Nagy zsírtartalmú étrend etetés és nagy áteresztőképességű triacil-glicerid-vizsgálat Drosophila Melanogaster-ben
Összegzés
Ez a magas zsírtartalmú étrend protokoll az elhízás kiváltására Drosophilában, a lipotoxicitásban részt vevő alapvető molekuláris mechanizmusok megértésének modellje. Nagy hozamú triacil-glicerid vizsgálatot is biztosít a zsír felhalmozódásának mérésére a Drosophila-ban és potenciálisan más modellekben (rovarokban) különféle étrendi, környezeti, genetikai vagy fiziológiai körülmények között.
Absztrakt
A szívbetegség az emberi halálozás első számú oka a világon. Számos tanulmány kimutatta az emberek közötti elhízás és a szívelégtelenség közötti szoros kapcsolatot, de további eszközökre és kutatási erőfeszítésekre van szükség az érintett mechanizmusok jobb megvilágításához. A Drosophila genetikailag nagyon tanulékony modellje több mint egy évszázada hozzájárult a legfontosabb gének és molekuláris utak felfedezéséhez, amelyekről kimutatták, hogy fajok között rendkívül konzerváltak. Számos biológiai folyamat és betegségmechanizmus funkcionálisan konzervált a légyben, például a fejlődés (pl. Testterv, szív), a rák és a neurodegeneratív betegségek. A közelmúltban az elhízás és a másodlagos kórképek, például a szívbetegségek vizsgálata a modell organizmusokban, kritikus szerepet játszott a metabolikus szindrómában részt vevő legfontosabb szabályozók azonosításában az emberekben.
Javasoljuk, hogy ezt a modellszervezetet használják hatékony eszközként az elhízás kiváltására, például a túlzott zsírfelhalmozódásra és egy hatékony protokoll kidolgozására a zsírtartalom TAG-k felhalmozódása formájában történő figyelemmel kísérésére. A nagyon konzervált, de kevésbé összetett genom mellett a légynek rövid élettartama van a gyors kísérletezéshez, költséghatékonysággal kombinálva. Ez a dokumentum részletes protokollt tartalmaz a magas zsírtartalmú diéta (HFD) diétájához Drosophila-ban az elhízás kiváltása érdekében, és nagy áteresztőképességű triacil-glicerid (TAG) vizsgálatot a zsírtartalom kapcsolódó növekedésének mérésére, azzal a céllal, hogy "nagy reprodukálhatóság és hatékony legyen nagy skála genetikai vagy kémiai szűrés. Ezek a protokollok új lehetőségeket kínálnak az elhízáshoz kapcsolódó szabályozási mechanizmusok hatékony kivizsgálására, valamint szabványosított platformot kínálnak a kábítószer-felfedezéssel kapcsolatos kutatások számára a potenciális gyógyszerek fejlesztésre vagy megelőzésre gyakorolt hatásának gyors tesztelésére. Elhízás, cukorbetegség és a kapcsolódó anyagcsere-betegségek.
Bevezetés
Maga a HFD-táplálék kókuszolajjal kiegészített standard laboratóriumi légyeledelből származik, amely elsősorban telített zsírsavakból áll, amelyekről ismert, hogy metabolikus szindrómához kapcsolódnak 18. Az elhízás kiváltása emlős modellekben, például rágcsálókban, 19, 20 hónapot vehet igénybe, optimalizált HFD, Drosophila táplálási protokollunk 12 nap alatt hatékonyan és reprodukálható módon növeli a szervezet zsírtartalmát, 14. Ez a protokoll, a nagy áteresztőképességű TAG vizsgálattal együtt, lehetővé teszi a genetikai tényezők, a környezeti hatások és a gyógyszerjelöltek hatásainak hatékony tömeges szűrését a zsíranyagcsere új modulátorainak felfedezéséhez. Ennek eredményeként ezek a protokollok valószínűleg relevánsak az elhízás és az elhízással járó emberi kórképek megértése és leküzdése terén.
Az étrendi protokoll sokoldalú és alkalmazható a telített vagy telítetlen zsírsavak metabolikus és funkcionális hatásainak tanulmányozására. Ennek a nagy áteresztőképességű TAG tesztnek a használata nem korlátozódik d-re. melanogaster, de adaptálható kutikula vagy nehéz extracelluláris mátrixú kis modell organizmusok sokaságához (pl. más Drosophila fajok, C. elegans és más új gerinctelen szervezetek) a zsírtartalom mérésére különböző környezeti körülmények között, genetikai vagy fiziológiai szempontból, a fejlődés bármely szakaszában, felnőttkorban vagy a metabolikus betegség fázisában. A TAG azon enzimatikus reakciók kolorimetriás mérésén alapul, amelyek lebontják a címkéket zsírsavakban, glicerinben, glicerin-3-foszfátban és végül H2O2-ban, amely reagál az amino-4 antipirinnel (4-AAP) és a 3, 5-diklórral. -2-hidroxi-benzol-szulfonát (DHBS 3,5) vörös színű terméket állít elő, amelyet 96 üregű spektrofotométerrel mérünk.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Jegyzőkönyv
1. HFD, etetési protokoll