A neurális prekurzor sejtek és az önfelépülő peptidek szinergikus alkalmazása a kísérleti nyaki szakaszban

Absztrakt

Bevezetés

A gerincvelő sérüléseinek több mint 50% -a a nyaki gerinchez kapcsolódik. A klinikai gyakorlatban két fő fiziopatológiai mechanizmust írnak le: a gerincvelő első zúzódását, majd a csonttörések, vérzések vagy a szövetek duzzanata által okozott maradandó összenyomódást.

Az aneurysma klip kontúziómimetikai/kompressziós modellje két patofiziológiai mechanizmus: a klip bepattintása zúzódást eredményez, és a vágás időtartama megfelel a kompresszió összetevőjének, feltételezve, hogy klinikai körülmények között a csonttörések, vérzések vagy szövetduzzanat okozta kompresszió az utolsó szakasz vége. Az alkalmazott aneurizma kapcsot egy gyűrű alakú rugó módosítja, amely biztosítja a pontos és megismételhető csípőerőt. Különösen a hemi-transzkciós vagy a kontúziós modellhez képest ez az aneurysma klip modell jobb klinikai paramétereket utánoz. Bár a mellkasi sérülésekben szenvedő betegek paraplegiában szenvednek, a nyaki húgyúti fertőzésben szenvedő betegek többsége quadriplegikus és teljesen függő. A nyaki zsinór anatómiai felépítése azonban jelentős különbségeket mutat a mellkashoz vagy az ágyékhoz képest, ezért ez a protokoll különösen foglalkozik vele.

A medulláris üregek és a szöveti hegek kialakulása akadályozza a gyógyulást és a regenerációt. Ezeknek az akadályoknak az állványozással történő leküzdése ígéretes megközelítés. Az önfelépülő peptidek közvetlenül az elváltozás epicentrumába injektálhatók. Ott nano-szálas állványokká állnak össze az üreg átmenetére és a gátló gyulladás csökkentésével és a szövetek megijesztésével javítják a környezetet. Bár a merev anyagok a beültetés során jelentős károkat okoznak a gerincvelőben, a peptidek folyékonyan, biztonságosan és további súlyos károsodások nélkül injektálhatók.

A gátló környezet javítása az őssejt-transzplantációt megelőzően önfelépülő peptidekkel ezért támogatja a sejtek INTEGRÁCIÓJÁT, differenciálódását és végső soron a funkcionális helyreállítást a nyaki gerincvelő sérülése után.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

MEGJEGYZÉS: A következő kísérleti protokollt az Egyetemi Egészségügyi Hálózat (Toronto, Kanada) Állattenyésztési Bizottsága hagyta jóvá, és megfelel a Kanadai Állatgondozási Tanács által készített laboratóriumi állatok gondozására és felhasználására vonatkozó útmutatóban meghatározott elveknek. .

1. A nyaki aneurizma klipszének összenyomódása/tömörítése

2. PAS és PNJ injekció (14 nappal a sérülés után)

90% élő sejt a szuszpenzióban. Hígítsuk a sejteket tenyészközegben (50x103 élő sejt/µl), majd használjuk sejttranszplantációra.

  • Négy 2 µl (összesen 8 µl vo, 4x105 NPC-t tartalmazó) intraspinális injekciót végezzünk kétoldalúan, 2 mm rostralis és caudalisan a sérülés helyétől. A dura kinyitása után helyezze be a Hamilton üveg mikrokapillárisát 1,5 mm-rel a gerincvelő háti felülete alá, és fecskendezze be 2 µl sejtszuszpenziót. Válasszon körülbelül 0,5 l/perc (perc) injektálási sebességet.
  • Minden injekció végén és mielőtt eltávolítaná a kapilláris zsinórját, várjon legalább egy percet, amíg a szövet megnyúlik, hogy befogadja a sejt új térfogatát. (2. ábra)

    • 3. Subdural szivattyúk beültetése a növekedési faktor alkalmazásához

    4.szövetértékelés

    1. Az állatokat feláldozzuk a megfigyelési időszak végén (pl. 4 héttel az SCI után) mély érzéstelenítésben (5% izoflurán 2-3 percig), és a transzkardiumokat 50 ml hideg (4 ° C), majd 150 ml 4% hideg sóoldattal perfundáljuk. paraformaldehid 0,1 M foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS).
    2. Távolítsa el a gerincvelőt és 4% paraformaldehidbe helyezze 0,1 M foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) 24 órán át.
    3. Helyezze a gerincvelőt 25% -os szacharóz-oldatba krioprotektálásra 48 órán át.
    4. Biztosítson hosszanti kriozektálásokat, amelyek vastagsága előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

    Reprezentatív eredmények

    A fent leírt eljárás végrehajtása során kap egy SAP állványt, amely kitölti az üreget, és javított gátló környezetet biztosít, kevesebb a szöveti rém és az AFN túlélése. 4. ábra egy patkány gerincvelő hosszmetszetét mutatja, amelyet az elváltozás helyén kaptak hat héttel az SCI után és négy héttel az NQ6 SAP injekció és a PNJ transzplantáció után. Az NQ6 peptideket sikeresen befecskendezték a zsinórba, az epicentrumban összesítették, és a rostro-caudalisan diffundáltak a penumbrában. A képalkotó elektronmikroszkóp ezen felül mutatja be 5. ábra, 1% (w/v) NQ6 peptideket állítsunk nanoszálas állványra két órán belül PBS-oldatokkal hígítva.