Chlamydia pneumoniae DNS; Központi Katonai Sürgősségi Egyetemi Kórház Dr.
Chlamydia pneumoniae DNS
Általános információ
A Chlamydia egy kicsi, intracellulárisan kötődő prokarióta parazita (0,2–1 µm), amely mind baktériumjellemzőkkel rendelkezik (az RNS-t és a DNS-t szintetizálja, a Gram-negatív baktériumokhoz hasonló fala és sejtmembránja van, érzékeny a ciklin típusú antibiotikumokra), és vírus (csak élő eukarióta sejtekben szaporodik, nem képes szintetizálni az ATP-t, amelyet a gazdasejtek biztosítanak).
Azonban különbözik az összes mikroorganizmustól az adott növekedési ciklus által, amelyet 2 különböző forma jellemez:
• az elemi sejt (EC), az extracelluláris léthez igazítva;
• retikulált korpusz (CR), az intracelluláris környezethez igazítva (intracitoplazmatikus).
Az elemi sejtek nagyon fertőzőek, és miután bejutnak a testbe, a sejtmembránhoz kapcsolódnak, endocitózissá válva. Intracellulárisan az endoszóma nem olvad össze a lizoszómákkal, mint általában bármely internalizált anyag esetében, és a Chlamydia az életciklusa alatt a fagocitózisos vezikulában marad. Röviddel a sejtbe jutás után az EC átalakul CR-vé, amely nagyobb, nem képes más sejteket megfertőzni, és a vakuolákon belül binárisan osztódik ("intracitoplazmatikus klamidiális zárványok"). Körülbelül 36 óra elteltével a CR átalakul CE-vé, így 48-72 óra elteltével a sejt teljes citoplazmája helyettesíthető több száz/ezer CE-t tartalmazó zárványokkal. Noha a sejt citoplazmáját szinte teljes egészében az EC foglalja el, a sejtek működését minimálisan befolyásolja. Az elemi sejtek felszabadulása előfordulhat zárványok exocitózisával vagy a gazdasejtek lízisével. Az EC-k képesek új sejteket megfertőzni, akár ugyanazon a szervezeten belül, akár egy új gazdában. Így a C. pneumoniae életciklusa feloszlik az elemi sejtek között, amelyek képesek megfertőzni az új gazdaszervezeteket, de nem képesek szaporodni, és a retikulált sejtek között, amelyek szaporodnak, de nem képesek új fertőzést okozni.
A legújabb osztályozások szerint a Chlamydia 4 családra oszlik, amelyek közül a legfontosabb az emberi patológiában a fam. Chlamydiaceae, amely két nemzetséget tartalmaz:
• Chlamydia nemzetség - a legfontosabb képviselő a C. trachomatis;
• Chlamydophila nemzetség - C. pneumoniae, C. psittaci, C. pecorum, C. abortus stb.
A tüdőgyulladás és a hörghurut a C. pneumoniae-hoz társuló leggyakoribb betegség. Klinikai vizsgálatok sorozatában a tüdőgyulladás eseteinek 10% -át, a hörghurut és az arcüreg-gyulladás eseteinek körülbelül 5% -át a mikroorganizmusnak tulajdonították.
A C. pneumoniae fertőzés tünetei nem különböztethetők meg a tüdőgyulladás egyéb okaitól, ezek közé tartozik az orrdugulás, a köhögés, a láz és a nehézlégzés. A tüdőgyulladás legtöbb esete viszonylag enyhe és nem igényel kórházi kezelést. Enyhe esetekben azonban a teljes gyógyulás lassú, a megfelelő antibiotikum-terápia ellenére, és a köhögés és a rossz közérzet a betegség kialakulása után még több hétig fennmaradhat.
Számos krónikus betegség társult a C. pneumoniae fertőzéssel is. Azoknál a betegeknél, akiknek kórtörténetében C. pneumoniae légúti fertőzések szerepelnek, nagyobb valószínűséggel alakul ki asztmás hörghurut, ami arra utal, hogy ezek a mikroorganizmusok fontos tényezők lehetnek az asztma kialakulásában vagy az asztma súlyosbodásában.
A mikroorganizmus izolálásának tenyésztési technikái fáradságosak és időigényesek; A molekuláris tesztelés gyors módszer a C. pneumoniae DNS-jének kimutatására a különféle légzőszervi váladékokban, megkönnyítve ezzel a megfelelő antibiotikum-terápia korai kialakítását. A légzőszervi fertőzésekben szenvedő gyermekeknél végzett nemrégiben végzett vizsgálatban a PCR-teszt érzékenysége és specifitása az akut fertőzés diagnosztizálására 63,6%, illetve 100% volt.
Ajánlások a Chlamydia - DNS - meghatározására a tüdőfertőzések kimutatására.
Betegképzés - nem szükséges.
Begyűjtött minta - a) garat- vagy nasopharyngealis váladék; b) hörgõmosással vagy hörgõ-alveoláris öblítéssel, légcsõ- vagy hörgõszívással nyert köpet, köpet.
Betakarítási konténer - a) száraz puffer (szállítóközeg nélkül); b) steril tartály.
Betakarított mennyiség - b) legalább 2 ml.
Betakarítás után szükséges feldolgozás - nem szükséges.
A bizonyíték elutasításának okai - elégtelen mennyiség az elemzéshez; a minta szennyeződése; példányok túl öregek.
Tesztstabilitás - a minták 48 órán át 2-4 ° C-on stabilak a nukleinsavak extrahálása előtt.
Módszer és az eredmények értelmezése
Módszer - Valós idejű PCR Light-Cycler: láncpolimerizációs reakció a felhalmozódott PCR termék valós idejű kimutatásával, a kibocsátott fluoreszcencia mérésével (kvalitatív teszt).
Referenciaértékek - Chlamydia - kimutathatatlan DNS.
Kimutatási határ - 200 gyermek/ml.
Az eredmények értelmezése
Chlamydia kimutatása - a légzőszervi váladékban lévő DNS a Chlamydia pneumoniae fertőzés klinikai diagnózisára utal.
Határértékek és interferenciák
Noha a PCR egy gyors és megbízható diagnózist biztosító módszer, a nagyon kevés mikroorganizmust tartalmazó mintákban hamis negatív eredmények fordulhatnak elő.