Ortotopikus endometrium rákmodell, in vivo készült retoperitonealis limfadenopathiával
Összegzés
Ez a protokoll szabványosított módszert biztosít a VX2 sejtek tenyésztésében és az endometrium rák ortopotikus VX2 modelljének létrehozására retroperitoneális nyirokcsomó áttétekkel nyulakban. Az orthotopikus endometrium rák modellek fontosak a nyirokcsomó metasztázisok diagnosztizálására szolgáló új képalkotási módok pre-klinikai vizsgálatában.
Absztrakt
Az endometrium rákja a leggyakoribb nőgyógyászati malignus betegség Észak-Amerikában, és az incidencia világszerte növekszik. A kezelés adjuváns terápiával vagy anélkül végzett műtétből áll, a nyirokcsomók érintettségétől függően, amelyet a lymphadenectomia határoz meg. A nyirokcsomó-eltávolítás olyan kóros eljárás, amelynek számos beteg számára nincs terápiás haszna, ezért új módszerre van szükség a nyirokcsomó-áttétek diagnosztizálására. Az új képalkotó szerek teszteléséhez az endometrium rákjának megbízható modellje szükséges retroperitoneális nyirokcsomó áttétekkel. A VX2 endometrium carcinoma modellt széles körben leírta az irodalom; Jelentős különbségek vannak azonban a modell beállításának módszerében. Ezenkívül nem számoltak be tanulmányokról a tenyésztett VX2 sejtek felhasználásáról ennek a modellnek a létrehozására, mivel eddig csak az in vivo szaporított sejteket használták. Bemutatunk egy standardizált műtéti és posztoperatív monitorozási módszert a VX2 endometrium rák modelljének létrehozására, és beszámolunk a tenyésztett VX2 sejtek első használatáról ennek a modellnek a létrehozására.
Bevezetés
Számos csoport beszámolt a VX2 alkalmazásáról az endometrium rák modellezésére retroperitoneális metasztázisokkal, magas sikert aratott 36, 51, 52; A jelenlegi szakirodalomban azonban jelentős eltérések vannak a modellépítés módszerében. Sejtszuszpenzió dózisok olyan alacsonyak, mint 4x105 sejt/méhkürt 51 és akár 5x109 sejt/méhszarv 37, 53 is, beszámoltak arról, hogy nincs standard konszenzus a szükséges VX2-sejtdózissal kapcsolatban. Számos oltási módszerről is beszámoltak, ideértve a daganatok mikrosebészeti beültetését a méh myometriumába 36, a VX2 sejtszuszpenzió injekcióját 37, 44, 52, 53 és egyes esetekben a méh kürt varratok hozzáadását az 52 oltás előtt. Végül egyetlen csoport sem számolt be tenyésztett VX2 sejtek felhasználásáról ennek a modellnek a létrehozásához. Tehát ennek a tanulmánynak a célja a VX2 modellezés sikeres standardizált módszerének bemutatása és a tenyésztett VX2 sejtek első használatának beszámolása nyúlban az endometrium rák modellezésére retroperitoneális metasztázisokkal.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Jegyzőkönyv
Mély hasfali elzáródás: Határozzuk meg a hashártya bemetszésének hegyét, és fogjuk meg a hashártyát, a rectus izmot és a fasciát szöveti csipesszel. Valamennyi állatkísérletet az Egyetemi Egészségügyi Hálózat jóváhagyott Állaterőforrás-központ (ARC) létesítményeiben, a jóváhagyott állathasználati és gondozási protokollokkal (AUP # 3994/# 4299) összhangban végeztek. A VX2 sejtvonalat Dr. Az Aken laboratóriuma az Egyetemi Egészségügyi Hálózaton nyert.
1. In vitro VX2 sejtvonal felépítése
2. VX2 sejttenyészet és sejtszuszpenzió képződés
3. Sebészeti modell beállítása
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Reprezentatív eredmények
Egy új képalkotó szer, a Porphyso segítségével intraoperatív módon 81 nyirokcsomót azonosítottak és műtéti úton eltávolítottak szövettani elemzés céljából. 74 nyirokcsomó bal medence nyirokcsomó, 5 jobb medence nyirokcsomó és 2 jobb para-aorta nyirokcsomó volt. Az in vivo szaporított VX2 daganatokkal rendelkező nyulakból eltávolított nyirokcsomók szignifikánsan nagyobbak és nekrotikusabbak voltak, mint a tenyésztett VX2 daganatokkal rendelkező nyulakból, amelyek átlagos térfogata 0,99 cm 3 (0,12-3,89 tartomány) ) 0,59 cm 3 -hez (0,01 - 2,92) (p = 0,037) képest. Az in vivo szaporított daganatokkal rendelkező nyulaknak nagyobb volt a nekrotikus méhtumoruk, mint a tenyésztett sejtdaganatokkal rendelkező nyulak átlagos átlagos hossza 5,6 cm (4-6,8 cm) és átlagos szélessége 5,2 cm (3,3-9 cm) szemben 3,6 cm (2-5 cm) vagy 4,56 cm (3-7 cm). Végül az in vivo szaporított VX2 sejtek nyúlmodelljeinél több extra-nodalis hasi áttét volt, mint tenyésztett sejtekből származó nyúlmodelleken, az in vivo szaporított nyulak összes metasztázisának 91% -a.
| Modell típusa | In vivo VX2 tumor modell | Tenyésztett VX2 tumor modell |
| A sikeres modellek száma | 16. | 5. |
| A kipróbált modellek száma | 22 * | 8. |
| Modell sikerességi arány | 73% | 63% |
| Idő az oltástól a kísérletig | 29 nap (24-31) | 45 nap (36-51) |
| Sikeres injekciós adag | 1 x 10 7 | 40 x 10 6 |
| (5x10 6 méhszarvanként) | (20 x 106 méhszarvanként) | |
| Összességében a siker aránya | 75% | |
| Az összes siker aránya a méhvarrat előtt | 57% | |
| Teljes sikerarány a méhvarrás után | 81% | |
1. táblázat: Modelladatok, beleértve a kísérleti körülményeket, a felhasznált állatok számát és a sikerességi arányt. Két eredetileg tenyésztett sejtdaganatnál használt nyulat, amely nem növekedett, később in vivo tumormodellekhez használták
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Vita
Itt beszámoltunk egy standardizált műtéti módszerről a VX2 endometrium rák modelljének létrehozására, és beszámoltunk a tenyésztett VX2 sejtek első használatáról ennek a modellnek a létrehozására. A 75% -os tumor felvételi arány alacsonyabb, mint a 35, 37, 53, 56 irodalomban korábban közölt 100% -os arány; azonban a kórosan megerősített nyirokcsomó-áttétek aránya 90% -kal összhangban van e modell 35, 53 korábbi tanulmányaival .
Összességében egyszerű, szabványosított módszerről számoltunk be az endometrium rák modellezésében nyulak retroperitoneális lymphadenopathiájával. Ezzel a protokollal foglalkoztunk a VX2 irodalom jelentős változékonyságával a sejtdózis, a műtéti technika és a posztoperatív modell monitorozása tekintetében. Felismertük, hogy a vizsgálat másik korlátja, hogy amikor emberi xenograft helyett VX2 sejtvonalat használunk, akkor nem teljesen utánozzuk az emberi rák tumorbiológiáját és mikrokörnyezetét. Reméljük azonban, hogy más csoportok tenyésztett VX2 sejteket használnak modelljeik felépítéséhez, mivel úgy gondoljuk, hogy ez a sejttípus megbízhatóbban modellezheti az emberi méhnyálkahártya rákot lassabb növekedése és a metasztatikus-metasztatikus betegségre való hajlam csökkenése miatt. Arra ösztönözzük más csoportokat, hogy használják a méh eredetű retroperitoneális nyirokcsomó-metasztázisok ezen gyors és egyszerű modelljét új képalkotó terápiák feltárására az áttétes endometrium rákban szenvedő betegek megsegítésére.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Közzétételek
A szerzőknek nincs mit elárulniuk.
Köszönetnyilvánítás
Ezt a tanulmányt a Terry Fox Kutatóintézet (PPG-1075), a Kanadai Egészségügyi Kutatóintézet (Alapítványi támogatás # 154326), a Kanadai Rákellenes Társaság Kutatóintézete (704718), a Kanadai Természettudományi és Mérnöki Kutatási Tanács, az Innovációs Alapítvány finanszírozta. Princess Margaret Cancer Foundation.
Szeretném dr Köszönjük a Marguerite Akens-nek, hogy az első VX2 sejteket biztosította az eredeti VX2 modell és a fagyott VX2 tumor blokkok létrehozásához. Szeretnék köszönetet mondani Marco DiGrappának az első VX2 sejttenyésztési kísérletek támogatásáért és Lili Dingnek a VX2 sejttenyészet támogatásáért.