdukciós molekulák Smad családjának tagjai egy kritikus intracelluláris út komponensei, amelyek a TGF-β jeleket továbbítják a sejt felszínéről a sejtmagba. A Smads három külön osztályát határozták meg: a receptor által szabályozott Smads (R-Smads), amelyek közé tartoznak a Smad1, 2, 3, 5 és 8; a közös közvetítő Smad (társ-Smad), Smad4; és az antagonista vagy gátló Smads (I-Smads), Smad6 és 7 (1-5). Az aktivált I típusú receptorok specifikus R-Smadokkal társulnak és konzervált karboxiterminális SSXS motívumon foszforilálják őket. A foszforilezett R-Smad disszociál a receptortól és heteromer komplexet képez a co-Smaddal (Smad4), lehetővé téve a komplex transzlokációját a sejtmagba. A magba kerülve Smads különféle DNS-kötő fehérjéket célozhat meg a transzkripciós válaszok szabályozására (6-8).

    Útvonalak és fehérjék

    Fedezze fel a termékhez kapcsolódó útvonalakat és fehérjéket.