Protein Tag - Biológia

Mikor Fehérje nap, Affinitás címke vagy epitóp címke. Nap a „jelöléshez”, „címkéhez” vagy „jelöléshez”) a biokémiában különböző, többnyire rövid aminosav-szekvenciák leírására használják, amelyek felhasználhatók a fehérjék jelölésére. A megjelölt fehérjék a fúziós fehérjékhez tartoznak.

biológia

Alkalmazások

A különbözõ jelölések eltérõen megfelelnek a különbözõ célokra. A fehérje tervezés során rekombináns fehérjék előállításához, illetve tisztításukhoz és detektálásukhoz affinitáskromatográfiával, lehúzható vizsgálatokkal, Western-blot-analízissel, immunhisztokémiával, fluoreszcens mikroszkóppal vagy élő képalkotással alkalmazzák őket.

Fehérje-tag létrehozásához a fehérje-tag kódoló DNS-szekvenciáját a fúziós fehérje kódoló DNS-szekvenciájába inszertáljuk a start kodon mögött vagy a stop kodon előtt az olvasási keret fenntartása mellett. Ez a transzláció során N-terminális vagy C-terminális fehérje taget hoz létre a fehérjén.

Alkalmanként a fehérje címkét el kell távolítani a fehérjéből a tisztítás után, pl. A B. proteáz hasítási hellyel vagy indukálható inteinnel érhető el. A proteolízis-alapú megközelítés olyan proteázokat használ, amelyek hosszabb felismerési szekvenciával rendelkeznek, amelyek csak a fehérje-tag határán vágnak, pl. B. a TEV-Proteáz. [1] Az inteineket tiolok vagy a pH-érték csökkentésével lehet kiváltani. [2] [3] [4]

Egyes címkék az antitest vagy immunkonjugátum megkötésén kívül más funkciókkal is rendelkeznek, például:

  • Immunoaffinitás-kromatográfiás tisztítás (mind a megfelelő antitestekkel)
  • Antitestalapú detektálás (mindenki számára, például Western-blot, immunhisztokémiai vagy immunfluoreszcens módszerrel)
  • Affinitáskromatográfia egy másik kötőpartner iránti affinitás alapján (pl. CaM tag, CBP tag, GST tag, MBP tag)
  • Streptavidinnel történő tisztítás biotinilezési helyei (pl. Avi-Tag, BCCP-Tag, Strep-Tag)
  • Komplex képződés kétértékű nikkelionokkal és nitrilotrecetsavval módosított és térhálósított agarózzal vagy dextránnal (pl. His-Tag)
  • Fluoreszcencia (pl. GFP vagy flash tag)
  • Könnyebb elválasztás a HPLC-ben a megnövekedett polaritás miatt (pl. His-Tag, FLAG-Tag, Xpress-Tag)
  • Ciszteinek, mint reaktív csoportok (pl. GST tag, snap tag, tioredoxin tag)
  • Az oldhatóság növekedése Befogadó testek, nagyobb címkékkel (pl. GST tag, MBP tag)
  • A fehérje hajtogatásának javítása Befogadó testek vagy a rosszul összekapcsolt diszulfidhidak miatt (pl. tioredoxin tag, poli (NANP) tag)
  • indukálható csapadékreakciók [5] [6]