A heroin és a bomlástermékek kimutatása textíliákban - PDF ingyenes letöltés

A heroin és a heroin bomlástermékeinek igazolása a textíliákban Záró dolgozat toxikológiai posztgraduális tanulmány a lipcsei egyetemen, Manja Krammer, Berlin, 2008.07.13.

letöltés

1. Bevezetés 1.1 Kutatási kérdés 1.2 Esetleírás 1.3 A heroin előzményei 1.4 Farmakokinetika 1.5 Akut hatások 1.6 Krónikus hatások 1.7 Mérgezés 1.8 Terápia 1.9 A heroin lebomlása az emberi testben 2. Kísérleti 2.1 Előzetes tesztek 2.1.1 Mintaanyag 2.1.2 Vékonyréteg-kromatográfia szabványai 2.1.3 Extrakciós módszer vékonyréteg-kromatográfiához 2.2 Nagy teljesítményű folyadékkromatográfiai módszer (HPLC) 2.2.1 Gradiens program 2.2.2 A HPLC elemzéshez használt standardok és oldatok 2.2.3 A gradiens program ellenőrzése 2.3 Minták előkészítése a HPLC számára 3. Eredmények 4. 5. megbeszélés Függelék 6. Irodalom 7. Köszönetnyilvánítás 2

1. ábra: Heroin-monoacetil-morfin és morfin koncentrációja a teljes vérben 6 mg heroin-HCl egyszeri intramuszkuláris alkalmazását követően. 6 alany átlaga. [2] 2. ábra: A teljes vérben a heroin rendkívül gyors lebomlásának illusztrációja. Átlagosan 4,5 mg heroin-HCl egyszeri intravénás beadása után a heroin vérszintje a második és a tizedik perc között körülbelül 90% -kal csökken. 4 vizsgált személy átlagértékei. [2] 5.

Másrészt az eritrocita-acetilkolin-észteráz (AChE) az első rendű kinetika szerint a heroint gyorsan hidrolizálja 6-monoacetil-morfinná, a második hidrolízis lépésben a 6-MAM morfinná hidrolizál. A második lépés lassabb, mint az első. [5] Azon tény alapján, hogy a szervezet saját vérének kolinészterázai in vitro hidrolizálják a heroint két hidrolízis lépésben 6-MAM-on keresztül morfin képződéséhez, a kísérlet során az emberi vért herinnel keverték, amelyet előzőleg egy darab textíliára vittek fel. A cél annak tesztelése volt, hogy a testen kívüli friss emberi vér (testen kívüli) képes-e hidrolizálni a heroint. Aktívak-e a vér kolinészterázai a testen kívül, és ha igen, meddig? 3. ábra [6] 8

Míg a morfin/koffein hányados nagyon lassan, de folyamatosan növekszik körülbelül 10 perctől. 4. ábra 5. ábra Az előzetes tesztek kiértékelése után az inkubációs időt 90 percre állítottuk be, mivel a kémiai reakció 60 perc után még nyilván nem ért véget. 12.

2.3 A minták előkészítése a HPLC számára Az intézet négy munkatársa tesztté tette magát. Az alanyok három nő és egy férfi voltak. Az alanyok életkora 30 és 60 év között volt. Mindegyikből körülbelül 10 ml vénás vért vettek, amelyet azonnal felhasználtak a kísérlethez. Teszteltük az idő hatását a kémiai átalakulásra. Még jobb, mennyi ideig képesek a testen kívüli vér kolinészterázok átalakítani a heroint monoacetil-morfinná. 4 tesztsorozat készült, alanyonként 1 tesztsorozat. Ez a tesztsorozat 7 tételből állt, 1 vak értékből és 6 különböző időből állt. A kémiai reakciót 5 perc múlva, 10 perc múlva, 20 perc múlva, 40 perc múlva, 60 perc múlva és 90 perc múlva metanol hozzáadásával szakítják meg. A minták előkészítése 6. ábra 13

Vékonyréteg-kromatográfia előzetes kísérlet 7. ábra 3.2 A HPLC eredmények Az utcai heroin koffeint tartalmaz, ezért a koffeint választották belső standardnak, mert teljes vér hozzáadásakor nem változik. A vér kolinészterázai nincsenek hatással a koffein mennyiségére, ami azt jelenti, hogy minden mintában azonos mennyiségű koffeint kell tartalmazni. A heroin, a MAM és a morfin mennyiségét ng/ml vérben mértük. A jobb értékelés érdekében az eredményeket hányadosként tüntettük fel. Az arányértékeket azért választottuk, mert az utcai heroinról ismert, hogy különböző koncentrációban van jelen. A hányados megválasztásával lehetséges a koncentrációtól független ábrázolás és értelmezés. Heroin/koffein hányados (Q 1) MAM/koffein hányados (Q 2) Morfin/koffein hányados (Q 3) Az alanyokat 1-4 számmal láttuk el (pl. Q 1/1, Q 1/2, Q 1/3, Q1/4) 15

Az eredmények táblázatos bemutatása Idő Heroin/Koffein MAM/Koffein morfin/Koffein min Q 1/1 Q 1/2 Q 1/3 Q 1/4 Q 2/1 Q 2/2 Q 2/3 Q 2/4 Q 3/1 Q 3/2 Q 3/3 Q 3/4 5 3,1 2,86 2,98 3,0 0,14 0,19 0,15 0,17 0 0 0 0 10 3,0 2,89 2, 90 3,0 0,19 0,20 0,19 0,19 0 0 0 0 20 2,66 2,75 2,58 2,74 0,29 0,31 0,40 0,34 0 0 0, 04 0 40 1,40 1,79 2,27 2,23 0,91 0,82 0,58 0,61 0,15 0,14 0,05 0,11 60 1,30 1,34 2,07 1, 59 0,98 1,07 0,70 0,87 0,13 0,19 0,05 0,17 90 1,18 1,45 1,66 1,21 1,09 1,02 0,77 1, 08 0,18 0,14 0,17 0,25 1. tantárgy, 2. tantárgy, 3. és 4. tantárgy 16

Az eredmények grafikus ábrázolása 17

Miért ne befolyásolhatná a citokróm P450-2D6 esetleges polimorfizmusa a heroin MAM-ra és tovább morfinná bomlását? Ez megmagyarázhatja, hogy a 4. alany miért bontja le a heroint gyorsabban, mint a többi alany. 5. Függelék gradiens program a HPLC 20 számára

6. Irodalom [1] Hans Marquard és Sigfried Schäfer (2004) Toxikológiai tankönyv, 952f oldal Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbh Stuttgart [2] PXIten (1994) Vezetés kábítószer vagy gyógyszer hatása alatt: Törvényszéki tolmácsolás és értékelés/Forensic Medicine Institute IRM, Forensic Toxicology of the University of Zurich, Zürich kiadó IRM 1994, 188-191. Oldal [3] Wolfgang Dekant és Spiros Vamvakas, (2005) Toxikológia, Bevezetés vegyészek, biológusok és gyógyszerészek számára, 242. oldal, Spectrum Academic Publishing House [4] Franz-Xaver Reichl (2002) Taschenatlas der Toxikologie, 76. oldal, Thieme Verlag 600 [6] Jan G. Hengstler (2004) Drugs in Forensic Toxicology, PGS Toxikologie der Universität Leipzig, 9. érettségi rövidítések AChE BuChE Erythrocyte- Acetilkolin-észteráz-szérum butiril-kolin-észteráz-6-MAM 6-monoacetil-morfin GC-MS DC HPLC gázkromatográfia-tömegspektrometria Vékony rétegű kromatográfia Nagy teljesítményű folyadékkromatográfia 23

7. Köszönöm Köszönet illeti Dr. Rießelmann és csapata a berlini Állami Igazságügyi és Szociális Orvostudományi Intézetből. Nélkülük ez a munka nem lett volna lehetséges számomra. Megadta a lehetőséget, hogy gyakorlati háttérrel rendelkező munkát végezzek. Lehetőséget adtak arra, hogy közelebbről megismerhessem az analitikai eljárásokat és önállóan dolgozzam velük. Szeretném megköszönni az igazságügyi orvosoknak, hogy munkájuk során még mindig találtak időt a vérem lehívására, hogy elvégezhessem a kísérleteimet. Szeretnék köszönetet mondani Kastner asszonynak, Köhler asszonynak, Roscher asszonynak, Vejmelka asszonynak és Wangering asszonynak, akik tanácsokkal és cselekvéssel mindig mellettem voltak. 24.