A krónikus Pseudomonas aeruginosa sebfertőzési protokoll késleltetett oltási modellje (lefordítva

Összegzés

Késleltetett oltási protokollt írunk le krónikus sebfertőzések előidézésére immunkompetens egerekben.

Absztrakt

Bevezetés

A Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) egy Gram-negatív rúd alakú baktérium, amely egyre nagyobb jelentőséggel bír az emberi egészség és a betegségek szempontjából. Felelős a kórházi környezetben elterjedt morbiditásért és mortalitásért, különös tekintettel a sérült immunrendszerű betegek sebfertőzésére 1, 2. Ennek a kórokozónak a multirezisztens törzsek megjelenése további lendületet adott a P. aeruginosa virulenciájához hozzájáruló tényezők, a P. aeruginosa antibiotikum-rezisztenciájának mechanizmusainak, valamint a megelőzés új módszereinek és ennek a halálos betegségnek a kezelésében. fertőzés 3. Mint ilyen, a krónikus sebfertőzés állatmodelljeire, mint e kutatási kérdések tanulmányozásának eszközére, soha nem volt nagyobb szükség.

Sajnos a P. aeruginosa fertőzés számos állatmodellje hajlamos utánozni az akut fertőzést a fertőzés gyors megszűnésével vagy a 4, 5 szepszis következtében bekövetkező gyors hanyatlással, ami nem utánozza megfelelően ezeknek a fertőzéseknek a gyakran krónikus jellegét. Ennek a hátránynak a leküzdésére néhány modell idegen testek, például agar gyöngyök, szilikon implantátumok vagy alginát gélek 6, 7, 8 beültetését használja. Más modellekben olyan egereket alkalmaznak, amelyek immunkompromittáltak az időskori életkor, az elhízás vagy a cukorbetegség miatt, vagy olyan farmakológiai módszerekkel, mint például a ciklofofoszfamid által kiváltott neutropenia 9, 10, 11, 12. Az idegen anyagok vagy immunhiányos gazdaszervezetek használata azonban valószínűleg megváltoztatja a helyi gyulladásos folyamatot, ami megnehezíti a krónikus sebfertőzésekben bekövetkező patofiziológia megértését az egyébként normális immunrendszerrel rendelkező gazdaszervezetekben.

Kidolgoztuk a P. aeruginosa sebfertőzés krónikus modelljét egerekben, amely késleltetett baktériumokkal történő beoltást foglal magában az excíziós sérülés után. A késleltetett oltás lehetővé teszi a baktériumok terhelésének kiértékelésére irányuló kísérleteket, amelyek legalább 7 napig terjedhetnek. Ez a modell új lehetőségeket nyit a krónikus P. aeruginosa fertőzések patogenezisének és új kezelési módszereinek vizsgálatára.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

Az itt leírt módszereket a Stanfordi Egyetem Intézményi Állatgondozási és Felhasználási Bizottsága (IACUC) hagyta jóvá.

1. Baktériumok előkészítése és szaporítása

  1. Minden munkát végezzen a P. aeruginosa-val és az állatokkal a BSL-2 óvintézkedésekkel, a Nyomozó Intézményi Biológiai Biztonsági Bizottságának és az Állathasználati Bizottság irányelveinek megfelelően. Végezze el az itt leírt összes lépést a P. aeruginosa bevonásával, beleértve az egereket is, egy biológiai biztonsági szekrényben.
  2. A P. aeruginosa lumineszcens PAO1: lux törzse kérésre laboratóriumunkban kapható. Fagyasztott glicerin alapanyagként tárolt PAO1 csík Lysogeny Broth (LB) agaron. A lumineszcens PAO1: lux törzs esetében az LB agarnak szelektív antibiotikumokat kell tartalmaznia (100 g/ml karbenicillin és 12,5 g/ml kanamicin). Növekedés 37 ° C-on, egy éjszakán át, bakteriális inkubátorban.
  3. Válasszon egy izolált kolóniát, és egy éjszakán át 37 ° C-on, 3 ml lb közegben (pH 7,4) növesztette. Lumineszcens törzsek esetén a húslevesnek 100 og/ml karbenicillint kell tartalmaznia. Növekszik rázó aerob körülmények között.

2. Az eljárás előkészítése

  1. A műtétet végző személyzet viseljen tiszta laboratóriumi köpenyt/kabátot, arcmaszkot, hajhálót és kesztyűt.
  2. Autoklávozza az összes sebészeti eszközt, beleértve az ollót és a csipeszt is. Használjon aszeptikus technikát az állatok közötti sterilizáláshoz.
  3. Tisztítsa meg a műtéti asztalt etanollal, és készítsen tiszta műtéti kendőt.

3. Szőrtelenítés

4. Kivételes teljes vastagságú sebsebészet

5. Oltás P. aeruginosa-val

6. Fertőzött sebek in vivo képalkotása

7. Műtét utáni menedzsment

  1. Figyeljük az egereket a kutató IACUC protokolljának irányelvei szerint. Az összes egeret naponta figyeljük az első 4 napban, majd minden másnap a kísérlet végéig. Mérje meg az egereket a BSC-ben végzett műtét után az első 4 napban naponta egyszer. Injektáljon szubkután 250 l 0,9% -os nátrium-kloridot a fertőzés utáni 1. és 2. napon.
  2. Ellenőrizze, hogy nincsenek-e fájdalom/szorongás jelei az egerekben, beleértve a görnyedt testtartást, a kopott kabátot, a letargiát, a légzési nehézségeket, az arc fintorát és a fogyást.
  3. Ha az állatok egészségi állapotának romlása jeleit mutatja, forduljon állatorvoshoz. Minden olyan egeret, akiről úgy tűnik, hogy súlyosbodó fájdalom/szorongás jelei vannak, és legalább 20% -os súlycsökkenést mutat, meg kell eutanizálni.