Környezetvédelmi online demo archív fájl - 67548EWG irányelv a jogi és
B.32. 1. módszer
B.32. 1.1. bevezetés
Lásd az általános bevezetés B. részét
B.32. 1.2. Definíciók
Lásd az általános bevezetés B. részét
B.32. 1.3. Referenciaanyagok
B.32. 1.4. A módszer elve
A vizsgált anyagot általában az életciklus nagyobb részében a hét 7 napján adják be a tesztállat-csoportoknak, megfelelő beadási módot alkalmazva, csoportonként egy adagot. Az expozíció alatt és után naponta megfigyelik a tesztállatokat a mérgezés jelei, különösen a daganatok kialakulása szempontjából
B.32. 1.5. Minőségi kritériumok
B.32. 1.6. A módszer leírása
A kísérlet megkezdése előtt az állatokat legalább 5 napos időtartamra akklimatizálják kísérleti tartási és etetési körülmények között. A kísérlet megkezdése előtt az egészséges fiatal állatokat randomizálták, és a szükséges számú kezelési és kontrollcsoportba sorolták.
Az előnyös kísérleti állat a patkány. Más állatfajok (rágcsálók vagy nem rágcsálók) azonban felhasználhatók a korábbi vizsgálatok eredményei alapján. A vizsgálatokat fiatal, egészséges állatokkal kell elvégezni, közös laboratóriumi állattörzsekből; a vizsgált anyag beadását az anyától való elválasztást követő megfelelő időszakban kell megkezdeni.
A kísérlet kezdetén az állatok testtömegének változékonysága nem haladhatja meg az átlagérték ± 20% -át. Ha egy szubkrónikus orális toxicitás meghatározása megelőzi a hosszú távú vizsgálatot, mindkét esetben ugyanazt az állatfajt vagy kísérleti állat törzset kell használni.
Szám és nem
Rágcsálóknál legalább 100 állatot (50 nőstény és 50 hím) kell használni minden adaghoz és a megfelelő kontrollcsoporthoz. A nőstények nem lehetnek almozottak és nem lehetnek terhesek. Ha a kísérlet során állatokat akarnak leölni, az állatok teljes számát meg kell növelni a kísérlet vége előtt leölendő állatok számával.
Adagolások és az expozíció gyakorisága
Legalább három dóziscsoportot és egy további kontrollcsoportot kell használni. A legmagasabb dózist úgy kell megválasztani, hogy csak mérgező tünetek jelentkezzenek, például késleltetett testtömeg-növekedés (kevesebb, mint 10%). Az állatok normális élettartamát azonban a daganattal kapcsolatos következményeken kívül más következmények nem befolyásolhatják.
A legalacsonyabb dózis nem befolyásolhatja az állatok normális növekedési és fejlődési folyamatát vagy élettartamát, és nem okozhat toxikus hatások jeleit. Ennek általában nem lehet kevesebb, mint a legmagasabb adag 10 százaléka.
Az átlagos dózis a legnagyobb és a legalacsonyabb dózis között van.
Az adagok kiválasztásakor figyelembe kell venni a korábbi kísérletek adatait.
Az expozíció általában napi. Ha az anyagot ivóvízben adják be vagy keverik a takarmánnyal, a víznek vagy a takarmánynak mindig hozzáférhetőnek kell lennie az állatok számára.
A tesztanyagnak való kitettség kivételével a kontrollcsoportnak minden tekintetben meg kell felelnie a kísérleti állatcsoportoknak.
Különleges körülmények között, például inhalációs vizsgálatok során aeroszol vagy orális toxicitási vizsgálatokban ismeretlen biológiai hatású emulgeálószer alkalmazása esetén javasoljuk egy további, kezeletlen kontrollcsoport alkalmazását, akinek a hordozót nem szabad beadni.
Főleg orális, dermális és inhalációs alkalmazást alkalmaznak. Az alkalmazás módjának megválasztása a vizsgált anyag fizikai és kémiai tulajdonságaitól, valamint az emberi expozíció típusától függ.
Ha a vizsgált anyag felszívódik a gyomor-bél traktusból, és emberben orális úton történő expozíció lehetséges, akkor az orális alkalmazási módot kell választani, feltéve, hogy nincs ellenjavallat. A vizsgált anyagot az állatoknak takarmányban, ivóvízben vagy kapszulákban kell feloldani.
Kívánatos a napi adagolás a hét 7 napján, mivel az adagolás nélküli időszakban ötnapos ritmussal helyreállítás vagy a mérgezés tüneteinek csökkenése lehetséges, így befolyásolhatja az eredményt és az értékelést. Gyakorlati okokból azonban az ötnapos beadási ciklust elfogadhatónak tekintik.
A bőrön történő expozíció a bőrön történő alkalmazással kiválasztható az emberek egyik fő expozíciós módjának szimulálására; modellként szolgál a bőrelváltozások kiváltására is.
Mivel az inhalációs alkalmazással kapcsolatos vizsgálatok nagyobb technikai problémákat vetnek fel a beadás más módjaihoz képest, itt részletesebb utasításokat kell adni. Meg kell jegyezni, hogy az intratracheális beültetés érvényes alternatíva különleges esetekben.
Hosszú távú expozíció esetén általában egy feltételezett emberi expozíciót veszünk alapul, amely után az állatokat napi 6 órán keresztül, 5 napig teszik ki, egyenletes vizsgálati kamra koncentráció mellett (szakaszos expozíció). Vagy feltételezzük azt a lehetséges környezeti expozíciót, amikor az állatokat 22–24 órán át, 7 napon keresztül (folyamatos expozíció) tesszük ki a vizsgált anyaggal, és napi egy órát biztosítunk a kamra etetésére és karbantartására egyidejűleg. Mindkét esetben az állatokat általában a vizsgált anyag rögzített koncentrációjának teszik ki. Az időszakos és folyamatos expozíció között figyelembe veendő fő különbség az, hogy az előbbi esetben az állatok 17-18 órás expozíció mentes időszakban és a hosszabb hétvégi időszak alatt gyógyulhatnak meg a napi expozíció hatásaiból.
Az expozíció két formája közül melyiket választják, a kérdéses vizsgálat célkitűzéseitől és a vizsgálattal szimulálandó emberi feltételektől függ. Bizonyos technikai nehézségeket azonban figyelembe kell venni. Például a környezeti viszonyok szimulálásakor a folyamatos expozíció előnyeit valószínűleg ellensúlyozza az állatok vízzel és takarmánnyal való ellátásának szükségessége, valamint a kifinomultabb (és megbízhatóbb) aeroszol- és gőzképző és monitoring technikák iránti igény.
Az állatkísérletekhez olyan inhalációs rendszert kell használni, amely lehetővé teszi a dinamikus légsebességet, óránként legalább tizenkétszeres légcserével, a megfelelő oxigéntartalom és a vizsgált anyag egyenletes eloszlásának biztosítása érdekében. A kontroll és a kísérleti állatok vizsgálati kamráinak tervezési és felépítési szempontból azonosaknak kell lenniük annak érdekében, hogy minden szempontból összehasonlítható körülményeket teremtsenek - a vizsgált anyagnak való kitettség kivételével.
A tesztkamrában általában enyhe negatív nyomás keletkezik annak megakadályozása érdekében, hogy a vizsgált anyag kijusson a kamrából. A tesztkamráknak biztosítaniuk kell, hogy a kísérleti állatok a lehető legkevesebb összeszorításra kerüljenek. Az inhalációs kamrában a légkör stabilitásának biztosítása érdekében a kísérleti állatok össztérfogata nem haladhatja meg a kamra térfogatának 5% -át.
A következő méréseket vagy ellenőrzéseket kell elvégezni:
Az állatok napi megfigyelése során különös figyelmet kell fordítani a bőr, a szőr, a szem, a nyálkahártya, a légző- és keringési rendszer, az autonóm és a központi idegrendszer, valamint a szomatomotoros és viselkedési minták változásaira.
Az állatok rendszeres megfigyelésére azért van szükség, hogy a lehető legnagyobb mértékben biztosítsuk, hogy az állatok száma a vizsgálat során ne csökkenjen a kannibalizmus, a szövetek autolízise vagy az állatok mozgatásának hibái miatt. A halandó állatokat külön kell kiemelni, le kell ölni és fel kell boncolni.
Minden állat esetében fel kell jegyezni a klinikai tüneteket és a mortalitást. Különös figyelemmel kell követni a daganatok kialakulását, fel kell jegyezni az egyes jól látható vagy tapintható tumorok kialakulásának idejét, helyét, kiterjedését, megjelenését és progresszióját.
A táplálékfelvételt (és a vízfogyasztást, ha a vizsgált anyagot ivóvízzel adják be) hetente kell meghatározni a vizsgálat első 13 hetében, majd három hónapos időközönként, hacsak az állatok egészségi állapota vagy testtömege nem igényel más intézkedéseket.
Az egyes állatok testtömegét hetente egyszer, a vizsgálat első tizenhárom hetében, majd ezt követően legalább hetente egyszer fel kell jegyezni.
Ha az állatok megfigyelése az egészségi állapot romlására utal a vizsgálat során, akkor a beteg állatok differenciális vérképét kell elvégezni.
12 hónap, 18 hónap elteltével és az áldozat elõtt minden állatból vérmintát készítenek. Differenciál vérképet veszünk a legmagasabb dózisú és a kontroll csoportba tartozó állatoktól. Ha ennek az elemzésnek az eredményei, de különösen az utolsó, az elejtés előtt elvégzett elemzés, vagy a kóros vizsgálatok adatai megfelelőnek tűnik, differenciál vérképet kell készíteni a következő alsó csoportokra.
Teljes boncolást végeznek minden állaton, beleértve azokat is, akik a kísérlet során elhunytak vagy betegség miatt leölték őket. Minden felismerhető daganatot vagy gyanús változással rendelkező szövetet meg kell őrizni.
A következő szerveket és szöveteket meg kell őrizni megfelelő közegben a későbbi kórszövettani vizsgálatokhoz: minden észrevehető elváltozás, agy - beleértve a medulla/potak szöveti szakaszait, a kisagy és az agykéreg, az agyalapi mirigy, a pajzsmirigy/mellékpajzsmirigy, a csecsemőmirigy szövet, a légcső és a tüdő, a szív, Aorta, nyálmirigyek, máj, lép, vese, mellékvese, hasnyálmirigy, nemi mirigyek, méh, egyéb nemi szervek, bőr, nyelőcső, gyomor, nyombél, jejunum, ileum, vakbél, vastagbél, végbél, hólyag, reprezentatív nyirokcsomók, női emlőmirigy, combizmok, A perifériás rendszer idegei, szegycsont csontvelővel, combcsont - beleértve az ízület felületét, a gerincet, a nyakat, a mellkasi és ágyéki régiót, a szemeket.
A tüdő és a húgyhólyag rögzítő oldattal történő csepegtetése jelenti e szövetek optimális megőrzését; Az inhalációs vizsgálatokban a tüdő ilyen rögzítési módszere előfeltétele az optimális hisztopachológiai vizsgálatnak. Az inhalációs vizsgálatok során meg kell őrizni a teljes légzőrendszert, beleértve az orrát, garatát és gégéjét.
- A vizsgálat során elpusztult vagy elpusztított összes állat szervét, valamint a kontrollcsoport és a nagy dózisú csoportok összes állatát teljes hisztopatológiai vizsgálatnak vetik alá;
- minden daganat vagy gyanús változás az összes csoportban;
- Ha a legnagyobb dóziscsoport és a kontrollcsoport között jelentős eltérés tapasztalható a daganatos változások gyakoriságában, akkor az érintett szervet vagy szövetet hisztopatológiai vizsgálatnak kell alávetni a többi dóziscsoportban is;
- ha a túlélési arány a legmagasabb dózisú csoportban lényegesen alacsonyabb, mint a kontroll csoportban, a következő alacsonyabb dózisú csoportot teljes mértékben ki kell vizsgálni;
- Ha a legmagasabb dózisú csoportban kimutatható toxikus hatás, amely befolyásolhatja a daganat fejlődését, a következő alacsonyabb dózisú csoportot teljes mértékben meg kell vizsgálni.
B.32. 2. Adatok
Az adatokat táblázatos formában kell összefoglalni. Ennek minden egyes tesztcsoport esetében a következő információkat kell tartalmaznia: az állatok száma a vizsgálat kezdetén, a vizsgálat során kimutatott daganatos állatok száma, a kimutatás ideje és azoknak az állatoknak a száma, amelyekben a boncolás után daganatot észleltek. Az eredményeket megfelelő statisztikai módszerrel kell értékelni. Ehhez elismert statisztikai módszer használható.
B.32. 3. Zárójelentés
B.32. 3.1. jelentés
Ha lehetséges, a következőket kell megadni a vizsgálati jegyzőkönyvben:
- Állatfaj, állati törzs, eredet. Lakhatási feltételek, etetés.
- Teszt feltételek:
Az expozíciós készülék leírása
beleértve a kivitelt, a típust, a méreteket, a levegőforrást, a részecske- és aeroszolképző rendszert, a légkondicionáló rendszert, a kipufogógáz-levegő kezelését és az állatok elhelyezését a tesztkamrában a vizsgálatok végrehajtása során. Le kell írni a hőmérséklet, a páratartalom és, ha szükséges, az aeroszolkoncentráció vagy a részecskeméret stabilitásának mérésére szolgáló eszközöket.
Ezeket az adatokat táblázatos formában kell összefoglalni, megadva az átlagértékeket és figyelembe véve az ingadozásokat (pl. Szórás). A következő információkat kell tartalmazniuk:
B.32. 3.2. értelmezés
Lásd az általános bevezetés B. részét; G
B.32. 4. Irodalom
Lásd az általános bevezetés B. részét; H
környezet-online - demo verzió
Összes teljes Szövegek a jelenlegi verzióban az éves előfizetésben
Használati díj: nettó 90.- € (alapengedély)
(jelenleg kb. 7200 cím lásd az áttekintést - nincs felosztás témákra)
Árak és megrendelés
A belépési kódot rövid időn belül elküldik