Aerob vérkultúra (adott esetben antibiotogrammal) - Synevo

Általános információ

adott

A vérkultúra az egyik legfontosabb és legkényesebb módszer a mikrobiológiai laboratórium számára. A vérnek normálisan steril, a baktériumok vagy gombák izolálása és azonosítása a vérkultúrában jelentős diagnosztikai jelentőséggel bír 13 .

A bakteremia a szeptikus kitörésből vagy a sérült nyálkahártyából származó baktériumok jelenléte a vérben. Gyakran a bakteriális állapot mentes a klinikai kifejezéstől, vagy csak hidegrázás és láz kíséri, amelyhez hozzáadódhatnak a bakteriális váladékot okozó állapot tünetei és jelei.

A szeptémia az a klinikai kifejezés, amely meghatároz egy fontos, szabálytalan, kiszámíthatatlan és súlyos klinikai evolúcióval járó bakterémiát, hidegrázással, rendszertelen lázzal, toxémiával, hipotenzióval, prostrációval, polimorf és különféle kiütésekkel, szöveti vagy zsigeri szeptikus áttétekkel. A szeptikus szindróma súlyossága a háttérben hagyja az elsődleges fertőző járvány tüneteit, amelyeket mindig meg kell keresni 1 .

A baktériumok részt vesznek:

Staphylococcus aureus, Escherichia coli és más enterobaktériumok, koaguláz-negatív staphylococcusok (SCN), Pseudomonas spp, Streptococcus spp, anaerob baktériumok, élesztő

Streptococcus spp., Enterococcus spp., Staphylococcus spp

Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae

A bejárati kaputól függően:

Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Haemophilus influenzae

Enterobaktériumok, szigorúan anaerob baktériumok, Enterococcus spp.

Szigorúan anaerob baktériumok, E.coli, Enterococcus spp.

Húgyúti fertőzések és elzáródások

Enterobaktériumok, Enterococcus spp.

A vérkultúra elve

A vérkultúra minőségi teszt a vérben jelenlévő mikroorganizmusok kimutatására. A szigorú aszeptikus körülmények között vett vért a vérkultúra palackba vetik, amelynek összetétele elősegíti az aerob, anaerob és mikroaerofil csírák fejlődését 11 .

A környezetbe beépített fő dúsító tényezők, amelyek elősegítik a baktériumok fejlődését, a következők:

  • peptonok, kazein és zselatin kombinációja aminosav bevitelre;
  • élesztő kivonat vitaminbevitelhez;
  • hemin és NAD, amelyek lehetővé teszik a Haemophilus kifejlődését és elősegítik a tápanyagigényes csírák, például az Actinobacillus spp, a Cardiobacterium spp, az Eikenella spp és más anaerobok növekedését;
  • a B6-vitamin, amely nélkülözhetetlen elem az endocarditisben és a staphylococcusban hiányos streptococcusok kialakulásában;
  • A CO2 fontos eleme a fajok csíráinak növekedésének: Neisseria, Brucella, Haemophilus, Streptococcus, Campylobacter.

A baktériumok szaporodása azonban a tenyésztési körülményektől független tényezők sorától is függ: a csírák sűrűségétől a vérben, azok szaporodási stádiumától, néhány gátló anyag jelenlététől a vérben.

A felnőttkori bakteremia és fungemia általában kisszámú keringő mikroorganizmus mellett (1-30 CFU/ml vér között) alakul ki. Újszülött, csecsemő és kisgyermeknél a koncentráció meghaladja a 100 CFU/ml-t. Általában a fertőzés súlyossága, az előrejelzés és a vérben lévő baktériumok koncentrációja között közvetlenül arányos összefüggés van. .

A vérkultúrás palackban elfogott baktériumok a következők lehetnek:

  • épen, plazmában szabadon, az aktív szaporodási fázisban, és továbbra is gyorsan osztódni fog a vérkultúrában vagy a nyugalmi fázisban, és az injekciós üveg tápanyagkörnyezetéhez való alkalmazkodásnak megfelelő késési fázis végén elkezdi szaporodni;
  • az antitest-komplement rendszer, az antibiotikumok, a polimorfonukleáris fagocitózis vagy a monociták többé-kevésbé károsodnak vagy elfedik, és a leukocita autolízis után fejlődnek ki, ha életképesek maradnak;
  • L alakú baktériumok (táplálkozási hiányosságok), amelyek növekedéséhez adaptált környezetre van szükség (hipertóniás és gazdag növekedési faktorokban) 12 .

A vérkultúrában a baktériumok szaporodása késleltethető vagy megakadályozható, ha antikoagulánst nem használnak a táptalajban, mivel a mikroorganizmusok beszorulhatnak a fibrinrögbe. Ugyanakkor egyes antikoagulánsok toxikusak lehetnek bizonyos kórokozókra, akárcsak a vérben lévő antibiotikumok. Ezek az akadályok kiküszöbölhetők nátrium-polianetolszulfonát (SPS) alkalmazásával, amely egy nem mérgező antikoaguláns, amely elősegíti a baktériumok szaporodását az emberi szérum baktericid aktivitásának semlegesítése és az antibiotikumok (sztreptomicin, kanamicin, gentamicin, polimixin B) gátlásával. Az SPS-nek gátló szerepe lehet a Peptostreptococcus, Neisseria egyes törzseinél, hatását semlegesíti a táptalajban lévő zselatin jelenléte.

Félautomata vagy számítógépes számítógépes rendszerek kerülnek forgalomba a baktériumok gyors kimutatására a vérkultúrákban. Az elvek, amelyeken ezek a rendszerek alapulnak, többféle. Csak azokat említjük, amelyeket a Synevo laboratóriumban használunk: a szén-dioxid-termelés közvetlen detektálása az alábbiakkal:

-a vérkultúra-ampullában baktériumok szaporodásából származó gázminták soros vizsgálata, mint a BACTEC rendszerben (BACTEC 9050);

-arra kényszerítve a tenyészfolyadékot (a felszabadult CO2 nyomás alatt), hogy egy jelrekeszbe kerüljön, ahonnan mikroszkópos vizsgálattal és szubkultúrával vizsgálható, mint az OXOID SIGNAL SYSTEM 9-ben .

Ajánlások a meghatározáshoz

Bizonyos klinikai helyzetekben az orvos jelzése alapján történik, például:

• minden olyan láz, amely nem meghatározott eredetű, különösen, ha fertőzésre utaló klinikai tünetek kísérik;

• akut endocarditisben szenvedő betegek;

• specifikus baktériumok (enterális láz, brucellózis, leptospirosis) szisztémás fertőzésére utaló szindróma;

• súlyos lokalizált fertőzések (meningitis, tüdőgyulladás, intraabdominális supurációk).

A vérkultúrát emellett motiválja:

• immunhiányos betegek (rák, drogosok);

• az a beteg, akinek orvosi agresszió (katéter, dialízis vagy műtét) van kitéve, és lázas állapotban van;

• bizonyos speciális helyzetekben (terhes nő, szívbeteg, cukorbeteg, veseelégtelenségben, májelégtelenségben), amikor a beteg meghatározatlan eredetű lázzal jár 8 .

A beteg előkészítése

A mintavételt az antimikrobiális kezelés előtt végezzük, a lázas görbe prediktív evolúciójának megfelelően, vagy amikor a beteg hidegrázás megjelenését jelzi. Ha ez nem lehetséges, akkor közvetlenül az új antibiotikum adag beadása előtt vért vesznek. A jelek szerint három szakaszos mintát kell venni 24 órán belül; vészhelyzetekben a ritmus 30-60 perces időközönként van 6 .

Begyűjtött minta - vénás vér, lehetőleg éhgyomri (éhgyomri nélkül), hiperlipémia megakadályozhatja a folyékony környezetben a baktériumok szaporodását.

A szúráshoz választott területet a könyökboríték vénái képviselik. A mintavételi eljárás tiszteletben tartja az aszepszis és az antiszepszis normáit, amelyek szükségesek ahhoz, hogy elkerüljék a minta szennyeződését a bőr flórájában élő baktériumokkal. Vérvétel után a fecskendőbe gyűjtött 10 ml-es vérmintát a Signal tenyészközeggel ellátott edénybe helyezzük úgy, hogy szigorú aszeptikus körülmények között lyukasztjuk be a gumikupakját. Az üveget óvatosan rázzuk, hogy a közeg tömegében homogenizálódjon. A BACTEC rendszer esetében a betakarítást a vértenyésztő tartályban végezzük zárt vákuumrendszer elvén.

A mintát felcímkézik, és a lehető leghamarabb szállítják a betakarítástól a laboratóriumig, a lehető legközelebb a 37 ° C hőmérséklethez (izoterm doboz) 8 .

Szükséges anyagok - 10 ml steril fecskendő; ampulla 8. táptalajjal; táptalaj injekciós üveg (BACTEC PLUS AEROBIC/F és PLUS ANAEROBIC/F 4; 10; 14, BACTEC PÈDS PLUS ™/F 5 gyermekmintákhoz és kis vérmennyiségekhez) a BACTEC rendszerhez.

Betakarított mennyiség - felnőtt: 10 ml; gyermek: 3-5 ml (jel), 3-10 ml felnőtt és 1-3 ml gyermek (BACTEC) között 8 .

A bizonyíték elutasításának okai

• helytelenül gyűjtött minták (az antiszepszis szabályait nem tartották be);

• nem megfelelő szállítás 8 .

Feldolgozás szükségesnak,-nek betakarítás után - Jelrendszer: az ugyanabban a készletben szállított tágulási kamra csatlakozik. Inkubáljuk 37 ° C-on. Az inkubációs idő a termosztátnál és a mintát követve átlagosan 7 nap. Hosszan tartó inkubációra van szükség szubakut endocarditisben szenvedő betegeknél, antibiotikum-kezelés alatt (legfeljebb 14 napig) vett mintákban vagy igényes mikroorganizmusok követésekor 8 .

BACTEC rendszer: beolvassa a palackon lévő vonalkódot a vonalkód-olvasóhoz, és helyezze be az üveget a jelzett helyzetbe. Miután az ajtó becsukódott, a folyamat automatikusan elindul. A készülék kapacitása 50 üveg. Folyamatosan ellenőrzi a 35 o C-on inkubált vérkultúrás injekciós üvegeket. Az injekciós üvegeket folyamatosan rázzuk, hogy elősegítsük a baktériumok szaporodását. A pozitív injekciós üvegeket hallhatóan és vizuálisan jelzik. A rendszer 10 percenként automatikusan elvégzi a minőségellenőrzést. Integrált szoftver kezeli a 2. mintaadatokat .

Munkamódszer

A. A Signal-Oxoid készlethez; a következőkből áll:

a) Jelzőközeg-tartály; ennek a közegnek az összetétele lehetővé teszi aerob, anaerob és mikroaerofil csírák kifejlődését, ami a palackhoz igazított növekedési indikátor (tágulási kamra) által észlelt nyomásnövekedést okoz;

b) környezeti tágulási kamra; baktériumok szaporodása és nyomásnövekedés esetén a vér/húsleves keverék egy része átjut ebbe a kamrába, és jelzi a baktériumok aktivitását (pozitív vérkultúra) 4 .

A tesztek követésére a klasszikus módszert alkalmazzák:

• Makroszkópos - vizuális - vérkultúrás injekciós üvegek napi kétszeri vizsgálata a baktériumok szaporodásának jeleinek keresése érdekében. Az injekciós üveg megjelenése a kérdéses baktériumra irányulhat, például:

a) zavarosság - Gram-negatív aerob bacillusok, Staphylococcus spp, Bacteroides spp;

b) hemolízis - Streptococcus spp, Staphylococcus spp, Lysteria spp, Clostridium spp, Bacillus spp;

c) gáztermelés - aerob és anaerob Gram-negatív bacillusok;

d) alvadékok - Staphylococcus aureus.

• A friss készítmény és a Gram-festett kenet mikroszkópos vizsgálata a vérkultúrás injekciós üvegből.

Megjegyzés: a tartályok folyamatos keverése az inkubáció első 24 órájában javítja az aerob baktériumok túlnyomó többségének növekedését 9; 15 .

Kultúrák értelmezése a jelrendszerben

A növekedés hiánya - a Signal tartályban a környezet tiszta marad, és nem jut át ​​a tágulási kamra zöld hüvelyén. Az inkubáció első 6-12 órájában vak szubkultúrákat lehet készíteni (beoltás csokoládé-agarra CO2 atmoszférában 35 ° C-on további 48 órán át vagy tirazlikolos táptalajban resazurinnal) és Gram-festett kenet (mikroszkópos vizsgálat).

A hiányt növesztő tartályokat újra inkubálják és tovább ellenőrzik.

Pozitív vérkultúra - ha a vizsgálandó vérben vannak olyan baktériumok, amelyek megsokasodtak a táptalajban (pozitív vérkultúra), a környezet átjut a tágulási kamrába, és zöld hüvelye fölé emelkedik.

B. A BACTEC rendszer működési elve a következő:

Az anyagcsere-aktivitás révén az injekciós üvegben lévő mikroorganizmusok CO2-t szabadítanak fel, és a CO2-val érintkezve fluoreszkálóvá váló aktivációs markert tartalmazó injekciós üvegek kimutatják annak jelenlétét. A kamera fotodetektora méri a fluoreszcencia szintjét és elküldi az adatokat a számítógépnek. A mérést a rendszer az előre beprogramozott pozitivitási paraméterek szerint értelmezi. A számítógép azonosítja a pozitív fiolát, amelyet egy izzó hallhatóan és vizuálisan jelez. A pozitívan észlelt injekciós üveg grafikus helyzete megjelenik a készülék kijelzőjén.

Teljesen automatikus rendszerként az injekciós üvegeket 10 percenként ellenőrizzük, ami lehetővé teszi a pozitív injekciós üvegek azonnali kimutatását .

A megfigyelési protokoll 7 napos, de a mikroorganizmusok fejlődése 8 óra 2, 4; 10; 14 után kimutatható .

C. A pozitív vérkultúrákat a következőképpen dolgozzák fel:

Jelrendszer: Kis mennyiségű közeget vesznek a tágulási kamra alsó területéről. A tágulási kamrához annak felső részén keresztül, steril manőveren keresztül lehet hozzáférni. Ez a manőver nem szennyezi a Signal konténer tartalmát.

BACTEC rendszer: a palackhoz rögzített tűn keresztül olyan mennyiségű táptalajt vesznek fel, amelyből keneteket készítenek és elvetik a táptalajra 2 .

A mintába vett táptalajt a következőkre használják:

a) kenetek szétterítése mikroszkópos tárgylemezeken; Gram festés után megvizsgálják. A leolvasások eredményéhez viszonyítva ismétlések történnek.

b) transzplantáció szilárd és folyékony táptalajon, a mikroszkóposan bizonyított baktériumoktól függően: agar-vér/Columbia-vér, agar-csokoládé, Levine/MacConkey, Sabouraud kloramfenikollal, tioglikolát húsleves reszurin-val.

c) a lemezeket a mikroszkóppal exponált baktériumoktól függően 35–37 ° C hőmérsékleten, aerob körülmények között, 5–7% CO2-ot tartalmazó atmoszférában vagy anaerobiosisban (GasPack + redukáló keverék) inkubáljuk 48–72 órán át. Elszigetelt telepeket vizsgálunk.

d) Az azonosításhoz szükséges vizsgálatok: kataláz ID, staphylococcus azonosító készlet, streptococcus azonosító készlet, Optokin lemezek, X, V és XV faktor, enterobaktériumok politrop táptalaja, oxidáz reakció, API tesztek (API 20E, API 20NE, API NH stb.) tesztek az élesztő azonosítására. Az azonosítás automatikusan elvégezhető a Vitek rendszeren is.

e) antibiotikum vagy gombaellenes érzékenység vizsgálata diffuzimetriás vagy automatikus módszerrel a Vitek 9-en .

D. Az eredmények közzététele

a) részeredmény Gram-foltos kenet által - rögzítik és telefonon közlik;

b) az izolálás utáni végeredmény, a baktérium azonosítása és az antibiotogram vagy gombaellenes hatás.

A végeredmény értelmezését a klinikai kontextus és a pozitív ampullák száma alapján összegyűjtve 9 végzik .

• több pozitív vérkultúra patogén csírával;

• több pozitív vérkultúra közös kommensális csírával, bizonyos klinikai körülmények között;

• 1 pozitív vérkultúra ismert kórokozó csírákkal (Salmonella spp);

• 1 pozitív vérkultúra potenciálisan patogén csírákkal egy kiváltó klinikai helyzetben, például: Streptococcus pneumoniae tüdőgyulladásban, enterobaktériumok húgyúti fertőzésekben, koaguláz-negatív staphylococcus katéterfertőzésekben.

• 1 pozitív vérkultúra kommensális csírával, klinikai összefüggés nélkül: superinfekció koaguláz-negatív staphylococcus, corynebacteria, nem csoportosítható streptococcus;

• depressziós immunteren ezeket a baktériumokat is figyelembe veszik;

• normál immunterületen megismétlődik a vérkultúra.

• a mintát antibiotikum-terápia után gyűjtötték;

• a betakarítást későn végezték a betegség alatt (antitestek jelennek meg);

• nem elég mennyiségű összegyűjtött vér;

• a megfigyelési idő túl rövid;

• Helytelenül választott táptalaj.

Pozitív vérkultúrák több baktériumfaj esetében

Ha több baktériumfajt izoláltak egyetlen ampullában vagy ugyanazon beteg különböző fioláiból, azokat a következő esetekben kell megfigyelni:

• hosszú ideig karbantartott katéter.

Elszigetelt baktériumfajok a növekedési periódustól függően

• az első 1-2 napban nőnek: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp, enterobaktériumok;

• 3 nap elteltével megnő: nem fermentatív Gram-negatív bacillusok, anaerob baktériumok;

• 4-5. Napon: Haemophilus spp és koaguláz-negatív staphylococcus;

• 6-7 naponként: Candida fajok;

• 9. napon: corynebacteriumok 9 .

Határértékek és interferenciák

• a mintavétel előtt alkalmazott antimikrobiális kezelés;

• a vér exogén flórával való szennyeződése;

• nem elegendő mennyiségű vér;

• a rosszul megállapított betakarítások gyakorisága és ideje;

• helytelenül választott inkubációs és transzplantációs környezet;

• inkubációs idő nem megfelelő; 1; 6; 12 .

1. Akiyama H., Kanzaki H., Tada J., Arata J. A különböző bőrelváltozásokból izolált koaguláz-negatív staphylococcusok. D Dermatol, 25, 563-8. 1998. Ref. Típus: folyóirat (teljes).

2. Becton Dickinson és társai, Bactec 9050. Mikrobiológiai rendszerek Becton Dickinson, Sparks, Maryland 21152, USA, 1997

3. Dumitru Buiuc. Vérkultúra a fertőzés diagnosztizálásában. A klinikai mikrobiológiai értekezésben. Dumitru Buiuc, Marian Negut, Orvosi Könyvkiadó, Románia, 2. kiadás 2008, 165-182.

4. Goldenbaum P., Stafford E., Talbot B. Laboratóriumi tanulmány az antimikrobiális szerek semlegesítéséről gyantát tartalmazó vérkultúrás közeggel, hatodik európai klinikai mikrobiológiai és fertőző betegségek kongresszusa, 1993, 28-31.

5. Hardy L., Crowther L., Goldenbaum P., Beaty S . Sixth European Congress of Clinical MIcrobiology and Infectious Diseases, 1993, 28-31.

6. Joseph M.Civetta, Robert W. Taylor, Robert R. Kirby. Kritikus gondozás. In Lippincott Raven szerk. 1997; 28, 405-412.

7. Koontz FP., Flint KK., Reynolds JK., Allen S. Nagyközpontú (10 ml) nr BACTEC Plus és a Standard (5 ml) nr. BACTEC rendszer. A Diagn. Microbiol. Fertőz. Dis., 1991, 14: 111-8.

8. Kumar P.J., Clark M.L. A klinikai orvostudományban. Bailliere Tindall, Egyesült Királyság, 2. kiadás 1990, 710-720.

9. Synevo Laboratórium. Az alkalmazott munkatechnika konkrét hivatkozásai 2010. Ref.

10. Levievre H., Gimenez M., Vandenesch F. és mtsai. A gyantát tartalmazó palackok multicentrikus klinikai összehasonlítása standard aerob és anaerob palackokkal a vérből származó mikroorganizmusok tenyésztéséhez. Az Eur.J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 16, 669-674 (1997).

11. Loulergue J., Avril J. L., Omwanga D. Hemocultures. In Patológiai termékek vizsgálata. Maury- Imprimeur S.A. szerk. 1987, 41-45.

12. Philippona A., Paul C., Nevot P. Hemokultúra. Rev.Prat, 33: 1929-38. 1983. Ref. Típus: Napló (teljes)

13. Reimer L.G., Wilson M.L., Weinstein M.P. Frissítés a bakteriemia és fungemia kimutatásáról. A Clin. Microbiol. Rev. 10: 445-465. 1997. Ref típus: Napló (teljes).

14. Rohner P., Pepey Beatrice, Auckenthaler R., A gyanta és a Lytic BACTEC vérkultúra tápközeggel való kombinálásának előnye. J. Clin. Microbiol., 35 (10), 2634-8, 1997