A természet könnyen szétszórható szél, víz, állatok, gépek, PDF dokumentum segítségével

természet

szétszórható

szél

természet

könnyen

Dokumentumok

A FARKASZAL VALÓ ELLENÁLLÁS FOKJÁNAK AZONOSÍTÁSA (E verseny)

NAPVIRÁGGENOTÍPUSOK UTÁN

Maria DUCA, Aliona GLIJIN, Victoria POPESCU

Növénybiológiai Tanszék A seprűtartalmú rezisztencia génekhez kapcsolt molekuláris markerek lehetővé tennék a genetikai determinizmus jobb megértését

a napraforgó seprûreprezisztenciáját és megkönnyíti a korai szelekciót néhány specifikus DNS-marker jelenlétének szűrésével. 29 napraforgó vonal elemzését végeztük az RTS05 SCAR markerrel, amely a napraforgó Or5 locus con-hoz kapcsolódott-

az E. fajba tartozó seprű-káposztarezisztenciával szemben. A 650 bp-os amplikon azonosítása 27 genotípusnál feltárja az Or5-gén jelenlétét, hiányzik ez az amplifikált termék

a Xenia-nál ♀ és a citoplazmatikus hímsteril 7. genotípus sugallja az E. faj iránti hajlamot. Bevezetés A Lupoaia egy angiospermás holoparazita, amely a mezőgazdasági növények gyökerein, például a virágon parazitál.-

nap, paradicsom, dohány, bab és mások [1]. A napraforgót az Orobanche cumana Wallr. Faj támadja meg, amely súlyos gyümölcsvesztést okoz a kelet-európai és mediterrán országokban [2]. A mai napig öt különböző földrajzi [2,3] és genetikai [4] eredetű Orobanche (A-E) fiziológiai törzset azonosítottak. Így az A fajtával szembeni ellenállást az Or gén határozza meg; az Or2 gén B fajjal szembeni ellenállása, amely szintén ellenállást kölcsönöz az A fajnak; a C fajtával szembeni ellenállást az Or3 gén határozza meg, amely az A és B, illetve a D - Or4 fajokkal szembeni ellenállást biztosít az A, B és C ellenállással, valamint az E - Or5 faj ellenállását az A, B, C és D [5-7]. Az elmúlt években igazolták az F és a G verseny megjelenését (Spanyolországban). Rezisztencia Az F-géneket kimutatták néhány tenyésztett genotípusban és a napraforgó vad formáiban, és úgy tűnik, hogy rezisztenciát biztosítanak a korábban detektált fajtákkal (A-E) [2-4, 8-10].

Ennek a parazitának a leküzdése nehéz, mert egyetlen farkasnövény által termelt több ezer mag könnyen szétszórható szél, víz, állatok, gépek, talaj stb. Által, a magok 10-15 évig életképesek maradnak [11] és kémiai módszerekkel, az alkalmazott fizikai és biológiai módszerek nem távolítják el teljesen a parazitát. Alternatív megoldás a farkasrezisztens tenyészetek használata, így a kutatások ma is folytatódnak az e kórokozóval szemben rezisztens gének kimutatása és a tenyészanyagban való bevezetése érdekében [1].

Az RAPD technika [12] és a BSA (gömbös szegregáns elemzés) [13] kombinációja, valamint a rezisztencia génekhez szorosan kapcsolódó molekuláris markerek használata lehetővé tette ezen gének azonosítását különböző növényekben, például lisztrezisztencia gének a Laptuca sativa-ban [13], a gének árpa ellenállása Rhynchosporium secalis [14], rozsda [15] és mások ellen. A napraforgó [16] és a BSA RFLP térképének elkészítését követően a PL1, Pl2 és Pl 6 [17-19] lisztrezisztencia génekhez kapcsolt RFLP markereket azonosítottuk. Mindhárom gén ugyanahhoz az RFLP markerekhez kapcsolódik, és az 1. linker csoportot alkotják [19].

Kutatásunk célja az volt, hogy azonosítsuk az Or5 gén jelenlétét egyes hibridekben és napraforgó vonalakban. Anyag és módszerek A vizsgálati objektum jellemzői. Tíz virághibrid (F1) szolgált növényi anyagként-

(Valentino, Xenia, előadóművész, Oxana, Vitalia, Drofa, Turbo, Favorit, Alkazar és Olga), négy hibrid (Performer, Oxana, Xenia, Valentino) szülői vonala és 11 androster genotípus számozása 1-től 1-ig 11., ill. A maganyagot a CCŞ „Magroselect” SRL Soroca biztosította.

In vivo tenyésztési körülmények. A növényeket vegetációs cserepekben termesztettük 24-26 ° C hőmérsékleten, fotoperiodicitás 14-16 óra, páratartalom 60% volt. Az anyagot 6-8 igaz levél stádiumában gyűjtötték és elemezték.

Kutatási módszerek DNS-kivonás. A napraforgó levelekből genomi DNS-t extraháltunk DAN-zollal [20]. Tisztítás

A DNS-t többször 100% alkohollal, majd 75% alkohollal készítettük. A szárítás után kapott csapadékot autoklávban desztillált vízben oldjuk. A DNS-koncentrációt spektrofotometriásan határoztuk meg.

PCR reakció. Az amplifikációt specifikus SCAR primerekkel (RTS05) hajtottuk végre, amelyeket az RAPD polimer kezdeti fragmense alapján szintetizáltunk - OPJ18_650. A SCAR marker (Alpha DNS, Kanada) nukleotidszekvenciája a következő:

TANULOM I UN UN IVERS I TAT I S

Journal of Science of Moldova Állami Egyetem, 2008, 2. szám (12)

F (5´-TGGTCGCAGATGGACGTGTGGGGTG-3´), R (5´-GTCGCAGAGTGAGAGAGAGTGT-3´). Az amplifikációs reakciót 25 ul térfogatban hajtottuk végre, amely desztillált vizet, 5x PCR puffert, keveréket tartalmazott

dNTP nukleotid (2 mM), Tau-polimeráz 1u/µl (Németország), 50 bp primer ÉS - 6 µl. Az amplifikációt automatikus termociklus (Corbett, Ausztrália) alkalmazásával hajtottuk végre, a következő feltételekkel: I) denaturálás: 94 ° C - 4 perc. (egy ciklus); II) 45 ciklus, 1) denaturáció: 93 ° C - 1 perc, 2) renaturáció: 63 ° C - 1 perc, 3) megnyúlás: 72 ° C - 4 perc; III) fajlagos megnyúlás: 72ºC - 6 perc. Az amplifikációs termékek elektroforézisét 1,4% -os agaróz gélben, hosszú ideig TAE pufferben végeztük.

egy órán át 80 V-on. A géleket az UV-kamerában vizualizálták és lefényképezték. Az amplifikált DNS-fragmensek méretét összehasonlítottuk a standard markerrel (100pb DNS-létra, Promega, USA).

Eredmények és megbeszélések Az irodalom legtöbb adata igazolja az A - E fajokkal szembeni rezisztencia domináns monogén determinizmusát

farkasok [3,10,21,22]. Egyes hivatkozások azonban a jellem komplexebb öröklődését tárják fel, köztük két domináns gént [8], egy recesszív [23], kettős recesszív orrvérzést [24] vagy akár kvantitatív öröklődést. A legújabb tanulmányok szerint a farkasokkal szembeni ellenállást kvantitatív és kvalitatív poligénes mechanizmusok határozzák meg [25,26]. A rezisztencia genetikai determinizmusának azonosítása egyre inkább specifikus DNS-molekuláris markerek [26] használatán alapul, beleértve az Or5-génhez kapcsolt molekuláris markereket, amelyek rezisztenciát biztosítanak az E-fajtával szemben [27], a BSA módszer alkalmazásával [13].

A mai napig azonosították az Or5-hez kapcsolt RAPD markereket (UBC120_660) és SCAR markereket (RTS05, RTS28, RTS40, RTS29 és RTS41), és kidolgozták az Or5 gén kapcsolási csoportjának térképét, 22,5 közelében. A cM distálisan az RAPD marker, és 5,6 cM és 39,4 cM között a proximális, az 5 SCAR marker. Ezt az összekötő csoportot a CARTISOL RFLP térkép 17. összekötő csoportjába (LG17) helyeztük [27]. Tang (2003) ugyanezen módszerrel (BSA) az SSR-markerek feltérképezése után helyezte el az Or5 gént a 3. linkercsoport (LG3) telomer régiójában [28], a legközelebbi SSR-jelet a lokuszhoz közel 6,2 cM-nél feltérképezve. Vagy5 gén.

Ebben a cikkben 29 napraforgó genotípust vizsgáltak az Or5 gén kutatása céljából. Lu és munkatársai által kapott eredményekből kiindulva. (2004) a BSA elemzését követően azt találták, hogy az egyik legközelebbi SCAR marker az RTS05 marker, amely 5,6 cM távolságban van feltérképezve az Or5 gén közelében; Kutatásunk során ezt a markert használtuk az RAPD primer kezdeti fragmensével - OPJ18_650, 650 bp amplifikációs szorzattal.

OXANA XENIA VALENTINO TELJESÍTMÉNY

1. fotó: A SCAR (RTS05) specifikus markerrel végzett DNS-amplifikáció eredményei különböző napraforgó családokban: M - molekuláris markerek; C - kontroll DNS nélkül.

A Xenia, az Performer, a Valentino és az Oxana hibrideket alkotó genotípuscsoportokon (homozigóta apai vonalak és F1 hibrid) kapott eredmények (1. fotó) elemzése a specifikus primerek párjával végzett amplifikációs reakció eredményeként megemlítette a 650 bp minden genotípusban, kivéve a Xenia hibrid anyai vonalát. Adatok, amelyek alapján feltételezhetjük, hogy ezek a genotípusok rendelkeznek az Or5 génnel, és hiányzik az anyai Xenia genotípusból - hogy ez a vonal hajlamos az E fajra.

Az Or5 génhez kapcsolt lokusz azonosítását 11 androsteril vonalon és 10 napraforgó hibriden is elvégeztük (2. és 3. fotó). A 650 bp-os amplikont az 1-3, 8-11 androszteril vonalakban, valamint a Performer, Oxana, Xenia, Turbo, Favorit, Alcazar és Olga hibridekben kaptuk.

A kapott eredmények azt mutatják, hogy az említett vonalak és hibridek ellenállnak az E fajtájú farkasoknak. A 4-6 androszteril vonalakban és a Valentino, Vitalia és Drofa hibridekben a 650 bp-os amplikon gyengén van kiemelve, a 7. számú androsteril vonalon pedig hiányzik.

A Helianthus annuus L. fajokban és az Orobanche cumana Wallr. Fajokban jelenlévő/hiányzó rezisztencia gének (Or1 - Or7) közötti közvetlen kapcsolatról szóló szakirodalom adatai [2] alapján elméletileg levontuk a vizsgált genotípusok fogékonyságát vagy rezisztenciáját. a hét létező farkasfajtához képest (1-3. tábla).