Retenciós idő ingadozása - 1. rész: SHIMADZU DEUTSCHLAND

9 - retenciós idő 1. rész

10 - retenciós idő 2. rész

11 - Oszlopélet - 1. rész

12 - Oszlopélet - 2. rész

ingadozása

A detektálás leggyakoribb típusai a HPLC-ben az UV-abszorpció, a fluoreszcencia és a törésmutató-detektálás. Ezek a kimutatási típusok nem anyagspecifikusak, és a legtöbb esetben az analitákat a retenciós idő alapján osztják ki. Ha a retenciós idő ingadozik, hibás eredmények történhetnek. Ezért a retenciós idő megismételhetősége nagyon fontos.

A következőkben, valamint a következő héten bemutatjuk a különféle hatásokat.

1. A hőmérséklet hatása

Mint a HPLC sok problémájával, a hőmérséklet is befolyásolja a retenciós időt. Minél magasabb a hőmérséklet, annál alacsonyabb a mozgófázis viszkozitása. Ezért a rendszerben az ellennyomás is csökken a hőmérséklet emelkedésével. Alapvető szabály, hogy az 1 ° C-os hőmérsékletváltozás 1-2% -os eltolódást eredményez a retenciós időben. Ezért a hőmérséklet-ingadozások miatti időeltolódás nagyobb a későn eluált analitok esetében. A következő négy parabént különböző hőmérsékleteken mértük.

Ha összehasonlítja a mérést 20 és 50 ° C-on, a teljes futási idő majdnem a felére csökken. Ez a hatás természetesen felhasználható a módszer optimalizálására vagy rövidítésére is, feltéve, hogy ez megmarad az oszlop specifikációiban. Nagyon magas hőmérsékleten azonban a legtöbb oszlop rövidebb élettartammal számolhat.

Ha azonban a hőmérsékletet optimalizálásra kell használni, akkor meg kell jegyezni, hogy nem minden analit egyformán reagál a hőmérséklet-változásra. Amint azt a jobb oldali példa mutatja, nagyon másképp viselkedhetnek. Míg az analitokat 20 ° C-on elválasztják, a szorbinsav és a benzoesav 30 ° C-on együtt eluálódik. Ha a hőmérsékletet tovább emelik, az elúciós szekvencia akár meg is fordítható. Ha ezt nem veszik észre, itt helytelen eredmények is előfordulhatnak.

Legjobb esetben használjon oszlopkemencét, hogy az oszlop hőmérséklete a lehető legtartóbb legyen.

1: szorbinsav, 2: benzoesav, 3: metil-parabén

2. Az áramlási sebesség változása

Minden szivattyúnak van egy bizonyos számú fogyó alkatrésze, amelyeket rendszeres időközönként ki kell cserélni. Például a legtöbb dugattyútömítés meghatározott térfogatú szivattyúzásra van megadva. Ha a kopás túlságosan előrehaladt, akkor szivároghatnak, és így befolyásolhatják az áramlási sebességet. Ha a retenciós idők ingadoznak, akkor a hibás szivattyú is probléma lehet.

A szivattyúk ellenőrzésének legegyszerűbb módja a mérés. Ehhez vegyen egy mérőhengert, csatlakoztasson egy ellennyomású kapillárt közvetlenül a szivattyúhoz, és állítson be egy meghatározott áramlást. Most hasonlítsa össze egy bizonyos térfogat pumpálásának idejét a beállított áramlási sebességgel.

Rendszeres időközönként ellenőrizze a HPLC fogyóeszközeit. Tartsa készen a pótalkatrészeket is, hogy a hibás alkatrészeket gyorsan ki lehessen cserélni.

Sajnos minden olyan intézkedés, amely a kromatográfiai körülmények stabilizálódásához vezet, kevéssé segít, ha nagyon robusztus módszerekkel dolgozik. Ilyen körülmények között még a kis változások is, például a hőmérséklet vagy az eluens hatásai, nagy hatással vannak a retenciós időre.

Ennek eredményeként a mintákat gyakran meg kell ismételni, vagy az értékelést manuálisan át kell dolgozni. Ez nagy probléma, főleg szabályozott környezetben.

Jobb, ha több időt fordítunk robusztus módszerek kifejlesztésére. Utólag kevesebb erőfeszítést és több időt fordít a rutinra, és az előzőleg befektetett idő nagyon gyorsan amortizálódik.

Fontos dolgok minden nap:

Tábornok:

  • Végezzen rendszeres alkalmassági vizsgálatokat
  • Rendszeres időközönként ellenőrizze a fogyóeszközöket
  • A referenciaoldatok retenciós idejének, oldódásának stb. Dokumentálása

Rendszer:

  • A hőmérséklet szabályozásához használjon oszlopkemencét
  • Oszlopnapló vezetése
  • Dokumentumok karbantartása

A következő hét az eluens összetételének, az oszlopnak és az egyensúlyi időnek a hatásával szintén a retenciós idő ingadozását veszi figyelembe.