Agar-blokk mikrokozmoszok az ellenőrzött növényi szövetbontáshoz az aerob gombák protokolljával
Összegzés
Ez a videó megközelítést mutat be a lignocellulózos növények aerob gombák általi szövetbontásának ellenőrzött környezetének tanulmányozásához. A tápanyag- és nedvességforrások kontrollálásának képessége a mikrokozmosz agarblokk egyik fő előnye, de a megközelítés gyakran vegyes eredményeket ad. Megoldjuk a reprodukálható hozam, az eredmények alacsony változékonyságának kritikus buktatóit.
Absztrakt
Itt a barna rothadásfát lebontó Serpula lacrymans gombát használjuk a fa lebontására mikrokozmosztömb agarban, sekély kalcium-agar mélységű petri-csészék felhasználásával. Teszteljük az exogén tényezők szerepét a gipsz bomlásán idősorokban, hogy bemutassuk a hasznosságot és a várható változékonyságot. Az egyetlen RIP élű (hosszirányú vágás) blokkokat csomagoljuk, lemérjük, autoklávozzuk és aszeptikusan vezetjük a felső műanyag hálóba. A gomba beoltása a blokk mindkét oldalán van, az interfészekhez exogén gipszet adunk. A szüret aszeptikus a végső pusztító betakarításig. Ezeket a mikrokozmoszokat úgy tervezték, hogy elkerüljék az agar blokkokkal vagy a Petri-csésze falával való érintkezést. A páralecsapódás minimalizálódik a lemez kiöntésekor és az inkubálás során. Végül az oltóanyag/vakolat/fa távolságot a lehető legkisebbre korlátozzuk, de az érintkezés megengedése nélkül. Az agar-blokk tervezésének ezek a kevésbé technikai szempontjai a kudarcok leggyakoribb okai és a vizsgálatok közötti variabilitás legfőbb forrása is. A videó közzététele ezért hasznos ebben az esetben, és alacsony változékonyságot, kiváló minőségű eredményeket mutatunk be.
Jegyzőkönyv
Ez a protokoll a fás és nem fás szubsztrátokra egyaránt vonatkozik, a jelzések szerint, valamint a kemencében vagy a levegőben szárított anyagokra. A beállítás előtt azonban olvassa el a protokollt. Számos olyan szempont felvetődhet, amely vonatkozhat tanulmányára, és ezek (aláhúzva) megtervezést igényelnek. Megjegyezzük azt is, hogy két közzétett agar-blokkolási módszert alkalmaznak, amelyeket néha alkalmaznak, az egyiket a 838-as brit szabványból, a másikat pedig a Nemzetközi Favédelmi Kutatócsoport (IRG-WP) dokumentuma nyomán, amelyet a bátorság mutat be (1978). Módszerünk hasonlít a 838-ra, adaptációival elsősorban a mikrokozmosz tervezésében és az agar-kontrollban foglalkozunk, de megint mindkét megközelítést gyakran elkerüljük a fatömbök nedvességének szabályozásával kapcsolatos történelmi problémák miatt, ami az anoxiát és a változékonyságot okozza. Ezen vizsgálati módszerek jó áttekintése, amely magában foglalja az agar-blokk kialakításának megvitatását, beleértve a 838 szabványt, megtalálható Nicholas (1973).
1) Mikrokozmoszok előállítása
Az ezekhez a tesztekhez tartozó mikrokozmoszok 1 cm-rel magasabbak (mélyebbek), mint a tipikus Petri-csészék, ami megnöveli a faterek fölötti fejet. Mérsékelt és pontos mennyiségű agarral töltik meg őket, annak érdekében, hogy koncentrációjuk mellett az abszolút tápanyagmennyiséget is ellenőrizzék, és hogy a fadarabok jól (> 3 mm) legyenek a fedéltől. A gipszvizsgálat során alkalmazott agar egyfajta gyenge kalcium-agar; azonban reprezentatív eredményeket mutatunk be Blakeslee tápközeggel, az ATCC átlaggal, amelyet a Serpula lacrymans (Wulfen: Fries) Schroeter APEM 65 (ATCC 32750) törzs izolálásához javasolt vizsgálat fenntartásához ajánlunk.
Ez a kialakítás távol tartja a növényi szöveteket az agar érintkezésétől, és biztonságos a lapos burkolattól és a falaktól. A lignocellulóz szubsztrátok változó nedvesítése a fő variabilitás forrása az agar-blokk vizsgálatokban. A nedvességtartalom növelésének nedvesítése anoxiát okoz, és elnyomja vagy akár le is állítja az aerob biodegradációt. Problémát jelent mindazok számára, akik a fa lebomlásáért felelős barna és fehér rothadásgombák oxidatív mechanizmusait tanulmányozzák. A tányérfedelek kondenzációja problémát jelent, ha a vízcseppek szabaddá válnak és nedvesítik az aljzatot. Hasonlóképpen, a fa és más szövetek érintkezéskor gyorsan "felszívják" a vizet az agarból, ami 80% (száraz tömeg. Alap) víztartalomhoz vezet, és megállítja az aerob lebomlást. A szöveteket távol kell tartani ezektől a vízforrásoktól, hogy a fonalas gomba megtalálja, összekapcsolja és szabályozza a nedvességet a hordozóban.
(Megjegyzés: Bölcs dolog alternatív táptalajok használatakor, különösen minimális tápanyag-agar hozzáadott bázissókkal, először ellenőrizni, hogy a tesztgomba növekedni fog-e rajta, mivel a magas ionos erők gátolhatják a növekedést, vagy akár megölik az izolátum tesztet.) Használjon hordozható segédpipettát és 10 ml steril polisztirol pipettát az agar aszeptikus átviteléhez egy biológiai biztonsági szekrénybe, miután az injekciós üvegek kihűltek. A páralecsapódás minimalizálása érdekében fontos, hogy a hordozó itt lehűljön, hogy megérintse őket. A lemezeket is öntse magasan, amikor öntik, hogy a fedélen lévő szabad víz minimalizálható legyen. Míg a kondenzáció kellemetlenséget okoz a normál művelés során, itt nagy problémát jelent, ha a DRO-k pleteket alkotnak és nedvesítik a fát. A 80% -ot meghaladó (száraz tömeg) nedvességtartalom (MC) anoxiát okoz a szövetekben, korlátozza az aerob gombák általi lebomlást és növeli a variabilitást. Számítsa ki az MC-t a következőképpen:
MC * = [(friss tömeg x száraz tömeg)/száraz tömeg] x 100
2) 'Blokk' szubsztrátok előkészítése