Hepatitis C vírusos RNS (kvantitatív) - Synevo

Általános információk és ajánlások

A Flaviviridae családba tartozó hepatitis C vírus (HCV) főleg parenterálisan terjed, a HCV fertőzés gyakorisága magas szervátültetett vagy vértranszfúziós betegeknél, intravénás kábítószerrel visszaélő és vese dialízisben szenvedőknél 1; 2 .

Az akut fertőzések általában enyheek vagy tünetmentesek, de az esetek 60-90% -ában krónikus hepatitis kialakulása fordul elő.

A HCV genom és az általa kódolt fehérjék jellemzése lehetővé tette mind a specifikus antitestek meghatározására szolgáló szerológiai módszerek kidolgozását, mind a molekuláris teszteket a diagnózis megerősítésére és a terápia nyomon követésére. Az anti-HCV antitestek jelenléte csak a HCV-expozíció indikátora, és nem tekinthető a jelenlegi fertőzés markerének 1 .

A májkárosodás biokémiai markerei közül az alanin-aminotranszferáz (ALT) szintjét tekintették fontos elemnek a májbiopszia elvégzéséről és/vagy az antivirális terápia megindításáról szóló döntés során. Az ALT növekedés mértéke azonban nem állhat közvetlenül összefüggésben a HCV fertőzés szintjével, mert: krónikus hepatitis C-ben szenvedő betegeknél az ALT szérumszintje spontán ingadozhat, hosszú biokémiai remisszió lehetséges lehet; Az ALT szintjét más tényezők befolyásolhatják, mint például az alkoholfogyasztás, a kapcsolódó gyógyszeres kezelés, más vírusfertőzések jelenléte, alkoholmentes máj steatosis; van egy olyan betegkategória (a krónikus HCV-fertőzés eseteinek 20-40% -ára becsülhető), akiknél az ALT szintje tartósan normális vagy diszkréten magas, a folyamatos vírusreplikáció körülményei között 3 .

Másrészt a nukleinsav-amplifikációval történő detektálás láncpolimerizációs reakcióval (PCR) biztosítja a vírusreplikáció mértékét, amely hasznos lehet mind az aktív fertőzés diagnosztizálásához, mind a kezelés nyomon követéséhez. Az új tesztek, amelyek a "valós idejű PCR" technológiával számszerűsítik a vírusterhelést, magasabb analitikai érzékenységgel és sokkal szélesebb (mérhető) linearitási tartománygal rendelkeznek a hagyományos PCR-technológiához képest 1; .

Ami a diagnózist illeti, a PCR módszerrel lehetséges a HCV virémia kimutatása a szero-immunológiai konverzió előtt 2 .

A virémia meghatározása szintén hasznos a betegség előrehaladásának megállapításában és az antivirális terápia hatékonyságának értékelésében, mind a klasszikus kezelési séma esetében, amely magában foglalja egy pegilezett interferonkészítmény (PegINFα) és ribavirin kombinációját, mind az újabb protokollokban, amelyek közvetlen antivirális hatású gyógyszereket tartalmaznak 1 .

Begyűjtött minta - vénás vér 2 .

Betakarítási konténer - EDTA-t antikoagulánsként tartalmazó vakutainer 2 .

Betakarított mennyiség - amíg a vákuum megengedi 2 .

Az elutasítás okai megpróbálni - heparin antikoagulánsként történő alkalmazása 2 .

Betakarítás után szükséges feldolgozás - A plazmát legfeljebb 1 nap alatt elválasztjuk a begyűjtéstől 800-1600 x g-vel 20 percig szobahőmérsékleten végzett centrifugálással, majd átvisszük egy polipropilén kémcsőbe (min. 2 ml plazma) 2 .

A minta stabilitása - az elválasztott plazmát 72 órán át szobahőmérsékleten, 7 napig 2-8 ° C-on vagy legalább 6 hétig -80 ° C-on fagyasztva tárolhatjuk. A mintákat ötször lehet fagyasztani/felolvasztani a HCV 2 RNS elvesztése nélkül .

Módszer - Valós idejű PCR (TaqMan): láncpolimerizációs reakció a felhalmozódott PCR termék valós idejű kimutatásával, a kibocsátott fluoreszcencia mérésével.

Megjegyzés: a minta feldolgozása automatikusan megtörténik 2 .

Referenciaértékek - nem detektálható HCV-RNS; a módszer kimutatási határa a linearitási tartományban 15 NE/ml, amely érték egybeesik az analitikai érzékenységgel. A "nem kimutatható" eredmény azt jelenti, hogy vagy nagyon alacsony virémiás (a mennyiségi határ alatt), vagy hiányzik a virémia. HCV RNS 2. eredmény .

Az eredmények értelmezése

A viremia eredményeit számszerűen (NE/ml) és logaritmikus formában (log IU/ml) fejezzük ki. A logaritmikus expresszió hasznos a kezelési válasz értékelésére. A virémia 1-log változása a kiindulási értékhez képest tízszeres növekedést vagy csökkenést jelez. A pozitív eredmény elérése aktív fertőzés jelenlétét jelzi .

Virémia monitorozás a klasszikus vírusellenes kezelési séma szerint

A PegINFα és ribavirin kombinációja krónikus C típusú hepatitis kezelésére javallt HCV-pozitív RNS-ben szenvedő felnőtt betegeknél, valamint vírusfertőzés után kompenzált májcirrhosisban szenvedő betegeknél.

A vírusellenes kezelés célja tartós virológiai válasz (SVR) a kezelés befejezése után 6 hónappal nem kimutatható HCV-RNS.

A vírusellenes kezelésre adott választ számos tényező befolyásolja, akár virológiai (HVC genotípus, bazális virémia szint), akár gazdafüggő (faj, májbetegség súlyossága, inzulinrezisztencia). Velük együtt vannak olyan korrigálható tényezők, amelyek a kezdeti terápia során megjelentek, de beavatkozhatnak a második kezelési kísérletbe (nagy dóziscsökkentés vagy akár a kezelés abbahagyása hematológiai mellékhatások vagy depresszió miatt; alacsony megfelelés) 4 .

Attól függően, hogy a vírusürítés mikor következett be, a virológiai válasz a következő kategóriák egyikébe sorolható:

- gyors virológiai válasz ("RVR"): 4 héttel a terápia megkezdése után kimutathatatlan HCV-RNS megszerzése; a betegeket "gyors reagálóknak" tekintik;

- korai virológiai válasz („Korai virológiai válasz”, EVR) teljes: a terápia megkezdése után 12 héttel nem kimutatható virémia határozza meg; a betegeket "standard válaszadóknak" tekintik;

- lassú virológiai válasz ("Lassú virológiai válasz") vagy részben korai virológiai válasz: a virémia ≥2 log10-vel történő csökkenése határozza meg a kiindulási értékhez képest a kezelés megkezdése után 12 héttel, és a 24. héten kimutathatatlan HCV RNS-t nyer; a betegeket „lassan reagálóknak” tekintik 3; 4 .

Másrészt a következő kategóriák kapcsolódnak az antivirális terápia kudarcához:

- virológiai válasz hiánya ("nem válasz"): a virémia 4-es csökkenése határozza meg .

A kombinált kezelés időtartama a vírus genotípusától függ. A szokásos vírusellenes terápiás programok szerint az 1. vagy 4. genotípusú HCV-vel fertőzött betegeknek, függetlenül a kiindulási virémiától, 48 hétig kell kezelni. Multinacionális klinikai vizsgálatok kimutatták, hogy a 2. vagy 3. genotípussal fertőzött betegeknél a kombinált terápia időtartama 24 hétre csökkenthető anélkül, hogy a hatékonyság romlana (a tartós virológiai válasz aránya 84%) .

Az INDIV-2 vizsgálat adatai azt mutatják, hogy az 1/4-es genotípusú betegeknél a virológiai válasz alapján egyénre szabott terápia indítható:

Virémia monitorozás olyan protokollok esetében, amelyek közvetlen hatású vírusellenes szereket tartalmaznak (interferonmentes terápia)

A virémiát a kezelés megkezdése előtt, opcionálisan 2-4 hét után, a kezelés végén (a terápiás sémától függően 8, 12, 16 vagy 24 hét után) és a kezelés befejezését követő 12 vagy 24 hét elteltével határozzák meg 7 .

A heparin gátolja a PCR-t, ezért nem használható antikoagulánsként 2 .