Szerkezet makromolekulák szétválasztása sav amin elektroforézis oktatóanyagok Tanítás és

1. A következő aminosavak keverékét 3,9 pH-értékű papírelektroforézisnek vetik alá: A, S, F, L, R, D, H. Melyik aminosavak vándorolnak az anódba? Melyik aminosavak vándorolnak a katódba ?

2. Miért különülnek el az azonos töltésű aminosavak az elektroforézis során (példa: Gly vs. Leu) ?

3. Tekintsük az A, V, E, K, T aminosavak keverékét pH 6-on. Milyen a migrációs profil a papír elektroforézise után? Jelölje meg a lerakódás helyét, az anódot, a katódot és a szétválasztatlan aminosavakat. Melyik termék segít feltárni az aminosavakat ?

Az elektroforézis elve és felhasználása

Az elektroforézis célja a töltött molekulák szétválasztása gélen (polimer) keresztül elektromos mező hatására .

A molekulák a töltési pólus felé mozognak, szemben a nettó z töltésükkel, ezzel a töltéssel arányos v sebességgel: v = E. z/f

  • E az elektromos tér erőssége
  • f a súrlódási erő

Az elektroforetikus szétválasztást tehát a [töltés/tömeg] aránynak megfelelően végezzük .

Egy molekula elektroforetikus mobilitása kifejezhető (leegyszerűsítve) a következő összefüggéssel: mobilitás = k. (pH - pI)/mol tömeg

ahol pI a molekula izoelektromos pontja.

Tekintsünk egy pI = 5 fehérjét:

  • ha a kromatográfiához használt puffer pH-értéke alacsonyabb, mint a fehérje pl-értéke (kék zóna - az alábbi ábra), az utóbbi pozitív töltésű: kationcserélőt kell használni
  • ha a kromatográfiához használt puffer pH-ja nagyobb, mint a fehérje pl-értéke (vörös zóna), akkor ez utóbbi negatív töltésű: anioncserélőt kell használni.

amin

Az elektroforézis lehetővé teszi többek között:

1. kérdés. Aminosavak (A, S, F, L, R, D, H.) elektroforézisnek alávetett keveréke papíron, pH 3,9-nél:
Aminosav pI töltés pH-n 3,9 vándorlási irány
NÁL NÉL 6. + katód-
S 5.7 + katód-
F 5.5 + katód-
L 6. + katód-
R 10.8 +++ katód-
D 2.9 - anód
H 7.6 ++ katód-
Megjegyzés: a forrástól függően a pI vagy pKa értékek kissé eltérnek.