Krónikus szalmonellafertőzés által kiváltott bélfibrózis protokoll (németre fordítva)
Összegzés
Ez a protokoll leírja a Salmonella által vezérelt bélfibrózis egérmodelljét, amely hasonlít a Crohn-kór fő kóros jellemzőire, beleértve a transzmurális gyulladást és a fibrózist. Ez a módszer felhasználható a c57Bl/6 genetikai háttéren tartott mutáns egerek fibrotikus kimenetelét megváltoztató gazda tényezők értékelésére.
Absztrakt
A szöveti fibrózis, amelyet az extracelluláris mátrix, például a kollagén patológiás felhalmozódása jellemez, tartós gyulladás és szabályozatlan helyreállítás eredménye. Gyulladásos bélbetegségben (IBD) a fibrózis visszatérő szűkületi képződményekhez vezet, amelyeknek nincs más hatékony terápiája, mint a műtéti reszekció. Késői megjelenése miatt a fibrózist vezérlő folyamatok kevésbé tanulmányozottak és nagyrészt ismeretlenek. Ezért a fibrotikus szövődmények jelentenek fő kihívást az IBD-ben. Ez a protokoll a bélfibrózis robusztus in vivo modelljét írja le, amelyben a C57Bl/6 egerek sztreptomicin előtti előkezelését, majd fertőtlenítéssel történő szájon át történő szoptatást lásd a Cecum fibrosisában. Elmagyarázzák az S. Typhimurium -AroA vakcinázási előállításának módszereit, a vakbél és a lép kórokozóterhelésének számszerűsítését és a bélszövetekben a kollagén lerakódásának értékelését. Ez a kísérleti betegségmodell hasznos olyan gazda tényezők tanulmányozásához, amelyek vagy súlyosbítják, vagy súlyosbítják a CD-szerű bélfibrózist.
Bevezetés
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Jegyzőkönyv
Az összes állatprotokollt a British Columbia Egyetem Állatgondozási Bizottsága hagyta jóvá.
1. Salmonella Typhimurium AroA tenyészetek előkészítése egerek orális szoptatásához
2. A szalmonella szennyezettségének értékelése a szövetekben
3. Picrosirius Red festés és a kollagén mennyiségi meghatározása.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Reprezentatív eredmények
A streptomicin-kezelés, majd az orális S. Typhimurium -AroA fertőzés, robusztus bélgyulladáshoz és fibrózishoz vezet, különösen a vakbélben (1. ábra). A fertőzött állatokból tipikusan 10 8–10 9 CFU/1 g vakbél és 10 4 CFU/1 g lép állítható elő (2. ábra)). A fibrózis értékelése a picrosirius vörös foltos vakbélszekciókban a fibrózis csúcsát mutatja 21 nappal a fertőzés után, míg a patológia nagy része a 42 pi napra megoldódik (3. ábra és 4. ábra). A kollagén lerakódása a bél submucosájában a legkifejezettebb, míg a fibrózis enyhébb a nyálkahártyában.
Az 1. szegmens, amely a vakbél csúcsát képviseli, felhasználható a génexpressziós elemzéshez, míg a 2. szegmens 10% -os pufferelt formalinban van rögzítve a szövettanhoz, a 3. szegmens pedig homogenizált a baktériumok felsorolásához.
Szalmonella CFU szöveti tömegenként a fertőzés során. Ezt az ábrát Lo et al. 26 megváltozott. A kép nagyobb verziójának megtekintéséhez kattintson ide.
A Ceca fénymező képei nem fertőzött állatokról és állatokról 21 és 42 nappal az S. Typhimurium AroA fertőzés után. Scale pole, 200 m. Ezt az ábrát Lo et al. 26 megváltozott.
(A.) A PSR + festés normalizálódott a szövet területén. A jelentőséget egyoldalas ANOVA Kruskal-Wallis teszt és Dunn Post tesztje határozza meg. **, P 0,05. Ezt az ábrát Lo et al. 26 megváltozott. (B.) Példa kollagén mennyiségi meghatározására a vakbélszövetben Fidzsi-szigeteken. A kép nagyobb verziójának megtekintéséhez kattintson ide.
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Vita
Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.
Közzétételek
A szerzőknek nincs pénzügyi összeférhetetlenségük.