Az önkorlátozott akut tüdősérülés modellje egyoldalú hörgőn belüli intillációs instillációs protokoll alapján

Összegzés

Az intra bronchiális sav szelektív cseppentése a bal tüdőbe egerekben egyesített és önkorlátozott akut tüdőkárosodást eredményez, amely modellezi a gyomorsav aspirációja által kiváltott emberi akut légzési distressz szindrómát (ARDS).

Absztrakt

A sósav (HCl) szelektív hörgőn belüli csepegtetése az egér fő táptalajának bal hörgőjébe akut szövetkárosodást okoz, hisztopatológiai eredményekkel, hasonlóan az emberi akut respirációs distressz szindrómához (ARDS). Az így létrejövő alveoláris ödéma, az alveoláris-kapilláris gát károsodása és a leukocita infiltráció elsősorban a bal tüdőt érinti, a jobb tüdőt sértetlen kontrollként tartja fenn, és lehetővé teszi az állatok életben maradását. Az akut, önkorlátozott tüdőkárosodásnak ez a modellje lehetővé teszi a szöveti felbontási mechanizmusok, például az apoptotikus neutrofilekből származó makrofág efferocitózis és az alveoláris-kapilláris gát integritásának helyreállítását. Ez a modell meghatározta a felbontási agonisták, köztük a speciális felbontási mediátorok (PMS) fontos szerepét, ez alapot szolgáltat az új terápiás megközelítések kidolgozásához az RPS-ben szenvedő betegek számára.

Bevezetés

A veleszületett immunválasz diszregulációja az exudatív szakaszban hozzájárul az ARDS akut kialakulásához és a kapcsolódó légzési elégtelenséghez 1. Erős gyulladásgátló mediátor szignalizáció szervezi a kezdeti immunválaszokat, ami az alveoláris-kapilláris gát megszakadásához, diffúz alveoláris ödémához és neutrofil infiltrációhoz vezet a tüdőszövet károsodásánál. és késleltetheti a sérült tüdőszövet időben történő katabázisát.5 Ennek érdekében az endogén iniciációs mechanizmusok és a pro-ARDS felbontás preceklinikai vizsgálata új terápiás stratégiákat tárhat fel. Egy ilyen vizsgálat megköveteli az akut tüdőkárosodás önkorlátozott kísérleti modelljeit, amelyek szorosan hasonlítanak az emberi ARDS jellemzőihez, lehetővé téve a szövetkárosodás iniciációs és felbontási fázisának hátterében álló mechanizmusok kikérdezését.

Az itt bemutatott egérmodell közvetlen akut pulmonalis elváltozásokat eredményez, amelyek bemutatják az exudatív ARDS kardinális patobiológiai folyamatait, nevezetesen az alveoláris-kapilláris gát megszakadását és a neutrofil infiltrációt. A módszer a HCl szelektív intra-bronchiális csepegtetésére támaszkodik a bal mainstem hörgőjének kanilázásával, lokalizálva a sérülést és a bal tüdő gyulladásos válaszát; a sérülés nélküli jobb tüdő belső kontrollként használható a szövetkárosodás és gyulladás bizonyos megállapításaihoz. Ezenkívül az egyoldalú tüdőkárosodás nem végzetes, és feloldási programot mutat. Ez külön ablakot kínál a tüdőgyulladás feloldására, amely kihasználható az endogén pro-reszolváló sejtközvetítők és mechanizmusok azonosítására és új terápiás utak megnyitására az ARDS számára, amely hangsúlyozza a fiziológia és a farmakológia megoldását.

Jegyzőkönyv

A Brigham és a Női Kórház Intézményi Állattenyésztési és Felhasználási Bizottsága az alábbiakban felsorolt ​​összes állattal kapcsolatos eljárást felülvizsgált és jóváhagyott (Protokoll # 2016N000356).

JEGYZET: Az összes túlélési eljárásnál steril technikát követtek. Minden műtéthez steril kendőt állítottak elő steril kendő törülközővel, míg a sebészek steril műtéti kesztyűt, kalapot, maszkot és tiszta laboratóriumi kabátot viseltek. Az összes műtéti eszközt autokláv segítségével sterilizáltuk, és a sterilitást gyöngysterilizátorral tartottuk fenn.

1. 0,1 N HCl előállítása

2. A HCl szelektív intra bronchiális instillációja

3. Műtét utáni ellátás

  1. Miután a bemetszés lezárult, helyezze az egeret az elemre bal oldal meleg melegítőpárnán, amíg az egér felépül az altatásból. Kezdje el ellenőrizni az egeret a fájdalom és az aktivitás szintje előtt, mielőtt visszaállítaná a normál házba.
    JEGYZET: A buprenorfint 0,1 mg/kg dózisban kell beadni szubkután 6-12 óránként az első 24 órában. Ha tartós áttöréses fájdalom jelentkezik, folytassa a fájdalomcsillapító kezelést addig, amíg a fájdalom alábbhagy.

4. Teljes tüdő bronchoalveoláris átfolyás (BAL) és leukocita immunfenotitipizálás

5. A léggát áteresztőképességének értékelése Evan kék színezékével (DME)

  1. Injektálja intravénásan Evan kék színezékét (40 mg/kg) 30 perccel az eutanázia előtt.
  2. Eutanizáljuk az egeret ketamin/xilazin túladagolásával (4.1. Lépés).
  3. Az alveoláris gát integritásának méréséhez kövesse a BAL-gyűjtemény 4.2–4.9. Lépéseit.
  4. Töltsön 100 µl BALF-et egy 96 mélyedéses mikrotányérra az alján, és 100 µl duplikált EBD-standardot. Használja üresen a PBS -/- jelet.
  5. Mérőlemez-leolvasóval mérjük meg a BALF abszorpcióját 620 és 740 nm-en. Használja az abszorpciót 740 nm-en a 7. mintában a hemszennyeződés korrigálására .
  6. Az érgát integritásának mérésére perfundálja a tüdőt, lassan injektálva 5 ml jéghideg PBS-t a szív jobb kamrájába. Távolítsa el a bal tüdőt.
  7. A bal tüdőt 72 órán át szárítsuk 58 oC-on a felesleges víz eltávolítása érdekében.
  8. A szárított tüdőszövetet Radu és Chernoff 2013 8 szerint kell kezelni, és meg kell mérni az abszorpciót 620 és 740 nm-en.