A gyermekklinikáról és a gyermek ambulanciáról Dr
A gyermekklinikáról és a gyermek ambulanciáról Dr. von Hauner Gyermekkórháza, a müncheni Ludwig Maximilians Egyetem igazgatója: Dr. med. Dr. h.c. D. Reinhardt Az emberi szöveti transzglutamináz elleni IgA antitestek, valamint IgA és IgG gliadin elleni antitestek négy ELISA-vizsgálatának összehasonlítása és az emberi szövet transzglutamináz és gliadin szekréciós IgA antitestek kimutatására szolgáló kereskedelmi vizsgálat validálása Értekezés az orvosi kar doktori fokozatának megszerzéséhez a müncheni Ludwig Maximilians Egyetem adata: Diehl Veronika, München, 2009
A Müncheni Egyetem Orvostudományi Karának jóváhagyásával.Riporter: Prof. Dr. S. Koletzko társelőadó: Priv. Doz. Dorit Nägler Prof. Dr. R. Zachoval Prof. Dr. Dr. h.c. Dietrich Seidel a PhD munkatársának társfelügyelete: Dr. M. Kappler dékán: Prof. Dr. med. Dr. h.c. M. Reiser, FACR, FRCR A szóbeli vizsga napja: 2009.03.12
1 Tartalomjegyzék 1. Bevezetés. 4 1.1 A lisztérzékenység alapjai. 4 1.1.1. Meghatározás. 4 1.1.2. A lisztérzékenység prevalenciája. 4 1.1.3. Klinikai kép. 4 1.1.4. Kockázati csoportok. 5 1.2. A lisztérzékenység kórtörténete. 6 1.2.1. Elnevezés. 6 1.2.2. Etiológia és terápia. 6 1.2.3. Kórélettan és diagnosztika. 7 2. A munka célja. 10 3. Anyag és módszerek. 11 3.1. Dizájnt tanulni. 11 3.1.1. Szerológia. 11 3.1.2. Szék. 12 3.2. Statisztikai értékelés. 12 3.2.1. Statisztikai alapismeretek. 13 3.2.2. A kettős mérések összefüggése. 14 3.3. A betegek csoportja. 14 3.3.1. Szerológia. 14 3.3.2. Szék. 14 3.4. Mintavétel. 14 3.4.1. Biopszia. 14 3.4.2. Szerológia. 15 3.4.3. Szék. 15 3.5. Szövettan. 15 3.6. Teszt végrehajtása. 16 3.6.1. a vizsgálatok általános vizsgálati elvei. 16 3.6.2. Anyag. 17 3.7. A szerológiai vizsgálatok leírása. 19 3.7.1. Teszt a Kötés helyén. 19 3.7.2. Biomed teszt. 21 3.7.3. Az Eurospital tesztje. 23.
2 3.7.4. Pharmacia teszt. 25 3.8. Az Immundiagnostik cég székpróbája. 26 4. Eredmények. 27 4.1. Az antitest meghatározása a szérumban. 27 4.1.1. Betegcsoport. 27 4.1.2. Felvételi kritériumok. 29 4.1.3. Életkor szerinti megoszlás. 30 4.1.4. Szövettani vizsgálati eredmények. 30 4.1.5. A vizsgálatok eredményei. 31 4.1.6. A vizsgálati eredmények összehasonlítása. 38 4.2. Antitestek meghatározása a székletben. 45 4.2.1. Betegcsoport. 45 4.2.2. Kor szerinti megoszlás. 46 4.2.3. Teszteredmény. 47 4.2.3.1. A retrospektív vizsgálat eredményei. 47 4.2.3.2. A prospektív vizsgálat eredményei. 50 5. Megbeszélés. 53 5.1. Szerológia. 53 5.1.1. Betegcsoport. 53 5.1.2. Kor szerinti megoszlás. 56 5.1.3. IgA-hiány. 57 5.1.4. Módszertani problémák a teszt elvégzésében. 58 5.1.5. Eredmények. 59 5.1.6. Az egyes gyártók megbeszélése. 61 5.1.7. Teszten belüli variabilitás. 66 5.1.8. Tesztek közötti változékonyság. 67 5.2. Szék. 68 5.2.1. Betegcsoport. 68 5.2.2. Mintagyűjtés és feldolgozás. 68 5.2.3. Eredmények. 69 6. Következtetés. 71 6.1. Szerológia. 71 6.2. Székletvizsgálat. 71 7. Összegzés. 72
3 7.1. Bevezetés. 72 7.2. Mód. 72 7.3. Eredmények. 73 7.3.1. Szerológiai eredmények. 73 7.3.2. A székletvizsgálat eredményei. 73 7.4. Következtetések. 73 8. Függelék. 75 8.1. Bibliográfia. 75 8.2. Rövidítések listája. 89 8.3. Hálaadás. 90 8.4. Önéletrajz. 91.
18 Bindazyme Human Anti Gliadin IgA EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Bindazyme Human Anti Gliadin IgG EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Bindazyme Human Anti Tissue Transglutaminase EIA Kit, The Binding Site, Birmingham, England Monkey Esophagus IFA kit, The Binding Site, Birmingham, Anglia Automata mikrotiter lemezmosó Mikrotiter lemezolvasó (405 és 450 nm) fluoreszcens mikroszkóp 495 nm gerjesztőszűrővel és 515 nm zárószűrővel Precíziós pipetták 10 µl, 50 µl, 100 µl, 1000 µl 3.6.2.2. Székletvizsgálat httg siga ELISA, Company Immundiagnostik AG, Bensheim, Németország Gliadin siga ELISA, Company Immundiagnostik AG, Bensheim, Németország Vortex mixer Microtiter lemezolvasó 450 nm-es szűrővel Microtiter lemezrázó Centrifuge, 3000-szer g
21 Eredmény- és határérték 3. táblázat: Az eredményértékelés részeként általunk használt EMA határértékei (más vizsgálatokban használt határértékek alapján) EMA negatív 15 - 15 - 15 - 40 U/ml 6. táblázat: A gyártó által megadott (Biomed) Az endomysium IgA határértéke Endomysium IgA negatív szürke terület pozitív 25 U/ml> 25 - 4U/ml 8. táblázat: A gliadin IgA negatív szürke terület pozitív IgA gliadin 1,5 U/ml határérték 9. táblázat: A gyártótól (Eurospital) által megadott határérték a httg IgA transzglutamináz IgA negatív pozitív 100U/ml-re 1: 1001 arányban hígítottunk mintapufferrel (két hígítási lépés), és újra megmértük. Eredmény és határérték 10. táblázat: A gliadin IgA/IgG és a transzglutamináz határértéke a gyártó által (Pharmacia) Gliadin IgA Gliadin IgG transzglutamináz negatív 17 U/ml> 17 U/ml> 8 U/ml A normál értékeket egy klinikai vizsgálat alapján határozták meg, A. Bürgin-Wolff és F. Hadziselimovic, Celiac Disease Diagnostics Laboratory, CH-4410 Liestal, Svájc.