DuchenneBecker izomdisztrófia (MLPA deléciós törlések) - Synevo
Általános információ
A distrofinopátiák az izombetegségek spektrumát tartalmazzák, amelyeket a dystrophint kódoló DMD gén mutációi okoznak. A betegség klinikai formái változó súlyosságúak, és az X kromoszómával kapcsolatos átvitel mutatkozik; a legenyhébb fenotípusok közé tartozik a szérum kreatin-kináz aktivitás tünetmentes növekedése, myoglobinuria kíséretében izomgörcsök és izolált quadriceps myopathia; az ellenkező pólusban a progresszív izomzavarok két nagy kategóriába sorolhatók: Duchenne/Becker izomdisztrófia, amikor a vázizmok főleg érintettek, és a DMD mutációkkal társult dilatált kardiomiopátia, amikor a szívkárosodás áll az élen 1 .
1986-ban Kunkel azonosította a Duchenne izomdisztrófia gént az Xp21 sávban lokalizálódva, és így megerősítette a betegség X-hez kötődő átvitelének módját.
A Becker-féle izomdisztrófiának 24 eset/1 millió előfordulása van, és az X-kromoszómával kapcsolatos transzmissziója is van.A fenotípust a genetikai mutációk generálják, amelyek különböznek a Duchenne-betegségben érintettektől, de az érintett gén gyakori (DMD). A Becker-disztrófia klinikailag idősebb korban kezdődik és lassabban megy végbe. A kerekesszékben való mozgáskorlátozás 20 éves kor után következik be; Bár a vázizomkárosodás kevésbé súlyos, mint a Duchenne-kórban, a dilatált kardiomiopátia okozta szívelégtelenség a morbiditás és a halálozás egyik fő oka.
Az X-hez kötődő átvitel eredményeként mind a Duchenne-betegség, mind a Becker-betegség szinte kizárólag fiúknál fordul elő. Nagyon ritkán a DMD mutációval rendelkező nőknél alakul ki a Duchenne/Becker fenotípus az érintetlen X kromoszóma véletlen inaktiválása, a Turner-szindróma (X0) társulása vagy uniparentalis dysomy következtében. Így a legtöbb esetben a nők tünetmentesek, és kétharmaduknál nő a kreatin-kináz aktivitás 4 .
A DMD génmutációkkal társuló tágult kardiomiopátiát a bal kamrai dilatáció és a pangásos szívelégtelenség jellemzi. A férfiaknál a betegség klinikailag 20 és 40 év között kezdődik, és gyorsan halálos evolúcióval bír, míg a nőknél később kezdődik és lassabban halad. A vázizom károsodásának jelei és tünetei általában hiányoznak.
A DMD az egyetlen gén, amely dystrophinopathiákkal társul. A DMD mutációkat kimutató molekuláris biológiai tesztek a legtöbb esetben Duchenne vagy Becker dystrophiát diagnosztizálhatnak anélkül, hogy szükség lenne izombiopsziára. Elméletileg minden Duchenne-disztrófiában szenvedő férfi betegnek és a Becker-dystrophiában szenvedők legalább 85% -ának azonosítható DMD-mutációja van. A dilatált kardiomiopátiában és azonosítható DMD mutációkban szenvedő betegek száma nem ismert. A többi esetben a klinikai adatok megerősítése a család történetével, a szérum kreatin-kináz szinttel, az izombiopsziával és a dystrophin elemzéssel megerősítik a diagnózist 1 .
A DMD az emberi genomban azonosított legnagyobb gén; 79 exonból áll és magas mutációs ráta van; főleg a váz-, sima- és szívizmokban fejeződik ki. A kódolt fehérje - a dystrophin - részt vesz az extracelluláris mátrix és a sejt citoszkeleton közötti mechanikus kapcsolatban. Disztrofin hiányában a szarkolemma integritása befolyásolódik, és az izomrostok stabilitása zavart szenved. A mechanikai sérülésekre való hajlam növekedésével az izomrostok ismételt nekrózis- és regenerációs ciklusokon mennek keresztül, a regenerációs képesség végleges kimerülésével. A Duchenne-fenotípussal összefüggésben vannak a DMD-mutációk, amelyek vagy a dystrophin teljes hiányát, vagy egy csonka fehérje termelését okozzák. Másrészt a gén középső régióját érintő mutációk rövidebb fehérjét hoznak létre, amely azonban megtartja karboxi- és aminoterminális doménjeit, és ezáltal funkcionalitását; a Becker 2 fenotípushoz kapcsolódnak; 4 .
Az egy vagy több exont magában foglaló nagy deléciók a Duchenne-kór eseteinek körülbelül 59% -áért és a Becker-dystrophia eseteinek 65% -áért felelősek. A stop kodon idő előtti megjelenését kiváltó mutációk az esetek 15% -ában, az esetek 5% -ában pedig duplikációk találhatók; a többi esetben vannak az olvasási keret mutációi, inszerciók/deléciók, a splicing hely mutációi, valamint a missens mutációk.
Bár a Duchenne- vagy a Becker-dystrophia szinte minden esete X-hez kötődik, az esetek harmadában nincs családi kórtörténet, de de novo mutációkról van szó. A gonadal mozaikosság a Duchenne-féle izomdisztrófia új eseteinek körülbelül 20% -áért felelős .
Az érintett személy testvéreinek kialakulásának kockázata az anya hordozó státuszától függ. A dystrophinopathiák X-kapcsolt átvitelének köszönhetően azok a nők, akiknek minden terhességnél 50% -os a DMD-mutáció átadásának kockázata. A mutációt öröklő fiak mindig érintettek lesznek, míg a mutációt öröklő lányok hordozók lesznek, és kialakulhat vagy nem alakulhat ki kardiomiopátia.
A Duchenne-disztrófiában szenvedő férfiak általában a reproduktív kor előtt elpusztulnak, míg a Becker-fenotípusú férfiak szaporodhatnak, így minden lányuk örökli a betegséget okozó mutációt, és fiaikat ez nem érinti.
Az érintett anyai nagynénik, valamint gyermekeik nemétől, családi kapcsolattól és az anya hordozói státusától függően fokozottan veszélyeztetettek lehetnek, hogy megbetegedhetnek vagy fuvarozókká válhatnak.
Egy nőnek, akinek az érintett fia és egy másik anyai rokona van, heterozigóta kell lennie a DMD mutációhoz.
Egynél több érintett fiúval és negatív családtörténettel rendelkező nőnek vagy csíravonal mutációja van (a betegséget okozó DMD mutáció minden sejtjében jelen van), vagy pedig ivarmirigy mozaikossága van (a betegséget okozó DMD mutáció mozaikossága jelen van). csak a csíravonalban).
Ha a Duchenne/Becker betegségben szenvedő gyermek az egyetlen érintett családtag, akkor az anya hordozói státusával kapcsolatos számos lehetőséget meg kell fontolni:
a) az érintett fiúnak van egy de novo mutációja, amely a következőkből származik:
b) az anyának de novo mutációja van; a Duchenne/Becker-disztrófiában szenvedő fiúk anyáinak mintegy kétharmada hordozza a DMD-mutációkat; a de novo mutációk előfordulásának mechanizmusai az anyában a következők:
c) az anya egy mutációt örökölt:
A genetikai tesztelés összekapcsolási elemzéssel kombinálva gyakran meghatározhatja a de novo mutáció eredetét. Ez az elemzés fontos annak a családnak az azonosításához, amely fokozottan fenyegeti a dystrophinopathia kockázatát 1 .
Számos molekuláris biológiai technikát fejlesztettek ki a perifériás vérminták DMD génmutációinak kimutatására, többek között:
-
PCR multiplex a törlés detektálásához (detektálási sebesség
95%);
A DMD gén MLPA technikája kétféle típusú reakciót igényel az exonok nagy száma miatt. Az egyik reakció magában foglalja a PO34 nevű próbák keverékét, amely az 1-10., 21-30., 41-50. És 61-70. Exonokat fedi le. A második reakció a PO35 nevű próbák keverékét tartalmazza, amely a 11-20, 31-40, 51-60 és 71-79 exonok elemzését tartalmazza. Tanulmányok azt mutatják, hogy ez a technika, amely egyszerre "vizsgálja" a DMD gén mind a 79 exonját deléciók/duplikációk jelenléte szempontjából, hasznos diagnosztikai eszköz mind az érintett férfiak, mind a női hordozók esetében 2; 5 .
A genetikai vizsgálatokra vonatkozó ajánlások
- a Duchenne/Becker dystrophia diagnózisának megerősítése az érintett személyekben;
- nagy kockázatú rokonok tesztelése a női hordozók azonosítása érdekében; ideális, ha előre meghatározunk egy betegséget okozó mutációt a családban;
- prenatális diagnózis magas kockázatú terhes nőknél DMD mutáció miatt; amniocentézissel nyert magzati sejtekből kivont DNS elemzésével végezzük, amelyet általában a vemhesség körülbelül 15-18 hetesén vagy a korionbolyhok biopsziáján, körülbelül 10-12 vemhességi héten végeznek; A betegséget okozó mutációkat az 1., 3., 4. prenatális vizsgálat előtt azonosítani kell .
Begyűjtött minta - vér jön 3 .
Betakarítási konténer - antikoagulánsként EDTA-t tartalmazó vakutainer 3 .
Betakarított mennyiség - 5 ml vér 3 .
Az elutasítás okai megpróbálni - heparin antikoagulánsként történő alkalmazása; koagulált vagy hemolizált minták 3 .
Tesztstabilitás - 7 nap 2-8ºC-on 3 .
Módokon - az MLPA törléseinek/duplikációinak elemzése 3 .
Az eredmények jelentése és értelmezése
A DMD génben észlelt deléciókat/duplikációkat és azok Duchenne/Becker fenotípussal való kapcsolatát az irodalom adatai alapján közöljük 3 .
Szuggesztív klinikai képpel és megemelkedett CK-szinttel rendelkező férfiakban a betegséget okozó mutáció azonosítása megerősíti a diagnózist. A Duchenne/Becker fenotípusok korrelálnak a legjobban a dystrophin expresszió mértékével, amelyet a mutáns allélből kapott messenger RNS olvasási kerete határoz meg. Tehát a nagyon nagy deléciók a distrofin expresszió hiányához vezethetnek; egyes deléciók és duplikációk megváltoztathatják az olvasási keretet, és egy olyan erősen csonka fehérje termelését okozhatják, amely a Duchenne-fenotípussal függ össze. A Becker-fenotípus akkor alakul ki, amikor a dystrophin bizonyos termelése fennmarad, ami részben megőrzi működését; ezekben az esetekben törlésekről vagy duplikációkról van szó, amelyek az exonokat az olvasási keret szintjén állítják egymás mellé.
Azokban a családokban, ahol az érintett férfinak ismert a DMD törlése vagy duplikációja, ezt a változást a magas kockázatú rokonok is keresik. A változás hiánya kizárja a szolgáltató státuszát. A DMD mutáció azonosítása megerősíti a hordozó állapotát; Mivel a nőknek fokozott a kockázata a kardiomiopátia kialakulásának, a teljes szívvizsgálat ajánlott legalább 5 évente egyszer, 25-30 éves kor után 1 .
Határértékek és interferencia
Az MLPA teszt DMD mutációjának negatív eredménye nem zárja ki a szuggesztív klinikai képpel rendelkező emberek diagnózisát. Tekintettel arra, hogy a pontmutációk a Duchenne-Becker izomdisztrófia eseteinek 25-30% -ában vesznek részt, a DMD gén teljes szekvenálása ajánlott.
Azokban a családokban, ahol a DMD mutáció nem ismert, a magas kockázatú nők MLPA tesztjének negatív eredménye nem zárja ki a hordozó státuszt. A pozitív családi anamnézis jelenléte megköveteli a teljes 1, 3, 4 gén szekvenálását .