A méhek és a méhek által készített méhkenyérben lévő tápanyagok összehasonlításának módszerei
Absztrakt
Bevezetés
A táplálkozás alapvető szerepet játszik a méhcsaládok egészségében és vitalitásában, valamint populációként való megalakulásában. Az élelmiszerekből származó tápanyagok energiát és a fiókok tenyésztéséhez, a hőszabályozáshoz, a takarmányozáshoz és az immunválaszhoz szükséges biokémiai összetevőket biztosítják. A méhcsaládok esetében a tápanyagok, amelyekre a telepek populációi az egészségük növekedéséhez és megőrzéséhez szükségesek, nektárból és pollenből származnak. A nektár szénhidrátokat, a pollen pedig a fennmaradó étrendi követelményeket biztosítja, például fehérjét, lipideket, vitaminokat és ásványi anyagokat.
A méhek alfajai táplálkozáson alapuló telepszint-paraméterekben különböznek, például a munkavállalók élettartama, a fiókanevelés és a társadalmi immunitás mechanizmusai 2-6. Ezek a különbségek összekapcsolhatók azzal, hogy a kolónia hogyan dolgozza fel az élelmiszereket, különösen a pollent, és hogyan emésztik meg az egyének. A virágpor a méhsejtekben található, és kémiailag megváltozik, mikrobiálisan közvetített tejsav fermentációval 07/10. Az erjesztett pollent méhkenyérnek hívják. Genotípusos különbségek lehetnek az alfajok között abban a képességben, hogy tápanyagokat szerezzenek az összegyűjtött és tárolt pollenből, és ez befolyásolhatja a telepek növekedését és túlélését. Az élelmiszer-feldolgozásra és a tápanyagok megszerzésére vonatkozó genotípusos hatások más organizmusokban dokumentálták, ami miatt egyes emberek több tápanyagot és kalóriát kapnak, mint mások, miközben ugyanazokat az ételeket fogyasztják.
Jegyzőkönyv
1. Méhkenyér AHB és EHB telepek beszerzése
2. Méhek etetése ketrecekben
- Helyezze az AHB és az EHB telepekből álló, keretezett, lezárt munkanevelő fiókákat külön ketrecekbe, 32-34 ° C-os és 40% relatív páratartalmú környezeti helyiségben. .
- Amikor a munkavállalók megjelennek, és körülbelül 24 órásak, állítsanak fel 12 plexi bioteszt ketrecet (mérete = 11,5 x 7,5 x 16,5 cm 3), és adj hozzá 100 újonnan létrehozott EMS-t vagy 100 újonnan létrehozott AHB munkaméhet minden ketrec. Helyezze a fésű egy részét ismert számú EBB vagy ABB sejttel (24-30 sejt ketrecenként) mindegyik ketrecbe a következő kezelési kombinációk létrehozásához: AHB táplált ABB, EHB táplált ABB, AHB táplált EBB és EHB táplált EBB . (4 kezelés; kezelésenként 6 ketrec; összesen 24 ketrec).
- Injekciós üvegekben, vízzel, 50% mézzel és vízoldattal az egyes ketrecek térfogatáig. Töltse fel naponta a mézes és vizes fiolákat a 11 napos vizsgálati időszak alatt.
3. Munkaméhek és kaptárkenyér mintavétele és a fogyasztás becslése
- Tegyen 10 mintát, mielőtt beteszi őket az EHB és AHB dolgozók ketrecébe. Tekintsük ezeket a 0. napi méheknek, és ezek szolgálnak alapul a hemolimfa fehérje koncentrációihoz.
- Távolítson el 10 méhet minden ketrecből, miután 4, 7 és 11 napig etették EBB-vel vagy ABB-vel.
- Helyezze az élő méheket egyedi mikrocentrifuga csövekbe, és tegye jégcsomagokra. Válasszon négy méhből álló almintát a hemolimfa fehérje koncentráció elemzéséhez.
- A méhek mintavétele után a 11. napon számolja meg a méhsejtek számát, amelyek még mindig méhkaptárt tartalmaznak. Ez a méhkenyér fogyasztásának relatív mértéke.
- Az egyes ketrecekben lévő sejtekből megmaradt méhkaptár és ketrecenként külön mikrocentrifuga csövekben tárolandó. Tartsa a méhkenyér-mintákat -80 ° C-on, amíg a pH-ban oldódó fehérjekoncentrációt és az aminosav-tartalmat elemzik.
4. A pollen és a méhkenyér pH-jának becslése
- Vegyünk hat véletlenszerű 0,3 g-os mintát az EFA-ban lévő méhekhez táplált virágporból, és oldjuk fel 300 μl desztillált vízben. Mérjük meg a pH-értéket vízálló kettős kereszt pH-lándzsával, 0,01 pontossággal.
- Vegyünk 0,3 g méhkas kenyeret, amely minden ketrecben maradt a 11 napos etetési időszak után. Oldjuk fel a kenyeret 300 μl desztillált vízben, és mérjük meg a pH-t a pollenben (4.1.) Leírtak szerint.
Reprezentatív eredmények
A méhkaptárt kevesebb mint egy hónapig -80 ° C-on tárolták, mielőtt elemezték volna a pH-értéket és a fehérje-koncentrációt, és körülbelül 4 hónapig az aminosav-elemzés előtt. A méhkas pH és fehérje koncentrációban különbözött a pollentől (1. ábra). A méhkenyér pH-értéke alacsonyabb volt, mint a pollen fehérje koncentrációja. Az EMS és az AHB is több ABB-t használ, mint EBB (2. ábra).
Az oldható fehérje szintje az AHB hemolimfájában szignifikánsan magasabb volt, mint az EHB, függetlenül az elfogyasztott méhkas típusától (3. ábra). Ezek a különbségek a hemolimfa fehérje szintjén annak ellenére következtek be, hogy az EHB és az AHB hasonló mennyiséget fogyasztott minden egyes méhkas típusból. A méhek kora a mintavételkor jelentősen befolyásolja az oldható fehérje koncentrációját a hemolimfában. A 7. vagy 11. nappal összehasonlítva a differenciálatlan fehérjekoncentrációk szignifikánsan alacsonyabbak voltak a 4. napi méhekben.
_content "> A méhek számára elengedhetetlen 10 aminosav közül a hisztidin kivételével az összeset kimutatták a pollenben. A legtöbb esetben a kenyérben mért aminosavkoncentrációk magasabbak voltak, mint a pollenben (4. ábra). Például a leucin és a treonin koncentrációja körülbelül 60% -kal volt magasabb, mint a virágporos kenyér és a valin koncentrációja körülbelül 25% -kal magasabb. Az alanin, az aszparaginsav, a glutamin és a metionin szintje szintén magasabb volt a kenyérben, mint a pollenben. Az aminosavkoncentrációk nem különböznek szignifikánsan az ABB és az EBB között, a fenilalanin és a cisztein kivételével. A fenilalaninszint körülbelül kétszer olyan magas volt, mint az ABB, akár az EBB, akár a pollen. A cisztein koncentrációja alacsonyabb volt az EBB-ben az ABB-hez vagy a virágporhoz képest. A triptofán volt az egyetlen aminosav, amely magasabb koncentrációban található meg a pollenben, mint az EBB-ben vagy az ABB-ben. A pollin és az ABB koncentrációja magasabb volt, mint az EBB-ben.
Vita
A fent leírt módszerrel azt tapasztaltuk, hogy az AHB méhkenyérgyártó céget nagyobb mennyiségben fogyasztotta mind az AHB, mind az EHB. Bár az EHB és az AHB hasonló mennyiségben fogyasztott mindenfajta méhkenyeret, az AHB-nek magasabb volt a hemolimfafehérje-titere. Módszereinken alapuló megállapítások hasonlóak voltak a korábbi jelentésekhez, ahol az AHB-ben magasabb volt a hemolimfa fehérje szintje, mint az EHB-ben, annak ellenére, hogy mindkettőt ugyanazzal a diétával táplálták 26. Az EBB és az ABB fogyasztásának mérésével, amelyeket mind az EHB-ben, mind az AHB-ben különböző arányban fogyasztottak, megállapították, hogy az egyes alfajok hemolimfehérje-koncentrációját nem növelik az élelmiszer-bevitel növelése. Úgy tűnik, hogy van egy fennsík a hemolimfa fehérje koncentrációjának a dolgozó nővér méhek korában, és hogy a fennsík alapértéke magasabb az AHB-ben, mint az EHB.
Számos fontos követelmény vonatkozik a méhkenyér-előállító telepekre a pollentárolás sebességének optimalizálása érdekében. Először is, a telepeknek nyitott fiókával kell keretezniük. Nyitott fiókák etetése nélkül a dolgozók nem fognak sok pollent gyűjteni. Másodszor, a telepnek királynélkülinek kell lennie, hogy további fiasítás ne keletkezzen. A fiasításhoz nagy mennyiségű pollen szükséges, és csak a felesleges pollent tárolja. Az EFA-ban létrehozott kis telepeken kevés tenyészpor lenne méhkas kenyérként, ha a tenyészterületeket kibővítenék, így a telepeknek fehér nélkülieknek kell lenniük és tárolhatók. Végül a méhkenyér elkészítéséhez a virágpornak corbicularis terhelésnek kell lennie, amelyet méhsejt sejtekben kell összegyűjteni és tárolni. Amikor a pollent pollencsapdákba gyűjtik, finom porra kell őrölni, mielőtt az a méhek rendelkezésére állna, hogy corbicularis terhelésként összegyűjthessék.
A méhkas fogyasztásának mérésére használt módszerek inkább kvalitatív, mint abszolút becsléseket eredményeztek. Az egyetlen fogyasztást akkor számolták, amikor a cellákat teljesen kiürítették a kaptárból. A méhkenyér teljes kenyérfogyasztásának pontosabb becslése úgy érhető el, hogy a méhek kenyerét eltávolítják a sejtekből, és olyan pitét készítenek, amelyet le lehet mérni a vizsgálati időszak előtt és után. Szerettük volna azonban a méhkaptárt a sejtekben tartani, hogy a méhek rá tudjon koncentrálni, amikor egy telepen etetik, és esetleg folytatják a feldolgozását a vizsgálati időszak alatt. A vizsgálat előtti és utáni fésűszakaszok súlyának különbségét nem használják a fogyasztás becsléséhez, mert a tömeg nő, mert a méhek a sejtekbe táplált hígított mézet néhány sejtbe helyezik.
A dolgozók a hígított méz egy részét is hozzáadhatták a méhkashoz. Ezen okok miatt a megközelítőleg azonos mennyiségű méhkaptartalmú sejteket megszámláltuk az etetés előtt és után, és kvalitatív mérést végeztünk. Mégis, szembeszökő különbség volt a kétféle kenyér között az ABB üres cellák számában, összehasonlítva az EBB-t 11 nap után.
A fehérjekoncentráció mérésére alkalmazott eljárások hasonlóak voltak a korábban leírtakkal az étkezési fehérje afrikai és európai méhekre gyakorolt hatásainak meghatározásához 26. Az eljárás kiterjesztéseként megbecsülhettük a virágporban és a kenyérben lévő oldható fehérjét. Ezek a módszerek hasonló eredményeket hoztak, mint a korábbi 7,10,27 jelentések. Eredményeink további bizonyítékokat szolgáltatnak arra vonatkozóan, hogy az AHB-k hatékonyabban asszimilálják az étkezési fehérjét, mint az EHB-k, és hogy ez kulcsfontosságú tényező lehet az AHB-k környezeti dominanciájában a legtöbb régióban, ahová bevándoroltak, és 30-32 között létesítettek.