Epstein-Barr-vírus (EBV) DNS a vérben (kvantitatív) - Synevo
Általános információ
Az Epstein-Barr vírus (EBV) jóindulatú és rosszindulatú betegségek széles körével társul, beleértve: fertőző mononukleózis, limfóma, transzplantáció utáni limfoproliferatív szindróma és nasopharyngealis carcinoma.
A vírusgenom meghatározása Az EBV-DNS-t a klinikai laboratóriumokban egyre inkább használják a fertőzés által kiváltott betegségek diagnosztizálásában és monitorozásában 6 .
Az EBV-fertőzések széles körben elterjedtek, így 35–40 éves korukig a felnőttek 95% -a kapcsolatba került ezzel a vírussal. Sok gyermek életében korán megkapja a fertőzést, de a legtöbb esetben tünetmentes vagy enyhe felső légúti fertőzésként alakul ki 7. Serdülőknél és fiatal felnőtteknél az elsődleges EBV-fertőzés az esetek 35-50% -ában okozhat fertőző mononukleózist - jóindulatú limfoproliferatív állapotot, amelyet láz, fizikai aszténia, pharyngitis és polyadenopathia jellemez.
Az elsődleges fertőzéseket a megnövekedett virémia jellemzi, amely kimutathatatlan értékre csökken, mivel az immunrendszer felismeri és ellenőrzi a fertőzést. A többi herpeszvírushoz hasonlóan az EBV évekig szunnyadó állapotban maradhat a testben (látens fertőzés). Az időszakos reaktivációk átmeneti virémiával járnak. Néhány betegnél később EBV-fertőzéssel összefüggő neoplazmák alakulnak ki, és meghatározó jellemzőként nagyon magas a viremia szintje. Így az EBV-DNS kvantitatív meghatározása nemcsak az aktív fertőzést detektálja, hanem "tumor marker" is bizonyos típusú rosszindulatú folyamatokban 2; 3; 4; 9 .
Az EBV-hez társuló daganatok a transzplantáció utáni lymphoproliferatív szindrómák, nasopharyngealis carcinoma, szerzett immunhiányos szindrómával (AIDS) társult limfómák és Burkitt-lymphoma. .
Az EBV-fertőzés célsejtje a B-limfocita.Az immunhiányos betegeknél, akik nem rendelkeznek anti-EBV antitestekkel (gyakran gyermekek), fennáll annak a veszélye, hogy akut EBV-fertőzés alakul ki, amely limfoproliferatív szindrómákat okozhat; ezek közé tartoznak a transzplantáció utáni limfoproliferatív szindrómák és a szerzett immunhiányos szindrómával (AIDS) kapcsolatos limfómák 5. A transzplantáció utáni limfoproliferatív szindrómák előfordulási gyakorisága a veseátültetett betegek 1% -ától a szív/tüdő átültetett betegek 9% -áig és a hasnyálmirigy-átültetett betegek 12% -ától 7 .
Ajánlások az EBV-DNS mennyiségi meghatározására
A szerológiai diagnózis ritkán hasznos az immunhiányos betegek fertőzésének értékelésében és az EBV által kiváltott daganatok monitorozásában, különösen a transzplantáció után. Mivel a vírus tenyészete a klinikai laboratórium számára nem hozzáférhető, úgy véljük, hogy az EBV-DNS "tumor markerként" szolgálhat a limfoproliferatív betegségek és a nasopharyngealis carcinoma 2 értékelésében. A vérben lévő DNS mennyisége (kvantitatív PCR-rel számszerűsítve) néhány hónappal a limfoproliferatív betegség megjelenése előtt növekszik, és a terápia megkezdése után csökken. Emiatt az EBV-DNS meghatározása a vérben prediktív marker lehet a fogékony betegeknél, így megbecsülhető a transzplantáció utáni limfoproliferatív szindrómák kialakulásának kockázata a következő 3-4 hónapban, a viremia értékétől függően. A soros EBV-DNS meghatározások szintén hasznosak a lymphoproliferatív betegségben szenvedő betegek kezelésére adott válasz értékelésében 6 .
Nasopharyngealis carcinoma esetén a virémia magas a kezdetekkor, csökken a sugárkezelés során, a remisszió elérése után kimutathatatlanná válik, de relapszusokban továbbra is fennáll 1; 4 .
Betegképzés - nem szükséges 6 .
Begyűjtött minta - vér jön 6 .
Betakarítási konténer - vakuainer, amely antikoagulánsként EDTA-t tartalmaz 6 .
Betakarított mennyiség - amennyit a vákuum megenged 6 .
Betakarítás után szükséges feldolgozás - teszt nem centrifugáljuk 6 .
A bizonyíték elutasításának okai - régi, koagulált, hemolizált minták; heparin antikoagulánsként történő alkalmazása 6 .
Tesztstabilitás - a vérminták 3 napig stabilak 2-8 ° C-on. A minták nem fagynak meg! 6. .
Módszer - Valós idejű PCR: láncpolimerizációs reakció a felhalmozódott PCR termék valós idejű kimutatásával, a kibocsátott fluoreszcencia mérésével 6 .
Kimutatási határ - A munkamódszer kimutatási határa a lineáris tartományban (mérhető) 2415 NE/ml. Az analitikai érzékenység 1800 NE/ml. 1 NE/ml = 0,61 példány/ml 6 .
Az eredmények értelmezése
A virémiás értékek, amelyek a soros meghatározások során fokozatosan növekednek, poszttranszplantált limfoproliferatív szindrómákra utalnak.
Azoknál az immunhiányos betegeknél, akiknél a fertőzés reaktiválódik, de nem alakulnak ki limfoproliferatív szindrómák, általában alacsony a virémia.
Bizonyos esetekben az analizátor a módszer kimutatási határértéke alatti értékeket mutathat. Ezeket a következő megemlítéssel közöljük: „Lehetséges, hogy az eredmény nem reprodukálható a vírusgenom kis példányszámának köszönhetően” 8 .
Határértékek és interferenciák
A soros EBV-DNS meghatározások sokkal hasznosabbak a poszttranszplantált limfoproliferatív szindróma kockázatának felmérésében, mint egy izolált viremia 8 .
1. Chan AT, Lo YM, Zee B, Chan LY, Ma BB, Leung SF, Mo F, Lai M, Ho S, Huang DP, Johnson PJ. Plazma Epstein-Barr vírus DNS és reziduális betegség a sugárkezelés után differenciálatlan nasopharyngealis carcinoma esetén. In J Natl Cancer Inst, 2002; 94: 1614-1619.
2. David H. Persing, Thomas F. Smith, Fred C. Tenover. Az Epstein-Barr vírus PCR kimutatása és tipizálása. A diagnosztikai molekuláris mikrobiológiában. 1993. 344-355
3. H ventilátor, Gulley ML. Epstein-Barr vírusterhelés mérése az EBV-vel kapcsolatos betegség markerként. In Mol Diagn. 2001; 6: 279-289.
4. Gulley ML, Tang W. Epstein-Barr vírussal kapcsolatos betegség laboratóriumi vizsgálata. In J Molec Diagn, 2008; 10: 279-292.
5. Guy Boivin. A herpeszvírus diagnózisa A központi idegrendszer fertőzése. In Herpes 11. Kiegészítés 2004; 2, 49-54.
6. Synevo Laboratórium. Az alkalmazott munkatechnológia konkrét hivatkozásai. 2015. Ref Típus: Katalógus.
7. Luderer Rianne és mtsai. Valós idejű Epstein-Barr vírus PCR az elsődleges EBV fertőzések diagnosztizálására és az EB reaktivációjára. In Molecular Diagnosis, 2005; 9 (4): 195-200.
8. Mayo Clinic/Mayo Medical LaboratoriesTesztkatalógusok és útmutatók. Epstein-Barr vírus (EBV) DNS-detektálás PCR-rel, kvantitatív, vér. www.mayomedicallaboratories.com. Ref típus: Internetes kommunikáció.
9. Ryan JL, Fan H, Swinnen LJ, Schichman SA, Raab-Traub N, Covington M, Elmore S, Gulley ML. Az Epstein-Barr vírus (EBV) DNS-t a plazmában nem kapszulázzák EBV-vel kapcsolatos rosszindulatú daganatokban szenvedő betegek. In Diagn Mol Pathol. 2004; 13: 61-68.