IMD Orvosi Diagnosztikai Intézet, Hepatitis C (HCV) vírusterhelés-meghatározó laboratórium
A klinikai diagnosztikában egyre inkább alkalmazzák a HCV RNS rendkívül érzékeny kimutatását nukleinsav-amplifikációs technológiával (NAT). A valós idejű kvantitatív PCR nagyon magas specificitás és érzékenység tesztjének bizonyult.
A HCV fertőzés diagnosztizálása
A hepatitis C vírus véren és vérkészítményeken keresztül terjed. A transzfúzióval összefüggő hepatitis kockázata nagymértékben csökkent, többek között a HCV vérvizsgálati tesztek széles körű alkalmazása révén. A HCV-fertőzés előfordulási gyakorisága intravénás szerekkel való visszaélés esetén a legmagasabb, más perkután expozíció esetén valamivel alacsonyabb.
Mivel a HCV-vel fertőzött betegek specifikus antitesteket termelnek, immunoszerológiai teszteket lehet kidolgozni ezen antitestek specifikus kimutatására. Az anti-HCV antitestek jelenléte azonban csak egy korábbi HCV fertőzésre utal, és nem alkalmazható a jelenlegi fertőzés jelzőjeként. A közvetlen kimutatáshoz nem áll rendelkezésre alternatív víruskultúra.
A májenzimek mérése nem közvetlenül méri a HCV-fertőzés mértékét, mivel a megnövekedett értékek különböző okokból származhatnak. Ezzel szemben a viraemia mérhető a HCV-RNS meghatározásával PCR (polimeráz láncreakció) segítségével. A PCR segítségével a HCV viraemia kimutatható az immunológiai szerokonverzió előtt. A HCV RNS szérumban vagy plazmában bekövetkező változását használják fel a vírusellenes kezelésre adott vírusreakció értékelésére.
Valós idejű PCR
A PCR alkalmazásával történő diagnosztizáláskor a kórokozó genomjának specifikus területeit amplifikálják. Valós idejű PCR-ben a kimutatás fluoreszcens festékek segítségével történik. Ezek általában oligonukleotid szondákhoz kapcsolódnak, amelyek specifikusan kötődnek a PCR amplikonhoz. A fluoreszcencia intenzitások detektálása a valós idejű PCR során lehetővé teszi a termékek detektálását és mennyiségi meghatározását anélkül, hogy a mintacsőt újra kellene nyitni a PCR után. Ez kiküszöböli az átvihető szennyeződés kockázatát.
A "vírusterhelést" nemzetközi egységekben fejezzük ki, NE/ml-ben kifejezve. A WHO1 hivatalos jelentése szerint a WHO szabvány 1 NE körülbelül 4 HCV genom-ekvivalensnek (másolatnak) felel meg. A módszer lehetővé teszi az összes 1–6. Genotípus HCV vírusterhelésének megbízható meghatározását.
Az eredmények értékelése
A módszer linearitása széles mérési tartományon (43 és 7x107 NE/ml) terjed. (Nem lineáris) detektálást is adnak az 1 - 42 NE/ml tartományban. Így a felső és az alsó kimutatási határ érezhetően javul, és már nincs szükség két különböző módszer végrehajtására a kvalitatív és kvantitatív kimutatáshoz.
Ezt használják a viraemia érzékenyebb kimutatására az akut fertőzés korai szakaszában, a krónikus HCV fertőzések jobb differenciálódására, valamint az antivirális terápia nyomon követésére.
Az elérhető eredményeket az alábbi táblázat mutatja.