A DNS-degradáció leküzdése a törvényszéki tudományban; News-Medical
Jogi nyilatkozat: Ez az oldal az oldal eredeti fordításának eredeti fordítása. Felhívjuk figyelmét, hogy mivel a fordításokat géppel generálják, nem minden fordítás lesz tökéletes. Ezt a weboldalt és weblapjait angol nyelven kívánják olvasni. A webhely és weboldalainak fordítása részben vagy egészben pontatlan és pontatlan lehet. Ezt a fordítást egy gyakorlat biztosítja.
A sérült vagy szándékosan megsemmisített törvényes mintákat elemzésre és bírósági felhasználásra meg kell javítani. Számos módszer létezik a károk helyrehozására.
Pinhead Studio | Shutterstock
Sejtpusztulás és DNS lebomlás
A sejthalál különféle intracelluláris enzimeket aktivál, például lipázokat, proteázokat és nukleázokat. A hidrolitikus enzimeket tartalmazó lizoszómák képesek lebontani a biomolekulákat, mint a hiszton fehérjék. A hiszton fehérjék szétszerelése viszont megkönnyíti az endonukleázok működését, amelyek képesek hasítani a DNS-t.
A mikroorganizmusok által a környezetbe felszabaduló nukleázok tovább bontják a DNS-fragmenseket, és a szabad citoszol-kalcium növekedése aktiválja a foszfolipázokat, amelyek lebontják a membránt, és több lebomló enzim felszabadulásához vezetnek. Tehát a széles körben elterjedt DNS-károsodás a ménes halálhoz vezet.
A lebomlott DNS-t amplifikáló PCR
A lebomlott DNS PCR-jével kapcsolatos kérdések három problémának tulajdoníthatók: kudarc az amplifikációban, a preferenciális amplifikáció és a rossz kódolású elváltozások. A rövid tandem ismétlődő szekvenciák (STR) azonosításához a DNS-ben legalább 1 NG DNS-re és 28-30 amplifikációs ciklusra van szükség.
Az amplifikációt Taq-polimeráz hozzáadásával és további PCR-ciklusokkal fokozhatjuk. Lebomlott minták esetén a rövidebb amplikonok gyakrabban erősíthetők fel, mert a hosszabb amplikonok lebomlanak. Ezt preferenciális amplifikációnak nevezzük. Ennek a kérdésnek a leküzdésére puha technológiák, például repülési tömegspektrometriás periódus vagy elektroforetikus mikrocsatorna szétválasztás alkalmazhatók.
Mitokondriális DNS (mtDNS)
A mitokondriális DNS (mtDNS) elemzését alternatív stratégiának tekintették a genomi DNS azonosítására. Ez a körkörös DNS jelen van a mitokondriumok citoplazmájában, és az mtDNS több mint egy példánya is jelen lehet a mitokondriumokban.
A legtöbb emlőssejtben 200-1700 kópia lehet mtDNS-ből, ami nagyon hasznos az emberekben lebomlott DNS-csoportok vizsgálatában - különösen a csontvázmaradványok, beleértve a csontokat, fogakat és körmöket is.
A PCR előtti és a PCR módszerek fejlesztése
Az alacsonyabb példányszámú minták esetében ismételt kivonást és amplifikációt hajtanak végre a hibák csökkentése érdekében. Más módszerek közé tartozik a PCR térfogatának csökkentése, a PCR ciklusszámának növelése, a beágyazott PCR, a teljes genom amplifikálása a PCR előtt, az ionok eltávolítása az amplifikációs művelet után vagy a PCR injekció periódusának növelése a kapilláris elektroforézis folyamata alatt. Egy másik stratégia szintén növeli a primer koncentrációját. Az eltűnt személyek vagy emberi maradványok azonosításához írja be az alacsonyabb példányszámot.