D-specifikus IgE szérum kimutatása; allergének - Swiss Medical Review
összefoglaló
A klinikai kontextus számos felhasználást határoz meg a specifikus IgE kimutatási módszerekhez. Az alapellátás orvostudománya kapcsán a páciens közelében elvégezhető gyors elemzések a bőrtesztek alternatívájaként szerepelnek. Az orvosi rendelő szokásos gyakorlatához az atópiás szűrés kvantitatív módszerei (Phadiatop vagy azzal egyenértékű) előnyben részesítettek. Negatív prediktív értékük hasznos az atópia kizárásában. Ezenkívül könnyű megkülönböztetni a szezonális és az évelő allergiát.
Szakemberek számára a specifikus IgE mennyiségi eredményei összefüggésben lehetnek az allergénre adott klinikai reakció valószínűségével. Klinikai döntési pontokat hoztak létre az atópiás ekcémával összefüggő számos gyakori ételallergén esetében.
Bevezetés
Az IgE által közvetített allergia megerősítésének diagnosztikai algoritmusa a betegség célszervi érintettségének előzményeivel és megfigyelésével kezdődik. Az allergiás tünetek és a külső tényezők (pl. Pollen, macska szőr) kitettséggel való összefüggés megerősíti az ok-okozati feltételezést. A feltételezett allergének iránti érzékenységet in vivo bőrvizsgálat vagy allergénspecifikus IgE szérumvizsgálat igazolja. A különböző allergén-specifikus IgE kimutatási technikák azonban nem azonos tulajdonságokkal bírnak.
A „Prick” bőrteszt az elismert szabvány a közös allergénhez kapcsolódó azonnali túlérzékenységi reakciók kimutatására. Gyorsan elérhető eredményeinek köszönhetően a bőrteszt az allergológus választott eszköze. Az ok-okozati összefüggés a tünetek és a feltételezett allergén között formálisabban igazolható provokációs tesztekkel, ha szükséges.
A specifikus IgE szérum kimutatásának elismert indikációit az 1. táblázat foglalja össze. 1 Ezeknek az in vitro módszereknek számos előnye van: pontos mennyiségi meghatározás, abszolút biztonság, a gyógyszerinterferencia hiánya és a minták későbbi elemzésekhez történő tárolásának lehetősége. Számos technológia alkalmazható ezen specifikus antitestek keresésére, de tulajdonságaik eltérnek.
Módszerek specifikus IgE allergének kimutatására
A radioimmun-assay (RIA) technika már 1967-ben lehetővé tette a "reagin" mint specifikus IgE azonosítását az allergének számára. 2 IgE mielómából tisztított humán monoklonális IgE-t alkalmaztunk e nehézláncra specifikus poliklonális antitestek előállítására. A klinikai alkalmazás kezdeti módszerében (PhadebasRAST) az allergéneket aktivált cellulózlemezekre rögzítették, és lehetővé tették az eredmények félkvantitatív kifejezését a nyírfa pollen specifikus IgE-jével létrehozott kalibrációs görbe alapján. Az allergénhez kötött szérum IgE relatív mennyiségét interpoláltuk az anti-IgE kötődés intenzitása alapján. Hatosztályos félkvantitatív pontozási rendszert hoztak létre, amelyet ma is használnak. Használatát azonban el kell hagyni a kIU/l-ben kifejezett mennyiségi értékek helyett. 3
A különböző módszertani szempontok fokozatos fejlesztése a jelenlegi referencia-módszereket eredményezte, amelyek kvantitatívak, ugyanazon nemzetközi szabvány szerint kalibráltak 4 és leggyakrabban automatizáltak.
A fő technikai fejlemények a következők.
Allergének és kötődnek a támaszhoz
Az allergének szilárd fázisban (allergoszorbens) vagy folyékony fázisban való felhasználása különböző kötődési tulajdonságokat kölcsönöz az IgE-nek, különösen a specifitás és az affinitás szempontjából. Az allergéneken felüli munka lehetősége minimalizálja ezeket a hatásokat, ezért az allergének hordozóra való kötődési képessége meghatározóvá vált e technikák jó érzékenységének biztosításában. Az egyik fő előrelépés egy hidrofób mátrixba kapszulázott polimer kifejlesztése, amely lehetővé teszi nagy mennyiségű allergén kovalens kötését. Ez a Pharmacia CAP rendszernek nevezett polimer javította a specifikus IgE kimutatásának érzékenységét és specifitását. Az azonos körülmények között végzett számos klinikai vizsgálat ma referenciamódszerré teszi.
Különböző műszaki tulajdonságokból kiindulva más módszerek is párhuzamosan fejlődtek. A Diagnostic Products Corporation (DPC) úgy döntött, hogy oldható fázisban dolgozik, biotinnal jelölt allergénekkel. A páciens szérumának allergén/IgE antitest reakciója folyékony fázisban megy végbe, majd streptavidinnal bevont gyöngyökből álló hordozóra rögzítik. Az ezzel a technikával (Immulite) kapott eredmények konzisztenciája az UNICAP-hoz képest elfogadható. Például> 80% az élelmiszerek elleni specifikus IgE kimutatására. 2
Az allergének szabványosítása és a klinikai adatokkal való összehasonlítás azonban csak részben valósul meg. Az allergén kivonatok komplex jellege valóban nagy kihívást jelent a specifikus IgE allergének kimutatási módszereinek optimalizálása szempontjából. A fő allergének azonosítása az allergiás betegcsoportok között néha éveket vesz igénybe. Ezen túlmenően ezek az allergének különösen az egyes országokban eltérőek lehetnek. Az egyes rekombináns allergének tulajdonságait egyedileg kell összehasonlítani az allergiás betegek természetes allergénjeivel, mint a földimogyoró esetében. 6 Ez a fáradságos munka sok allergén esetében folyamatban van.
A latex specifikus IgE kimutatására szolgáló módszerek fejlesztése nemrégiben szemlélteti a rekombináns allergének hozzájárulását és jelentőségét a klinikai diagnózis szempontjából. Valójában a természetes latex fő allergénje, a Hevea brasiliensis 5 (Hev b5) savas fehérje, labilis, labilis és módosul az extrakció és a mátrix hordozón történő rögzítés során. A rekombináns Hev b5 fehérje hozzáadása a mátrixon rögzített (csúcsosodó) természetes kivonathoz 10% -os érzékenységnövekedést tett lehetővé, a specifitás csökkenése nélkül. 8 A specifikus IgE rekombináns pollenfehérjék elleni klinikai alkalmazása szintén nagy ígérettel bír az immunterápiás kezelésekre adott válasz jobb előrejelzésében.
A fejlesztés második vonala magában foglalja az egyénre szabott allergének rögzítését ugyanazon a hordozón, majd a jelet kvantifikálják és extrapolálják az egyes allergénekre vonatkozó kvantitatív eredményekké. Ezeket a technikákat használják a szalagok elemzésére. Nehézségeket okoznak az egyes allergének standardizálásában és reprodukálhatóságában.
Újabban a microarray chipek lehetővé tették olyan új módszerek kifejlesztését, amelyek aktivált szilícium-dioxid-mátrixhoz kapcsolt allergén fehérjék foltjait használták fel. Percnyi fehérje mennyiség (pl. 10 nL/folt) alkalmazása ebben a robot technikában elméletileg lehetővé teszi a specifikus IgE kimutatását az egyedi fehérjék sokaságával szemben, kevés szérum alkalmazásával. A különböző foltok jelének számszerűsítését spektrofluorometriával végezzük. Az ilyen módszerek jelenlegi teljesítménye olyan hátrányokkal jár, amelyek egyelőre nem indokolják a klinikai alkalmazást.