Apolipoprotein E - genotipizálás - la

Általános információ

genotipizálás

Az Apolipoprotein E (ApoE) egy 299 aminosavú glikoprotein, amely kulcsszerepet játszik a lipid anyagcserében. Főleg a májban és az agyban szintetizálódik, de a vesékben vagy a lépben is megtalálható. Az idegrendszerben az asztroglia és a mikroglia az ApoE fő termelője, míg a neuronok előnyösen expresszálják az ApoE receptorait.

Az ApoE különféle plazma lipoproteinekhez kötődik, például kilomikronokhoz, nagyon kis sűrűségű lipoproteinekhez (VLDL) és nagy sűrűségű lipoproteinekhez (HDL). Részt vesz a chilomicron és a VLDL maradékok tisztításában, amelyek a lipoprotein receptorok ligandumaként szolgálnak (LDL receptor és apoE-specifikus májreceptor). A vérben lévő koleszterinfelesleget így a májsejtek felszínén lévő receptorokba történő transzport megszünteti feldolgozás céljából. A normál koleszterinszint fenntartása elengedhetetlen a szívkoszorúér-betegség és a stroke megelőzéséhez 1; 3; 4; 5; 6. Az ApoE fontos a koleszterin bél felszívódása szempontjából is .

A 19. kromoszóma hosszú karján elhelyezkedő APOE gén (amely 4 exonból és 3 intronból áll, 3597 bázispárral rendelkezik) polimorfizmusa három olyan allélt (ε2, ε3 és ε4) ír le, amelyek hat különböző genotípushoz vezethetnek (ε2/ε2), ε2/ε3, ε2/ε4, ε3/ε3, ε3/ε4 és ε4/ε4). A három allél három ApoE izoformát kódol: E2, E3 és E4, amelyek különböznek egymástól a 112. és a 158. pozícióban található aminosavak miatt. E3 - a kaukázusi populációban a leggyakoribb izoform a cisztein (Cys) a 112-es pozícióban és az arginin ( Arg) a 158. pozícióban. E4: Cys112 → Arg.

Az ε2, ε3 és ε4 allélok gyakorisága a kaukázusi populáció többségében a következőképpen változik:

Az APOE genotípus befolyásolja a lipoproteinek májsejtek általi felvételét, valamint a chilomichromok, a VLDL és a HDL részecskék katabolizmusát. Az ε3 allél a "normális" lipid anyagcseréhez kapcsolódó variáns. Másrészt számos tanulmány, amelyben értékelték az ApoE polimorfizmus szerepét a plazma lipideken, kimutatták, hogy az ε4 allél jelenléte az LDL-koleszterin emelkedésével, míg az ε2 jelenléte az LDL-koleszterin szintjének csökkenésével jár. Ezenkívül néhány tanulmány arról számolt be, hogy az ε4 allél a koszorúér-betegséggel társul, különösen a férfiaknál. Az ε2 és ε4 allélok jelenléte a plazma trigliceridek 3; 4; 5; 6 magas koncentrációját is okozza. Ezek a változások az E2 és E4 variánsok által a plazma lipidekre gyakorolt ​​ellentétes hatásoknak tudhatók be:

  • kevésbé hatékony chilomicron képződéssel és VLDL-hez kapcsolódik; a májba történő vérátvitel alacsonyabb, ami az étkezési zsírok lassú eltávolításához vezet;
  • a közepes sűrűségű lipoproteinek (IDL, amelyek valójában VLDL-maradékok) alacsonyabb átalakulását okozzák LDL-koleszterinné, ami alacsonyabb összkoleszterinszinthez és megnövekedett trigliceridszinthez vezet;
  • előnyösen kötődik a HDL-koleszterinhez;
  • lényegesen alacsonyabb affinitással rendelkezik a lipoprotein receptorok iránt.

  • korlátozza a HDL-koleszterin kötődését;
  • előnyösen kötődik a VLDL-koleszterinhez; így megakadályozva a koleszterin clearance normális folyamatát;
  • biztosítja az IDL gyors átalakulását LDL-vé;
  • globális hatás: az összkoleszterin, az LDL-koleszterin és a trigliceridek növekedése.

Az ε2/ε2 homozigóta genotípus a III-as típusú hiperlipoproteinémiával (familiáris dysbetalipoproteinemia), egy családi diszlipidémiával társul, amelyet a koleszterin és a szérum triglicerid szintjének együttes növekedése és egy nagy béta frakció jelenléte jellemez a lipoprotein ID elektroforézis során. Előfordulási gyakorisága 1/2000 és 1/10 000 között van, és a szívkoszorúér-betegség és a perifériás érrendszeri megbetegedések magas kockázatával jár. A betegség általában felnőttkorban kezdődik, de serdülőktől idősekig változó. Az érrendszeri betegségek kialakulása előtt a betegek általában nem mutatnak tüneteket, a legtöbb esetben a III. Típusú hiperlipoproteinémiát diagnosztizálják a rutin kontroll után, ahol a plazma koleszterin és trigliceridek változását észlelik. A klinikai megnyilvánulások közé tartozik az angina pectoris, a miokardiális infarktus vagy az intermittáló claudication. Kezeletlen embereknél xantómák figyelhetők meg (laposak a tenyérben vagy gumósak az ízületekben).

Az ε2/2 genotípus bemutatása elengedhetetlen a III-as típusú hiperlipoproteinémia diagnosztizálásához. A III-as típusú hiperlipoproteinémiában szenvedők több mint 90% -a homozigóta az ε2 allélra. Az ε2 allélra homozigóta emberek kevesebb mint 10% -a rendelkezik III-as típusú hiperlipoproteinémia klinikai megnyilvánulásaival. Ez arra utal, hogy más genetikai, hormonális vagy környezeti tényezők is hozzájárulnak a betegség fenotípusos expressziójához. A III. Típusú hiperlipidémiával konzisztens lipidprofillal rendelkező betegek az APOE 3 genotípusanalízisének tagjai; .

Az Apolipoprotein E fontos szerepet játszik az agyban a lipoprotein anyagcserében és a koleszterin homeosztázisában, ezért az ApoE gén ε4 alléljának hordozóinak nagy a kockázata az Alzheimer-kór (BA) kialakulásának. Az ApoE gén ε4 alléljának homozigótái általában fiatalabb korban fejlesztik ki a BA-t, mint a heterozigóták. Az ApoE genotipizálás nem specifikus és nem érzékeny, és csak adjuváns szerepe lehet a tünetekkel rendelkező egyének BA diagnózisában; tünetmentes embereknél kisebb a szerepe. Így az ε4 allél jelenléte nem szükséges és nem is elegendő a BA 7 kifejlesztéséhez .

Az ApoE gén felfedezését követően számos tanulmány összefüggést mutatott ki az ApoE gén polimorfizmusa és olyan krónikus betegségek között, mint az Alzheimer-kór, az életkorral összefüggő kognitív hanyatlás, az oszteoporózis, az emlőrák, a végstádiumú vesebetegségek, az érelmeszesedés, a cukorbetegség, a szívkoszorúér-betegség és a hosszú élettartam. 6. .

Ajánlások az ApoE genotipizálására - kardiovaszkuláris kockázatbecslés, terápia személyre szabása, III-as típusú hiperlipoproteinémia diagnosztizálása és Alzheimer-kór értékelése demenciában szenvedő betegeknél 1; 3; 4 .

Begyűjtött minta - vér jön 2 .

Betakarítási konténer - EDTA-t antikoagulánsként tartalmazó vakutainer 2 .

Betakarított mennyiség - amennyit a vákuum megenged 2 .

Az elutasítás okai megpróbálni - heparin antikoagulánsként történő alkalmazása 2 .

Tesztstabilitás - 7 nap 2-8ºC-on 2 .

Módszer - láncpolimerizációs reakció (PCR) agarózgél-elektroforézissel történő detektálással .

Az eredmények értelmezése

A kapott APOE genotípust közöljük 2 .

Határértékek és interferenciák

Ez a teszt nem fedezi fel az összes olyan mutációt, amely III. Típusú hiperlipoproteinémiát okoz. Ezért a kimutatható mutáció hiánya nem zárja ki annak lehetőségét, hogy az egyén hordozó lehet vagy érintett lehet ebben a betegségben.

A vizsgálati eredményeket a klinikai kontextus, a családtörténet és a további laboratóriumi adatok megléte alapján kell értelmezni. .