SDS elektroforézis biológiai lexikon; Biológiai Fórum
bilufi
hüllő
Szia!
Jelentést kell írnom az SDS elektroforézisemről, és tartalmaznia kell egy rövid elméleti részt. Most írtam valamit, de nem vagyok biztos benne, hogy meg tudja-e csinálni így. Van valakinek tapasztalata és olvashat róla?
Az SDS elektroforézis a fehérjék különböző móltömegén alapuló elválasztási módszer.
Az SDS nátrium-dodecil-szulfátot jelent (nátrium-dodecil-szulfát), és egy anionos detergens molekula, nagy, nem poláros és egy kis poláros csoporttal.
Fehérje esetén a nempoláris számítás befelé, a sarki terület kifelé mutat. Az SDS úgy kötődik a fehérjéhez, hogy a mintában lévő fehérjék mindegyike negatívan töltődik fel egy átalakítás miatt. Az SDS-fehérje komplexek ezután az elektromos mező pozitív pólusába vándorolnak.
Az elektroforézis poliakrilamid gélben történik. Ez pórusokat tartalmaz, amelyek miatt a fehérjék elválnak. A nagyobb fehérjéknek először szét kell tolniuk a pórusokat, hogy diffundáljanak a gélen. Ez hosszabb ideig tart, így a részecskeméret-elválasztás bekövetkezik.
Az elválasztás után a fehérjéket Coomassie kékkel festhetjük közvetlenül a gélben.
Hálás lennék az építő kritikáért,
Moderátor
bilufi
hüllő
Igen ok. Tehát a "formálás" dolog nagyon hülye. A "kifelé" valójában a "negatív töltésű".
De akkor ezen változtatok.
A "díjarány" határozott időtartamú?
Ez jobb ily módon:
Fehérje esetén a nem poláros terület befelé, a sarki terület kifelé mutat. A fehérjék denaturálódnak és az SDS kötődik hozzájuk, így a mintában található fehérjék ugyanolyan mértékben negatív töltésűek.
Moderátor
bilufi
hüllő
Thorsten 1978
hüllő
Ha lenne magyarázatom a "formálás", a "denaturálás" és a "tömeg/töltés arány" témában, ez véleményem szerint teljesen érthető. Össze tudnám foglalni saját szavaimmal, de Friedrich Lottspeich "Bioanalytik" című könyvében nagyon jó magyarázatnak találom. Ezért ezen a ponton az egész idézetként:
"Az SDS egy anionos detergens, amely olyan hatékonyan fedi le a fehérjék belső töltését, hogy a tömegegységre vonatkoztatva állandó negatív töltéssel rendelkező micellák kb. 1,4 g SDS/g fehérje mennyiségben képződjenek. A minta előkészítése során a mintákat SDS felesleggel 95 ° C-ra melegítik. A hidrogénkötések szétválasztásával és a molekulák kinyújtásával feloldjuk a tercier és a szekunder struktúrákat. A ciszteinek közötti kénhidakat redukáló tiol vegyület, például ß-merkaptoetanol vagy ditiotreitol hozzáadásával szétválasztjuk. "