A bélgyulladás vizsgálata az IBD protokoll DSS által kiváltott modelljében (francia nyelvre fordítva)

Összegzés

A gyulladásos bélbetegségek kísérleti modelljei lehetővé tették számunkra a patogenezissel összefüggő immunválaszok veleszületett és adaptív komplexumának vizsgálatát. A szövettani pontszám, a pro-gyulladásos citokinek számszerűsítése és a mieloperoxidáz-aktivitás segítségével meg lehet kezdeni értékelni ezeket a gyulladásos bélbetegségben megfigyelt válaszokat.

Absztrakt

A gyulladásos bélbetegség (IBD) számos bélbetegséget ölel fel, amelyek közül a leggyakoribb a fekélyes vastagbélgyulladás (UC) és a Crohn-kór (CD). Az UC és a CD egyaránt, ha jelen vannak a vastagbélben, hasonló tünetek profilját generálják, amelyek lehetnek hasmenés, végbélvérzés, hasi fájdalom és fogyás. 1 Bár az IBD patogenezise továbbra sem ismert, többtényezős betegségként írják le, amely genetikai és környezeti összetevőket egyaránt magában foglal. 2

Számos állatmodell és vastagbélgyulladás változó létezik, amelyek hasonlítanak az IBD számos jellemzőjére. A vastagbélgyulladás állatmodelljei a bizonyos fajok fogékony törzseiben spontán kialakulóktól azokig terjednek, amelyek meghatározott koncentrációjú colitis-indukáló vegyi anyagok, például nátrium-dextrán-szulfát (DSS) beadását igénylik. A bélgyulladás kémia által kiváltott modelljei az IBD leggyakrabban használt és legjobban leírt modelljei. A DSS ivóvízben történő beadása akut vagy krónikus vastagbélgyulladást okoz, az adagolási protokolltól függően. 3 SSD-t kapott állat súlyvesztést és laza székletet vagy hasmenést mutat, néha rektális vérzéssel. Itt leírjuk azokat a módszereket, amelyekkel a vastagbélgyulladás kialakulása és az ebből eredő gyulladásos válasz jellemezhető a DSS beadása után. Ezek a módszerek magukban foglalják a vastagbél hematoxilinnel/eozinnal festett szakaszainak szövettani elemzését, a gyulladásgátló citokinek mérését és a myeloperoxidase (MPO) meghatározását, amely a gyulladás markerként használható. 6.

A gyulladásos reakció mértékét a betegség állapotában a klinikai tünetek jelenlétével vagy a nyálkahártya szövettanának megváltoztatásával lehet értékelni. A vastagbél szövettani károsodását egy pontozási rendszer alkalmazásával értékelik, amely figyelembe veszi a kriptarész architektúrájának elvesztését, a gyulladásos sejtek beszivárgását, az izomcsapódást, a serlegsejtek kimerülését és a kriptát. Kvantitatív módon a gyulladásos tulajdonságokkal rendelkező akut gyulladásgátló citokinek, mint például az interleukin (IL) -1β, IL-6 és a tumor nekrózis faktor (TNF) -α szintje meghatározható a klasszikus ELISA módszerekkel. Ezenkívül az MPO aktivitás kolorimetriás vizsgálattal mérhető és gyulladásindexként használható. 8.

Kísérleti vastagbélgyulladás esetén a betegség súlyossága gyakran korrelál a megnövekedett MPO aktivitással és a gyulladásgátló citokinek magas szintjével. A vastagbélgyulladás és a károsodáshoz társuló gyulladás súlyosságát a széklet konzisztenciájának és vérzésének vizsgálatával, valamint a bél hisztopatológiai állapotának felmérésével lehet megvizsgálni, a szöveti vastagbél hematoxilinnel/eozinnal festett szakaszainak alkalmazásával. A vastagbélszövet-fragmensek felhasználhatók az MPO-aktivitás és a citokintermelés meghatározására. Ezek a mérések együttesen felhasználhatók a gyulladásos válasz értékelésére kísérleti vastagbélgyulladás állatmodelljeiben.

Jegyzőkönyv

1. Az akut DSS-indukálta colitis egérmodellje

2. Gyűjtsön szövetmintákat a vastagbélből

3. A vastagbélgyulladás súlyosságának értékelése

4. Készítsen standard reagensoldatokat a teszteléshez.

  1. Készítsünk 50 mM kálium-foszfát-puffer oldatot úgy, hogy az A-oldathoz (KH 2 PO 4, 6, 8 g egybázisú kálium-foszfátot adunk B oldatot (K 2 HPO 4, 8,7 g kétbázisú kálium-foszfát 1 liter dH 2 O-ban). 1 liter DH20-ban), amíg a pH-érték 6,0 nem lesz. A fennmaradó oldatok hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolhatók a jövőbeni felhasználásig.
  2. Készítsen hexadecil-bromid (CCFH) puffereket 5 g HTAB hozzáadásával 1 liter kálium-foszfát pufferben (50 mM, pH = 6,0). Óvatosan melegítsük, hogy feloldódjon, és felhasználásig 2-8 ° C-on tároljuk. Ha szükséges, melegítse fel, hogy újra feloldódjon.
  3. Készítsen lízispuffert a szövetek homogenizálásához a fehérjeelemzéshez 10 ml Tris-1 M sósav (pH = 8,0), 6 ml 5 M nátrium-klorid és 2 ml Triton X-100 182 ml sterilizált desztillált víz hozzáadásával. A Triton X-100 szobahőmérsékleten nagyon viszkózus, ezért használat előtt kissé fel kell melegíteni. Az elkészített lízispuffer felhasználásig -20 ° C-on tárolható.