Táplálkozási Élettani Tanszék - PDF ingyenes letöltés
Táplálkozási élettani elnök Az izoflavonoidok genistein és daidzein hatása az emberi endothelsejtek in vitro és a mononukleáris vérsejtek proteomjára in vitro, feltételezett antiaterogén aktivitásuk összefüggésében A doktori fokozat megszerzése Jóváhagyott értekezés. Elnök: egyetem-prof. Dr. rer. nat. Michael Schemann Az értekezés vizsgálója: 1. Univ.-Prof. Dr. rer. nat. Hannelore Daniel 2. egyetemi-prof. Dr. rer. nat. Gerald Rimbach, Christian-Albrechts-Universität zu Kiel A disszertációt 2006. április 6-án nyújtották be a Müncheni Műszaki Egyetemnek, és a Weihenstephan Táplálkozási, Területhasználati és Környezetvédelmi Tudományos Központ elfogadta 2006. június 19-én.
Tartalomjegyzék iii 10.6 Felhasznált alapozók. 142 10.7 Vegyszerek és fogyóeszközök. 143 10.8 Eszközök. 146 10.9 Pufferek és megoldások. 147 10.10 Köszönetnyilvánítás. 152 10.11 Önéletrajz. 153
1 Bevezetés 5 Az oxiszterolok és citokinek által szabályozott folyamat döntően meghatározza a plakk stabilitását (Lusis AJ, 2000). 1.2. Ábra Az atherogenezis korai fázisainak sematikus ábrázolása. Az endoteliális réteg sérült: az LDL behatol az intimába, ahol oxidatív módon megváltozik. A monociták bejutnak az érfalba és elnyelik az oxidált LDL részecskéket, így habsejtek képződnek (Stipanuk MH, 2000). MM-LDL, kissé oxidált LDL; ox-ldl, oxidált LDL; M-CSF, makrofág kolónia stimuláló faktor; MCP-1, monocita kemotaktikus fehérje.
1 Bevezetés 7 1.4. Ábra Homocisztein-anyagcsere (módosítva: Biesalski HK & Grimm P., 2004) A hiperhomociszteinémia genetikai alapjai A hiperhomociszteinémia (HHcy), amelyet genetikai enzimhiba, vagy a homocisztein anyagcserében részt vevő egy vagy több vitamin elégtelen ellátása okoz. az ateroszklerózis fontos független kockázati tényezője (Clarke R et al., 1991; McCully KS, 1996; Selhub J, 1999; Ueland PM és mtsai, 2000). A HHcy három különböző súlyossági fokra osztható. Az enyhe forma, amely a népesség 5-7% -át érinti, a plazma szintje meghaladja a 10 μmol/l Hcy-t. A mérsékelt HHcy-s betegek plazmaszintje meghaladja a 30 µmol/l-t, a súlyos változatban pedig 100 µmol/l-t (Brattstrom L & Wilcken DEL, 2000). Enyhe HHcy esetén is megnő az ateroszklerózis kialakulásának kockázata (Lawrence de Koning AB és mtsai, 2003), a halálozáshoz való viszony a legnagyobb, ha a plazma szintje 15 µmol/l felett van (Nygard O és mtsai, 1997). A HHcy különböző genetikai hibáknak tudható be, amelyek befolyásolják a cisztationin-β-szintáz, a metilén-tetrahidrofolát-reduktáz (MTHFR) és a metionin-szintáz enzimeket (Medina MA & Amores-Sánchez MI, 2000). Ezeknek az enzimhibáknak a relevanciáját a következő szakaszok magyarázzák. A súlyos HHcy vagy homocystinuria leggyakoribb oka a cisztationin-β-szintáz autoszomális recesszív, homozigóta hiánya. A gén több mint 60 különböző mutációját írták le, cserével
1 Bevezetés 13 A foszfogliceridek csökkennek. Az LCAT által alkotott koleszterin-észterek a HDL belsejében telepednek le. Az extrahepatikus szövet membránjaiból származó koleszterin így kötődhet a HDL felületéhez, ami a HDL 3 frakció kialakulásához vezet. Az LCAT által katalizált reakciók és a VLDL lebontása során felszabaduló anyagok (foszfolipidek, apolipoprotein C és E) felvétele HDL 2-t és HDL 1-t eredményez, amelyek végül lebomlanak a májban (lásd 1.5. Ábra). (Löffler G & Petrides PE, 2003). 1.5. Ábra Az étkezés utáni lipid anyagcsere. Az étkezés utáni lipid metabolizmus exogén, endogén és reverz lipid transzferekre oszlik. (CETP, koleszterin-észter transzfer fehérje) (Deetjen et al., 2004).
1 Bevezetés 18 Agonisták A BAX és a BCL-X-ek a pro-apoptotikus tényezők, különösen a citokróm C felszabadulásán alapulnak a mitokondriumokból. Az apoptózishoz társuló 1-es faktorhoz és kaszpáz-9-hez való kötődése révén a citokróm C képezi az úgynevezett apoptosztómát, amely aktiválja a kaszpáz-3-at, és ezáltal mozgásba hozza az apoptózist. Az ox-ldl csökkenti a Bcl-2 család anti-apoptotikus tagjainak koncentrációját, amelyek gátolják a citokróm C felszabadulását a mitokondriumokból (Metzler B és mtsai, 2000; Napoli C és mtsai, 2000). Továbbá az ox-ldl növeli a citokinek, például az IL-1, a TNF és a PDGF expresszióját, amelyek viszont aktiválják az SAPK/JNK-t (Metzler B et al., 2000). A lizoszómák és a lizoszomális proteázok részvételével zajló folyamat révén az ox-ldl a kaszpázoktól viszonylag függetlenül is apoptózist okozhat (Salvayre R et al. 2002).
4 eredmény 38 4.2. Ábra A HUVEC fehérjéinek reprezentatív 2D PAGE-je, amelyeket 5 µg/ml ox-ldl-rel tenyésztettünk 2,5 µm vagy 25 µm genistein hiányában és jelenlétében. A spot számok megegyeznek a 10.2. Táblázatban szereplő számokkal. A genistein és a daidzein izoflavonoid keverékének, valamint az S40cl kivonatnak a HUVEC proteomjára gyakorolt hatásának vizsgálatát nem lehetett elvégezni, mivel nagyon nagy mennyiségű HUVEC-et kellett tenyészetben tartani ahhoz, hogy elegendő mennyiségű fehérjét nyerjünk a proteom elemzéséhez, ami technikai és pénzügyi okokból nem tudták megvalósítani.