SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP szubsztrát készlet - PDF ingyenes letöltés
FELHASZNÁLÓI KÉZIKÖNYV SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP szubsztrátkészlet (Kat. Sz. 42586) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D-69115 Heidelberg Telefon + 49-6221-138400, Fax + 49-6221-1384010 e-mail: [email protected] http://www.serva.de
Tartalom 1. SERVALIGHT EOSULTRA 2 1.1. Általános információk 2 1.2. A készlet alkatrészei 2 1.3. Tárolási feltételek 2 2. AZ ÉSZLELÉS TELJESÍTÉSE 3 2.1. Fontos az elején 3 2.2. Szükséges, nem szállított anyagok és megoldások 4 2.3. Western blot detektálási séma 5 2.4. 5. jegyzőkönyv 3. PROBLÉMAMEGOLDÁSOK 7 4. INFORMÁCIÓK MEGRENDELÉSE 8 Ver 03/12 1
1. SERVALight EosUltra 1.1. Általános információk A SERVALight EosUltra rendkívül érzékeny kemilumineszcens szubsztrát a torma-peroxidáz (HRP) konjugátumok, pl. jelzett antitestek az immunblotokon. A szubsztrát jelintenzitása lehetővé teszi az antigén detektálását az alsó femtogram tartományban (10-15). Előnyök: Detektálás filmeken vagy kemilumineszcenciára alkalmas dokumentációs rendszerekkel, pl. ProXima C16Phi +, izogén Nagyon rövid expozíciós idő és/vagy nagyobb antitesthígítás az optimalizált, fényintenzív jelek miatt A SERVALight EosUltra nem alkalmas diagnosztikai vagy egyéb klinikai alkalmazásokra, hanem csak kutatásra és fejlesztésre. A SERVALight gyártója a Cyanagen Srl. A Cyanagen Srl a következő amerikai egyesült államokbeli és uniós szabadalmak tárgyát képezi: US 7803573, EP 1962095, US 7855287, valamint más országokra már benyújtott és érvényes szabadalmak. 1.2. A készlet kat. Sz. Alkatrészei SERVALight EosUltra Luminol Solution SERVALight EosUltra Peroxid Solution 42586.01 10 ml 10 ml 42586.02 50 ml 50 ml 42586.03 100 ml 100 ml 1.3. Tárolási feltételek Tárolja a készletet 2 8 C-on. Ha az ajánlott hőmérsékleten tárolja, legalább addig használható, amíg: lásd a címkét. 2
2.3. Western blot detektáló gélelektroforézis transzfer blokkoló inkubáció vázlata 1. Antitest inkubáció 2. Antitest SERVALight EosUltra inkubációs detektálás 2.4. 1. protokoll: Távolítsa el a blotot a blotkészülékből, majd blokkolja szobahőmérsékleten (20-60 perc) vagy 2-8 C hőmérsékleten egy éjszakán át. (2) Távolítsuk el a blokkoló reagenst, és adjuk hozzá az első antitest-munkaoldatot megfelelő hígításban. Inkubálás 1 órán át szobahőmérsékleten, vagy egy éjszakán át 2-8 C-on, rázással. (3) A membrán ezt követő mosási pufferrel történő mosása (5 perc). Ismételje meg a mosási lépést 4-6 alkalommal. Nagyobb puffertérfogatok vagy a mosási lépések száma segíthet a háttér csökkentésében. (4) Adja hozzá a HRP konjugátum megfelelő hígítását. A blot inkubálása szobahőmérsékleten 1 órán át, rázással. (5) Ismételje meg a (3) lépést. (6) A kimutatás előtt a kimutatási oldatoknak szobahőmérsékleten kell lenniük. (7) Készítsük elő a szubsztrát munkaoldatát úgy, hogy a peroxid oldatot egyenlő arányban összekeverjük luminol oldattal. A membrán cm 2 -ére 0,1 ml munkaoldatot kell használni. 5.
(8) A munkaoldat szobahőmérsékleten 24 órán át stabil. (9) A blotmembrán 5 perces inkubálása szubsztrátmunkálóoldattal. (10) Helyezze a védett blotot (például tekerje be légbuborékoktól mentes ételfóliába) a film kazettába fehérje felével felfelé, és helyezze be a filmet. Itt megfelelő sötét szobában kell dolgoznia. A filmnek az expozíció alatt száraznak kell maradnia. FONTOS: A felesleges szubsztrátumot el kell távolítani a blotból. A filmet óvatosan kell felvenni, mert a jel intenzitása miatt a film/folt enyhe elcsúszása is homályos vagy helytelen jelekhez vezethet. (11) Először is 60 másodperces expozíciós idő ajánlott. A jelerősségtől függően az optimális jelintenzitáshoz szükséges további expozíciós idő ennek megfelelően választható ki. (12) A kitett filmet ezután kifejlesztik. (13) A filmfejlesztés alternatívájaként a detektálás megfelelő dokumentációs rendszerek, pl. ProXima C16 Phi +, izogén. (14) Szükség esetén a blot kimutatás után lehúzható és antitestekkel újratölthető. 6.
4. Rendelési információk membránokhoz Kat. Immobilon (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, pórusméret: 0,2 µm (1 tekercs) 42574 Fluorkötő (PVDF), 10 x 10 cm, pórusméret: 0,2 µm (20 lap) 42573 Fluorkötő (PVDF) 25 cm x 3 m, pórusméret: 0,2 µm (1 tekercs) Eos CL HRP WB hordozó készlet 42585 SERVALight Helios CL HRP WB hordozó készlet 42587 8