A laboratóriumi vizsgálatok jelentősége és alkalmazásai a szukák meddőségében (áttekintés)

Néhány laboratóriumi vizsgálat fontossága és felhasználása a szuka meddőségében (áttekintés)

Első közzététele: 2016. november 10

Szerkesztői csoport: MEDICHUB MÉDIA

Absztrakt

Jelen tanulmány összefoglaló néhány laboratóriumi eszközt és módszert, amelyeket szukák reproduktív betegségeihez és patológiájához, illetve meddőségéhez köthető esetek kivizsgálásában használnak. A lehetséges okokat, valamint a szerológiai, citológiai, bakteriológiai, immunológiai értékeléseket megvitatják azzal a céllal, hogy hangsúlyozzák az ivarzás megfigyelése során bekövetkező eseményeket, a szukák helyes kezelését és az optimális szaporodási körülményeket, valamint meghatározzák a szinkopákat ezek értékelésében.

Összegzés

Jelen tanulmány összefoglalja néhány olyan módszert és laboratóriumi paraklinikai eszközt, amelyek a szukák meddőségének témájában a reproduktív rendellenességek és patológiák körébe tartozhatnak. Felsorolják és megvitatják a szerológiai, citológiai, bakteriológiai, immunológiai sorrend lehetséges okait és kiértékelését azzal a céllal, hogy kiemeljék és felhívják a figyelmet az esztétikai monitorozáshoz kapcsolódó események kaszkádjára, a szukák tenyésztésének jó kezelésére és optimális feltételeire, valamint azonosítsák a szinkopákat értékelésük.

A meddőség a termékenység fordítottjának tekinthető, és kifejezi az ivarérett nőstények szaporodási képességét. Ez átmeneti, reverzibilis rendellenességnek tekinthető, szemben a sterilitással, amely a reproduktív funkció végleges és visszafordíthatatlan rendellenessége. Ezen kóros állapotok ok-okozati tényezői egy új szervezet fejlődésének első szakaszától kezdve a zigóta stádiumtól kezdve, majd az embrionális organogenezis és a magzat fejlődésének fázisaiban, majd a méhen kívüli életben (az elléstől a pubertásig, majd a nemi szervek periódusában) működhetnek. ). A nőgyógyászati felmérés célja az egyes állatok egyéni ismerete és szaporodási szempontból fiziológiai vagy kóros állapotba sorolása, a főbb reproduktív mutatók általános helyzetének ismerete, valamint azok javítására sürgősen alkalmazandó intézkedések megismerése. Mivel számos olyan káros tényező beavatkozása lehetséges, amelyek megnehezíthetik az etiológiai diagnózis felállítását, a szakembernek különös figyelemmel kell megvizsgálnia az állatot.

Magát a nőgyógyászati vizsgálatot megelőzően a következő elemzéseket kell elemezni: táplálkozás, higiénia, karbantartási körülmények, az állomány mozgása és pihenése, járványügyi helyzet, mesterséges megtermékenyítés végrehajtása stb. A nőgyógyászati vizsgálat alapjául szolgáló elemek: az anamnézis, valamint a belső és külső klinikai vizsgálat (Bîrţoiu A., Seiciu F., 2006).

A szaporodni nem képes kutyákban előforduló leggyakoribb tünetek egy része a szabálytalan ivarzás, a teherbeesés képtelensége, a szexuális kapcsolat kialakításának súlya és a terhesség elvesztése. Az egészséges csirkék reprodukciós képességével rendelkező szukák termékenységének normális határértékeinek megnevezéséhez normális és szabályos ivarzásra van szükség, egészséges szaporodási rendszerrel, normális petesejtekkel, optimális és állandó határértékű reproduktív hormonokkal, trágyázás nélküli sperma megtermékenyítéssel, reakcióval pozitív a kialakult zigóta megvalósításának környezete, az endometriumban való fészkelése, a placenta normális elhelyezése és a terhesség időtartamig történő stabil progeszteron-koncentrációjának támogatása. Mindezeket a feltételeket optimális szinten kell tartani a terhesség két hónapja alatt, különben a reprodukciós folyamat megváltozik, meddőséget eredményez (Fontbonne A., 2006).

A meddőség minden korosztályt érinthet, de általában a geriátria körében fordul elő. A 6 évesnél idősebb kutyáknál a gyakori ok az endometrium cisztás hiperpláziája. Azoknak a kutyáknak, akiknek kórtörténetében méhfertőzés volt, nehézségeket okozhat a megtermékenyített petesejt beültetése is. De a legtöbb esetben a meddőség egyik fő oka a megtermékenyítés a rossz ivarzás időszakában. A pajzsmirigy-elégtelenségre hajlamos kutyafajtáknál gyakrabban fordulnak elő termékenységi problémák. A pajzsmirigy alulműködés különös kockázatával járó fajták: ökölvívók, dobermánok, tacskók, arany retrieverek, német bulldogok, ír szetteriai, törpe schnautzerek és uszkárok.

További kritériumok, amelyek szerepet játszhatnak a szukák szaporodásának csökkentésében, a következők:

kutya vírus;
Toxoplasma spp. fertőzések;
spermaellenes antitestek;
antimülleri antitestek;
hiperadenocorticizmus;
pajzsmirigy alulműködés;
rendezetlen petefészek funkciók;
kromoszóma-rendellenességek;
vírusos vagy parazita szisztémás fertőzések;
meddőségi tényezők a hím kutyában;
szubklinikai méhfertőzések;
Brucella canis;
a stimuláció hiánya a kopuláció előtt a szuka ovuláció kiváltása érdekében.

A szuka északi szakaszának ellenőrzésének fő módszere a hüvelyi citológia.

A hüvelyi citológiában a szuka ivarzásakor megfigyelt összes változás a test ösztrogén koncentrációjának változásából adódik. Ezen változások mechanizmusának és következményes látható hatásainak megértése a citológiában klinikai körülmények között segít a klinikusnak a normál és abnormális ciklusok grafikonjának megrajzolásában. Az ösztrogént a szteroidogén útvonal termeli, kezdve a thecalis sejtektől, ahol a különféle enzimek a koleszterint különféle terhességekké, esetleg androszténdion androgén hormonokká alakítják át, amelyeket később az alapmembránon át granulosa sejtekbe szállítanak (Okkens et al., 2006).

A szérum progeszteron meghatározása

A szukában a progeszteron eredetileg a petefészek luteális szövetéből származik. Az érzéstelenítés során a szérum progeszteron alapszintje általában kevesebb, mint 1 ng/ml.

A proestrus során a preovulációs luteinizáció néhány follikuláris sejtben bekövetkezik, mint ilyen, néhány nappal az ovuláció előtt az ösztrogéntermelésüket progeszteron termelésre változtatják (Concannon, P.W., 2006). A szérum progeszteron koncentrációja a proestrum során lassan 1 ng/ml körül növekszik, ahol néhány naptól csaknem két hétig stabilizálódik. Egy bizonyos ponton a koncentrációk ismét növekedni kezdenek, és eléri az 5 ng/ml körüli értéket, mielőtt a szuka ovulálna (Concannon, P.W., 1977). A progeszteron emelésének megkezdése után növekedési üteme állandó marad a szukák között, ezért a klinikus korrelálhatja az LH szekréció csúcsának, az ovulációnak és a termékeny periódus kezdetének fiziológiai eseményeit a szérum progeszteron megfelelő koncentrációival.

Vannak hermafrodita állatok, amelyek genitális szinten specifikus változásokkal járnak, ami kromoszómális, ivarmirigyi és szexuális fenotípusos rendellenességekkel jár (Meyers - Wallen, 1993).

Az aneuploidia, amely a meiozis vagy mitózis kromoszóma-rendellenessége, triszómiát vagy monoszómiát eredményez, a szuka meddőségének másik fontos oka. A kutya fejlődését befolyásoló genetikai mutációk a fogantatás 3 alappontjának egyikében fordulhatnak elő: 1) a nemzetség kromoszómális létesülése során - monoszómia (XO), triszómia (XXX vagy XXY) vagy kiméra (egyes sejtek XX, mások XY ugyanarra az egyénre); 2) amikor a nemzetséget a kromoszóma szintről az ivarmirigy szintjére fordítják (az eltérés a valódi kromoszóma nem és a reproduktív szervek között, például a szuka petefészkei XY, nem XX); 3) a reproduktív traktus és a szervek fejlődése során (a nőstény külső megjelenése, de a férfi reproduktív szervekkel). Amikor az egyik ilyen helyzet bekövetkezik, a normális reproduktív funkció gátlódik, és állandó és visszafordíthatatlan érzéstelenítési állapot jön létre (Breen et al., 2001).

Szexuális differenciálódási rendellenességek: limfocita oophoritis, petefészek luteális ciszták, hipofízis elégtelenség, petefészek aplasia/hypoplasia.

Atípusos kortizol-ösztrogén egyensúlyhiány szindróma (ACEIS) azonosítja az inaktív vagy elégtelen kortizol jelenlétét, amely lehetővé teszi nagy mennyiségű adeno-ösztrogén termelését. Ez a felesleg nemcsak a pajzsmirigyhormon-receptorhoz kötődik, hanem az immunrendszert is megzavarja, amely már nem védi a beteget. Az összösztrogén növekedése tehát az adeno-hipofízis kéreg középső rétegének és a kortizoltermelésnek az egyensúlyhiánya miatt következik be. Ezt az egyensúlyhiányt okozhatja a kortizol hiánya, megkötése vagy inaktiválása, magas koncentrációszint vagy szinte nem létezik (Plechner, A. J., 2004).

A táplálkozás hatása a meddőségre

Ha az étrend túl magas szénhidráttartalmú, és cukorrá alakul (gabonafélék, burgonyakeményítő, borsó, sárgarépa és édesburgonya, valamint egyszerű cukrok, például méz, gyümölcs és fruktóz), akkor ez a diéta növeli a szervezet cukorszintjét nőni. Ez viszont az inzulin felszabadulását csökkenti a cukorszintet. Amikor a cukorszint csökken, kortizol szabadul fel, hogy segítsen növelni a cukorszintet. Ennek a reakciónak bumeráng hatása van, oda-vissza hatással, ami az inzulin kimerülését okozhatja. Ez az áramlás befolyásolja az ösztrogén, a progeszteron és a tesztoszteron szintjét. Amikor a kortizol ismételten felszabadul a magas cukortartalmú étrendre adott válaszként, a progeszteronnal versenyez ugyanazon receptorokért és a kortizol-nyereségért minden alkalommal. A progeszteron pedig elengedhetetlen a termékenységhez (Olson, L., 2015).

A pajzsmirigy alulműködés meddőséggel társul, érzéstelenítés, az ösztrikus ciklus rendellenességei és a hosszan tartó proestralis vérzés jellemzi (Johnson, 1980; Nesbitt et al., 1980). A hypothyreosishoz kapcsolódó reproduktív problémákat a magas szérum prolaktinszint okozza (Chastin és Ganjam, 1986).

A b növekedési faktor (TGF-b) család homodimer glikoproteinjének, a Müller-gátló anyagnak is nevezett anti-Müller-hormont (AMH) elsősorban az embrió periódusbeli hímdifferenciálódás szabályozásában játszott szerepére tanulmányozták. Így a magzati here Sertoli sejtjei által termelt hormon indukálja a női reproduktív traktus elsődleges elemeinek, a Müller-csatornáknak a visszafejlődését, és ezáltal hozzájárul a férfi nemi szervek normális fejlődéséhez. A pubertás kezdetével az AMH, akárcsak inhibin B, a petefészek növekedési tüszőinek szemcsés rétegsejtjei termelik, és nem az őshagymák, sem az antrális tüszők a végső növekedési fázisban (az FSH közvetlen szabályozása alatt). A szelektálatlan növekedési tüszők (potenciálisan termékeny primer és szekunder tüszők) szemcsés rétegsejtjeiben történő specifikus expressziója miatt az AMH ideális marker a petefészek-tartalék becsléséhez (Visser et al., 2006).

Az alacsony tüsző AMH expresszió csökkenti az FSH küszöbét, ami a tüszők növekedését és ovulációját okozza a következő ciklusban (Durlinger et al., 1999; Durlinger, 2002).

Pszeudogesztációs szindróma

A nem vemhes szukákban pszeudogestációs szindróma 6-12 hetes ivarzás után jelentkezik, és vulvarödéma jelei, laktáció és az emlőmirigy megnagyobbodása jellemzi (Jones et al., 1988).

A hüvelyi daganatok a szuka reproduktív rendszerének leggyakoribb daganattípusai (Manothaiudom et al., 1991). A legfontosabb hüvelyi daganatok a következők: a húgycső átmeneti sejtes karcinóma (CBT), átvihető venerális daganatok (TVT), laphámsejtes karcinóma (SCC), leiomyoma és fibropapillum. Ezek a hüvelyi daganatok általában geriátriai kutyákban vannak, a nemi daganatok kivételével, általában fiatal korban.

Ezeknek a daganatoknak a szokásos diagnosztikai módszerei a fizikális vizsgálat, a teljes tesztpanel, a tapintás (digitális vizsgálat), a vaginoszkópia, a hüvelyi citológia és a sebészeti biopszia.

A meddőség immunológiai alapjai

A kóros immunválasz a meddőség egyik etiológiája, még akkor is, ha egyelőre nincs sok bizonyíték. Ezen etiológia tanulmányozásának fő célja az antigén toleranciára, annak elvesztésére, meddőséget kiváltó immunpatogenezisre és laboratóriumi diagnózisára vonatkozó adatok szintetizálása lenne (Smith és mtsai, 1999).

Autoimmunitás és antigén célpontok a petefészek patológiájában

Számos szakember vitatta az autoimmun mechanizmusok bevonását a petefészek működésének idő előtti leállításában. Néhány petefészek-patológiában, például idiopátiás meddőségben, policisztás petefészek-szindrómában vagy endometritisben hasonló mechanizmusokat javasoltak. Mindenesetre az autoimmunitás pontos szerepe e betegségek patofiziológiájában továbbra is ellentmondásos. Az autoimmun petefészek betegség diagnózisa klinikai, biológiai és szövettani vizsgálatokon alapul, de különös figyelmet fordítanak az antiovariás autoantitestekre.

Célként a szteroidogén enzimek, a gonadotropinok és receptoraik, a luteális test, a pellucid terület és a petesejt vesz részt, amelyeket tovább vizsgálnak.

A női sperma antigének toleranciája

A női nemi szerveket az immunkomponens sejtjeivel bélelik, amelyek fagocitózzák a spermiumokat és feldolgozzák antigénjeiket az immunfelismerés érdekében. Ezt a mechanizmust a következő tényezők befolyásolhatják:

A hüvely felső részében felszabaduló nagyszámú spermium közül n lehetséges, hogy csak egy kis része, immunológiailag különbözik a fennmaradó többségtől, hozzáfér a petevezetékekhez; a spermiumok eltávolítása a nemi szervekből csökkenti azok számát, akik hozzáférnek az immunrendszerhez; a spermium antigének lebontása a méhre jellemző extracelluláris enzimekkel; spermium fagocitózis szomatikus és makrofág sejtek által, kemotaktikus vonzódás a makrofágok és a neutrofilek számára a méhnyakban és a peritoneális üregben; az immunglobulinok vagy a természetben nem patogén antitestek nemspecifikus kötődése az érett spermiumokhoz, előzetes lépésként fagocitózisukhoz. Ez a mechanizmus viszont fokozhatja a fagocitózist és az immunogenitást; immunszuppresszív tényezők jelenléte a spermában és a follikuláris folyadékban, stb.

Mind a heréknél, mind a petefészkeknél akkor fordul elő, amikor az egyensúly a patogén reaktív T-sejtek javára billen az önben, az alábbiak révén: 1. a szuppresszor (szabályozó) T-sejtek kimerülése és 2. a patogén reaktív T-sejtek aktiválása az énben.

A petefészkében az autoantitestek felismert struktúrái a következők: petesejtek és tüszők, pellucid terület, granulosa sejtek, thecalis sejtek, luteális sejtek és chorion gonadotropin receptorok. Lehetséges lenne a petefészek hiperstimulációjának in vitro megtermékenyítés előtti szerepe a petefészek autoantitestek termelésében, valamint az ovocitát in vitro megtermékenyítésre kivonó petefészek kivonatának ismételt traumája (Agarwal et al., 2007).

Spermiumellenes antitestek (ASA)

Az a tény, hogy a spermium indukálhatja az antitestek megjelenését, 1899 óta jól ismert. Az ASA-k a férfiak 7-15% -ában és a nők 13-80% -ában kimutathatók megmagyarázhatatlan meddőséggel.

Megtalálható szérumban, spermában, a spermiumok felületén, a nyaki nyákban. Az IgG, IgM és IgA immunglobulinok osztályába tartoznak.

Az immunológiai meddőség laboratóriumi vizsgálata

A mai napig nagyon kevés sejt-közvetített immunitás vizsgálatot mutattak be. Ennek oka a celluláris immunrendszer bonyolultsága, valamint a meddőséget közvetítő komponensek, amelyek még meghatározása és fejlesztése folyamatban van. Ha az ASA (megmagyarázhatatlan meddőség) által okozott meddőség gyanúja merül fel, az egyik rendelkezésre álló teszt alkalmazható. 5 csoportra oszthatók:

Agglutinációs tesztek - makró: Gél agglutinációs teszt (GAT); Vegyes anti-globulin reakció (MAR); Immunobead® teszt egy speciális eljárás az IgG, IgM és IgA antitestek jelenlétének kimutatására, amely megmutatja, hogy a sperma melyik területe (fej, nyak vagy farok) befolyásolja az autoantitesteket. A spermiumokat poliakrilamid részecskékkel kombinálják, amelyeket előzőleg anti-IgG, anti-IgM vagy anti-IgA béleltek.

Antitestek fluoreszcenciája: immunfluoreszcencia (IF); áramlási citometria.

Kolorimetria: Enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálat (ELISA).

Radioimmun értékelés: Radiojelzett antiglobulin teszt.

Ezen tesztek mindegyikének vannak előnyei és hátrányai. A teljes értékeléshez ajánlatos mindezeket a teszteket használni, amelyek megadják az antitestek közötti kapcsolatok helyét, izotípusát és mennyiségi meghatározását.

Lutealis elégtelenség a szukákban, a progeszteronra adott autoimmun válasz következményeként

Az ösztrikus ciklus megrövidülése, az embrionális halál és az abortusz mind a szuka luteális testének elégtelen progeszteronszekréciójával járhat. Ellenőrizzük a progeszteron, a prolaktin és az relaxin koncentrációját a hipoluteikus fázisban, valamint a kontrollt terhesség alatt és nem gesztusos ösztrikus ciklus alatt. Ezenkívül kutya antiprogeszteron antitesteket elemeztek a hormonális változásokkal összefüggő lehetséges embrionális veszteség szempontjából, összefüggésben a hormonális antitestek válaszával (Jenny K. et al., 2006).

A meddőség differenciáldiagnózisát a kezelési problémák és a peteérés időtartamára vonatkozó klinikai protokoll között állapítják meg, olyan szukák, amelyek később nem engedték meg a szerelést, vagy kényszerű szerelés vagy mesterséges megtermékenyítés után nem kapták el a tartót, és a nem megfelelő kezelés termékeny időszakában ellenőrizték őket. tenyésztők.

A fogékonyság és a termékenység periódusai az ivarzás során jelentősen változnak a normális szukák között, sőt a következő ciklusokban egyedenként is. Ezek az időszakok nem eshetnek egybe az optimális szállítási idő kezdeti kiválasztásával, az első hüvelyi vérzést követő tizedik - 14. napon. Az ovuláció időzítésének vaginális citológia, ismételt vaginoszkópia, valamint a progeszteron és az LH szintjének ellenőrzése céljából történő protokollok hasznosak a termékeny periódus azonosításában, amikor a tenyésztést meg kell kezdeni, lehetővé téve a tartók megfelelő kezelését. A klinikusnak szem előtt kell tartania, hogy az ovuláció optimális ideje csak akkor állapítható meg, ha a kapcsolódó vizsgálatok és tesztek összes eredménye összefüggésben van (Jenny K. et al., 2006).