A solanaceae által tárolt magokon kimutatott gombák és biológiai tevékenységeik
A solanaceae által tárolt magokon kimutatott gombák és biológiai aktivitásuk
6296 gombát izoláltunk 1296 éjjeli árnyékból származó növényi magból, köztük paradicsomot, padlizsánt, fánkot és pirospaprikát, hosszú vagy rövid távon tartósítva. 22 nemzetségbe sorolták, kivéve az azonosítatlan gombákat, és 2 típusra osztották őket: paradicsom-padlizsán és paprika csoportokra. A súlyozatlan csoport-pár módszerrel végzett klaszterelemzések eredményei és a számtani átlag is alátámasztotta ezeket a csoportokat. A legtöbb paradicsommagot Geotrichum candidum fertőzte meg csíráztak és nőttek, mint a nem fertőzött magok. Cladosporium sphaerospermum és az Arthrinium sp. A padlizsánmagból izolálva erősen elnyomta a csírázást és a Penicillium elnyomta a maggyökér megnyúlását a padlizsánokban. Alternaria alternate, Botrytis cinerea és a Myrethecium verrucaria a paprikából és a fánkból kimutatott magok mesterséges beoltás után patogének voltak a gyümölcsökre és a palántákra.
A magon keresztül terjedő betegségek nagyon könnyen át tudnak terjedni a nemzetközi határokon, és gyakran nehezen kezelhetők, mert nehezen azonosíthatók, tipikus tünetekkel járnak, ritkán fordulnak elő a magok felszínén, néhány zöldség kivételével. Mivel a magon keresztül terjedő betegségek gazdasági hatása megnőtt az elmúlt években, Japánban és az egész világon számos növényfajban megnőtt a jelentőségük. A kóros magvakról szóló vizsgálatok főként a gabonafélékre összpontosítottak, míg több felmérést végeztek zöldségekkel és díszvirágokkal. Japánban a vizsgálatok csak azokat a kórokozókat vizsgálták, amelyek súlyos kárt okoznak, vagy könnyen jelen vannak a természetes fertőzött magokkal együtt, mint például a Fusarium. amely 1970-ben a cucurbits hervadását és szögfestését okozza, az Alternaria spp. által okozott fekete foltok. az 1990-es évek elején a keresztesvirágokon és a görögdinnyén. Szisztematikus vizsgálatokat kell végezni a kórokozókról.
A japán Mezőgazdasági, Erdészeti és Halászati Minisztérium (MAFF) 1985-ben megkezdte a génbank projektjét, amelynek célja a magok genetikai erőforrásként történő gyűjtése volt. Kevés információ áll rendelkezésünkre azonban a gyűjtött vetőmag-gének bankjából származó magról, és csak az Alternaria dauci és Alternaria gyökér sárgarépamagokról a vetőmaggyűjteményekről (1993) számoltak be. A patogenezis és annak hatása a mag minőségére, beleértve a csírázási sebességet, továbbra sem ismert. Ezért egy sor magfelmérés társult 5904 zöldségmaggal, amelyeket 2000-ben a génbank maggyűjteményében tartottak fenn. Ez a jelentés ennek a vizsgálatsorozatnak a része.
Ohata japánul írta le a magokhoz kapcsolódó terminológiát. A magon keresztül történő meghatározása a használatra korlátozódott, de a magon keresztül általában növényi patogének, nem patogén endofiták tartoznak. Úgy gondoljuk, hogy az egészséges vetőmag minőségét a vetőmag belső szövetébe behatoló gomba teljes gombaflóra, valamint a vetőmag felszíne szempontjából kell megvitatni. Így ebben a vizsgálatban a magokkal kapcsolatos összes gomba szóba kerül.
Ebben a jelentésben a paradicsom, padlizsán, fánk és pirospaprika magjait vizsgálták. Az ebben a vizsgálatban felhasznált összes magot maggyűjteményként tartották a MAFF által Japánban javasolt génbankban. Egyiket sem kezelték kémiailag, és egyiküknek sem voltak egyértelmű tünetei a felszínén. Minden fajhoz 2-3 fajtát alkalmaztak, és mindegyik fajtához 2 különböző tételt gyűjtöttek be különböző években. Az egyes fajták tételei az 1980-as években (régi) és az 1990-es években (új) gyűjtött magokat képviselik. Az 1991-ben és 1999-ben összegyűjtött pirospaprika vetőmag-tételeknél hivatkozunk a régi és az új. Az ebben a vizsgálatban használt ültetési anyag jellemzőit, például a csírázást, az eltarthatóságot és az ültetési anyag eredetét az 1. táblázat tartalmazza.
Gombák kimutatása és izolálása magokon
A gombák kimutatásához 0,005% kloramfenikolt (PDA) tartalmazó burgonya-dextrózzal részben módosított agar lemezes módszert alkalmaztunk. Az egyes tételek magjainak felét folyó vízzel mossuk 2 órán át, majd sterilizált szűrőpapíron szárítjuk; a magok másik fele mosatlan maradt. A magcsomagok lezárásától a magok PDA táblákba történő behelyezéséig minden műveletet steril kamrában hajtottak végre. Minden tételhez 12 lemezt készítettek, amelyek mindegyike 6 mosott vagy mosatlan magot tartalmazott. Következésképpen minden tételnél 72 magot vizsgáltak meg, és mindegyik fajtához 4 vizsgálatot hajtottak végre. A lemezeket körülbelül 10 ° C-on inkubáltuk, hogy elnyomjuk a gyorsan növekvő gombák micélium növekedését. Egy hónapos inkubálás után a magok körül megjelenő gombaspórákat és telepeket egyetlen spórával izoláltuk a további azonosítás érdekében. Megszámoltuk az izolált törzsek számát, és kiszámítottuk a gombamagok százalékát. Amikor egy gombafaj egynél több kolóniáját találtuk egy magon, izolált törzsnek tekintettem.
A sedborne-t általában számos tényező befolyásolja, mint például a magképződési szokások és a környezet a magtermesztés során. E tényezők elemzéséhez euklideszi klaszteranalízissel vizsgáltuk a különböző táptalajokból származó magokból nyert gombaflóra közötti hasonlóságokat. Az egyetlen fajtából kimutatott 22 gomba nemzetségből izolált törzseket matematikai progresszióban rendeztük el; minden progresszió 22 elemből állt, feltételezve, hogy a 22 gomba nemzetséget minden fajtán kimutatták. Kiszámítottuk a fajták progressziói közötti euklideszi távolságot. Az eredményeket dendrogramként térképeztem fel, a távolság alapú számtani átlaggal nem rendelkező csoportok lemérésének módszerével.
Az izolált törzsek patogenitásának meghatározásához a paradicsom, padlizsán, fánk és pirospaprika (ismeretlen fajták) gyümölcseit tűszúrásokkal feltekertük, majd az egyes tányérokon termesztett fajok micéliumos korongjával oltottuk be. PDA. Rhizopus stoloniferrel történő oltáshoz paprikákat, a paprikákat PDA-tenyészetből származó spóraszuszpenzióba helyeztük. Az oltott gyümölcsöket kellően nedves műanyagban (a relatív páratartalom körülbelül 100% -a) tartottuk szobahőmérsékleten. Az izolált törzsek magvak csírázására és növényi növekedésére gyakorolt hatásait mesterséges oltás, felületi sterilizált magok PDA vagy V8 agar tenyészetekből származó spórákkal és/vagy micéliummal vizsgálták.
Az egyes fajták rövid ideig tárolt és a magas csírázás miatt egészségesnek látszó magjait (1. táblázat) 1% NaClO-val 5 percig és 70% etanollal 3 percig fertőtlenítettük. Miután desztillált vízzel mostuk, a magokat steril kamrában szárítottuk, 10 percig beoltott sejtek egyikébe áztattuk, újra szárítottuk és körülbelül 10 ° C hőmérsékleten tároltuk egy hónapig. Tárolás után a magokat víz-agar lemezeken inkubáltuk 20 ° C-on. A csírázást egy hét múlva teszteltük, és a maggyökér hosszát 2 hét mértük. A szeminális gyökér hosszának különbségeit statisztikailag értékeltük a Student P teszt eredményei alapján
A magokból izolált gombafajok gyakorisága
A magon keresztül terjedő gombaflóra hasonlóságai
A magokon található gombaflóra hasonlóságainak klaszteranalízise megmutatta, hogy osztályokba sorolhatók, korrelálva a növényfajokkal, tekintet nélkül a betakarítási évre és a lokalitásra.
A retek flóracsoportjától elválasztott éjjeli fajták magjain található gombaflóra egyedülálló osztályt alkotott, bár az osztályba tartozik az uborkaflóra cv. Yomakirssshu
Sőt, a bogyós gyümölcsök osztálya, kivéve a paradicsom önéletrajzát. Finom, két alosztályra osztották, nevezetesen padlizsánparadicsomra és borsos alosztályra.
Az izolátumok patogenitása
A paradicsommagokból azonosított A. alternata és Phoma spp. Összes izolátuma nem volt patogén a paradicsom gyümölcsein, de a Geotrichum candidum erős kórokozó volt a paradicsom gyümölcseinek sebei ellen. A Cladosporium spp., A. által képviselt izolátumok póttag, Fusarium verticillioides, Phoma sp.,és Rhizosphaera sp, padlizsánmagból kimutatottak nem patogének.
Alternaria alternta, M. verrucaria és a Fusarium spp Kimutatták, hogy a paprikából izoláltan patogén a bors gyümölcsére.
Az izolátumok hatása a mag csírázására és a növények növekedésére
A paradicsommagokból kimutatott gombás izolátumok összes vizsgálata gyakorlatilag nem befolyásolta a mag csírázását.
Az A. alternata, a Penicillium waksmanii izolátumai azonban és az Arthrinium sp. erősen gátolta a maggyökér megnyúlását, majd a csírázás után 3 nappal palántrothadást okozott
Arthrinium sp. És C.sphaerospermum padlizsánmagokban azonosítva erősen gátolta a mag csírázását.
Izoláljuk a Penicillium változókat erősen elnyomta a gyökér megnyúlását, míg a C. oxysporum, Rhizopus stolonifer izolátumok és Aspergillus paradoxus kissé elnyomták a gyökérnyúlást.
Váltakozó szárak váltakoznak a paprikamagokból kimutatottak a fánkokra és a paprikákra patogének, elnyomják a maggyökér megnyúlását, míg a és M.verrucaria erõsen elnyomták a paprikában a maggyökér megnyúlását, de a csírázásra gyakorolt hatása csekély volt.
Ezzel szemben az Ulocladium atrum alkalmanként megerősítette a paprika gyökér megnyúlását.