Hasi tapadások létrehozása az egerek protokolljában (németre fordítva)
Bevezetés
A hasi adhéziók a hegszövet egyik formája, amely a hasban alakul ki gyulladásra reagálva, általában műtét vagy intraabdominális fertőzés után. Az adhéziók a krónikus hasi fájdalom és meddőség egyik fő oka, és a vékonybél elzáródásának vezető okai 1. Az adhéziók jelenléte megnehezíti a második hasi műtét elvégzését és növeli a szövődmények valószínűségét.
Évek óta tartó kutatások ellenére a tapadások kialakulásának hátterében álló mechanizmusok továbbra sem ismeretesek. Ismeretes, hogy a hashártya felszínének kezdeti károsodása fibrinekben gazdag folyadék váladékozását okozza, amely aztán egy alvadékot képez, amely összeköti a bél és a hasfal 3 felületeit. Később a fibroblasztok és más sejtek vándorolnak a tapadó felületre, és elválasztják a kötőszövetet 4. Hónapok, évek alatt kialakul az erek és az idegek tapadása 5.
Számos olyan kereskedelmi termék létezik, amelyeket hasi műtétek utáni adhéziók kialakulásának csökkentésére terveztek (pl. Seprafilm). Mindezek a termékek mechanikai akadályként hatnak, és megakadályozzák a tapadás kialakulását, megakadályozva a bélhurok és a hasfal közötti fizikai érintkezést 6,7. Annak ellenére, hogy egy ellenőrzött tanulmány bizonyítja, hogy a műtéti tapadásgátló csökkenti a tapadások kialakulását 8, anekdotikusan sok sebész csalódott a mechanikus gáttermékek hatékonyságában.
Jelenleg nincs gyógyszeralapú adhézió-ellenes terápia, ami azt a tényt tükrözi, hogy a tapadás kialakulásában szerepet játszó pontos folyamatokat rosszul ismerjük. Egy olyan terápia kifejlesztése, amely kifejezetten az adhéziók kialakulásában részt vevő sejt- vagy molekuláris szereket célozza meg, megköveteli az adhézió kialakulásában szerepet játszó események jobb megértését. Számos csoport azonosított molekuláris mechanizmusokat, amelyek fontosak lehetnek a 9-11. Az állatmodellek kiváló környezetet biztosítanak a tapadások kialakulásához a tanulmányozáshoz. Számos állat, számos patkány és egér, 6,12-14, publikálta a felelősség műtéti kialakulását. Az egerek fibrózisával kapcsolatos tapasztalataink és a transzgénikus egerek és egéralapú antitestek széles körű rendelkezésre állása miatt az egeret választottuk modellként az adhéziók vizsgálatához. Itt beszámolunk arról a technológiáról, amelyet azért fejlesztettünk ki, hogy reprodukálhatóan és megbízhatóan hozzunk létre adhéziókat az egérben.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Jegyzőkönyv
Az alábbi protokollt a Stanford Egyetemi Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottság (IACUC) hagyta jóvá, és megfelel a laboratóriumi állatok felhasználására vonatkozó valamennyi intézményi etikai irányelvnek.
1. Adhéziók létrehozása
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Reprezentatív eredmények
A műtét után hét nappal a vakbélnek, esetleg a felszálló vastagbélnek, a májnak és a vékonybélnek meg kell tapadnia a jobboldali hasfalon. (8. ábra) A megszakadt szövetek beágyazhatók és levághatók, és kiváló szövettani metszeteket adnak. (11, 12)
Ha az eljárást helyesen hajtják végre, az egerek 100% -ának hét nap alatt jelentős tapadással kell rendelkeznie. A halálozásnak 5% alatt kell lennie.
1 ">
trong> 9. ábra: Adhéziós szövet kivágása. a) és b) Az alatta lévő bélbe beolvadt bőr és hasfal "szigete" felszabadul, ha teljes körben vágja a tapadó területet. Kattintson ide az ábra nagyobb változatának megtekintéséhez.
jove_content "fo: keep-together.within-page =" 1 ">
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Vita
Ennek az eljárásnak a kritikus lépései: a vakbél alapos csiszolása anélkül, hogy perforálódna, varratok kerülnek a hasfalba, és megfelelő mennyiségű erőt alkalmaznak. Csiszolópapírt csak a vakbélre vagy a bél egy kis meghatározott részére vigyen fel. A smirglipapír széles körű használata a vékonybél nagy mennyiségénél jelentős ileust okozhat. Óvatosan csiszolja a vakbélet elég erővel, hogy a felület érdes legyen, de ne annyira, hogy a fal megrepedjen. Az egyensúly megtalálása időt vehet igénybe. Óvatosan fogja meg a bélt, és kerülje az éles vagy fogcsipeszt a bél manipulálásához. Könnyű véletlenül vérzést okozni, ha csipesszel megfogja a vékonybél nyelőcsövét, vagy ha túl erősen meghúzza a belet.
Ha a vakbél falán repedés történik, az eljárást le kell állítani, és az állatot eutanizálni kell. Tapasztalataink szerint a vakbélszakadás néhány nap múlva állatpusztulást eredményez, még akkor is, ha a könnyet jól megjavítják. Ezenkívül a vakbél falának megrepedése kiömlött székletet okoz, amely kiszámíthatatlan módon befolyásolja a gyulladásos reakciót.
A vérzéscsillapításnak az eljárás végén teljesnek kell lennie. Egyes vérző erek újra megnyílnak és vérezni kezdenek, miután abbahagyták a vérzést. Ha kétségei vannak, tegye a nyolcas varrás abszorbeálható monofil alakját a vérzési pont köré. Ez a fonal előnyösebb, mint a selyem vagy a fonott felszívódó varrás, mert minimális ellenállással kihúzható, bár a szövet. Megállapítottuk azonban, hogy a selyem vagy a fonott felszívódó varrat a leghatékonyabb a hasi oldalfal tapadásának kiváltására, mint a kevésbé gyulladásos monofil.
A keményítő alkalmazása az eljárás végén elősegíti a tapadások kialakulását, de azt tapasztaltuk, hogy a túlzott mennyiségű keményítő gyulladásos választ okoz, amely halált okoz. A keményítőt enyhén meg kell szórni. Nem kellene annyira, hogy szilárd réteget képezzen.
Első tanulási eljárásként gyakran több egeret veszítenek. Tapasztalataink szerint a halál leggyakoribb oka a bél túlzott kopása okozta ileus okozta kiszáradás és a bél perforációja által okozott szepszis. A vérzés okozta halál akkor fordulhat elő, ha a műtét végén nem érhető el teljes hemosztázis.
Ha a tapadások kialakulása nem kielégítő, vegye fontolóra a vakbél és a jobb oldali fal agresszív kopását, amely nagyobb szilárdságot hagy maga után, vagy helyezzen több varratot a hasi oldalfalra. Tapasztalataink szerint kevesebb, mint egy hét várakozás a has előtt újból nem megfelelő tapadás kialakulását eredményezi. Másrészt, ha a műtét után az egerek halálozási aránya magas, fontolja meg a függelék kevésbé agresszív kopásának alkalmazását, pontosabban a vérzéscsillapítás ellenőrzésére, és másrészt kevesebb keményítő alkalmazását. Fontos továbbá, hogy a műtét során gondosan figyeljük az egér légzésszámát. Ha a sebész tapasztalatokat szerez ezzel az eljárással, a halálozási aránynak 10% alatt kell lennie.
Ezt a technikát úgy fejlesztették ki, hogy elsősorban tapadásokat alakítson ki a vakbél és a has jobb oldali fala között. A tapadás gyakran kialakul a vékonybél, a máj és a középvonal metszése között is. Ennek a technikának az alkalmazása általában nem okoz tapadást a has bal oldalán. Ennek a technikának az a korlátja, hogy a bél és a hasfal közötti tapadások nagyobb valószínűséggel alakulnak ki, mint a belek hurkai közötti tapadások. Ezenkívül valószínűleg nem eredményez ragasztóval teli szövetet egy teljesen megfagyott gyomorban, ami gyakran előfordul több műtéten átesett embereknél.
Tartalom "> Mivel ez a technika következetesen ragasztószövetet képez a függelék és az oldalfal között, úgy gondoljuk, hogy ideálisan a vizsgálati beavatkozások során lett kialakítva a tapadás kialakulásának csökkentésére. Ez a technika alkalmazható a molekuláris utak és sejttípusok feltárására is részt vesznek a tapadás kialakulásában. A tapadási szövet könnyen kivágható és készen áll a szövettanra, kiváló szövettani képeket biztosítva (11., 12. ábra) lehet.
Egyes kutatók olyan modellre vágyhatnak, amelyben az adhéziók az idő kevesebb mint 100% -át képezik. A keményítő alkalmazásának elmaradása a tapadás mértékét körülbelül 80% -ra csökkenti. A jobb hasfalba helyezett selyemszálak számának csökkentése tovább csökkenti a tapadási sebességet.
Tapasztalataink szerint a műtét utáni hetedik nap az első időpont, amikor a belek következetesen a hasfalhoz kapcsolódnak. Ugyanakkor más idők is relevánsabbak lehetnek, a projekt fókuszától függően. Például a neutrofilek és makrofágok fogdába történő migrációja iránt érdeklődő kutatók azt kívánják, hogy a műtétet követő első öt napban szövetet gyűjthessenek. Másrészt a kollagén lerakódása a fibroblasztok által a kezdeti sérülés után hetekig zajlik, és ezért célravezetőbb a műtét után több hétig terjedő időnként a szövetek vizsgálata.
A műtéti nagyítók nagyon hasznosak a műtéti terület nagyításához, miközben ezt az eljárást végzik. Sebészeti mikroszkóp is használható, de a sebész korlátozottan képes a műtéti teret különböző szögekből megvizsgálni. Az eljárás nagyítás nélkül is elvégezhető.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Közzétételek
A szerzők kijelentik, hogy nincsenek pénzügyi érdekeik.
Köszönetnyilvánítás
A CDM-et az American College of Surgeons (ACS) Resident Research Fellowship támogatta. Az MSH-t a Kaliforniai Regeneratív Orvostudományi Intézet (CIRM) klinikai ösztöndíjas TG2-01159 támogatása támogatta. Az MSH-t, a HPL-t és az MTL-t az American Maxillofacial Surgeons Society (ASMS)/Maxillofacial Surgeons Foundation (MSF) kutatási ösztöndíja támogatta. A HPL-t az NIH R01 GM087609 támogatása, valamint Ingrid Lai és Bill Shu ajándéka támogatta Anthony Shu tiszteletére. A HPL-t és az MTL-t a Hagey Gyermekregeneratív Orvostudományi Laboratórium és az Oak Alapítvány támogatta. Az MTL-t a Gunn/Olivier Alap támogatta.