NMP 22 (hólyagdaganat marker) - kvantitatív teszt - Synevo
Általános információ
A hólyagrák a férfiaknál a 4., a nőknél a 8. helyen áll az összes rákos megbetegedés között. A hematuria kivételével a hólyagdaganatokban nincsenek egyéb korai tünetek. A hólyagrák kizárása vagy diagnosztizálása érdekében cisztoszkópos vizsgálat kötelező. Egészen a közelmúltig a vizelet citológiája volt az egyetlen általánosan alkalmazott nem invazív módszer. A vizelet citológiai érzékenysége és specifitása azonban a daganat stádiumától és a szaporodó sejtek morfológiájától függ.
Az előrehaladott hólyagrák kimutatására és monitorozására a vizelet citológiája biztonságos eszköz; korai stádiumú hólyagrák azonban csak az esetek körülbelül 30% -ában mutatható ki 2. Számos kísérletet tettek a húgyhólyagrákra jellemző különféle neminvazív tesztek validálására, az egyik az NMP22 1; 7 .
A sejtmag belső szerkezeti kereteit a nukleáris mátrixfehérjék (NMP) alkotják. Ez a mátrix "horgonyként" szolgál a DNS-replikáció, az RNS-szintézis és a hormonkötés folyamataiban részt vevő enzimatikus készülékek számára. Az NMP fehérjék szintén szerepet játszanak a génexpresszió szabályozásában és koordinálásában. Fey és Penman munkája azt mutatta, hogy az NMP expressziója a származási sejt típusától függően változik. E megfigyelés alapján bebizonyosodott, hogy a neoplasztikus betegek szérumában sokkal magasabb koncentrációban vannak oldható NMP fehérjék, mint egészséges egyéneknél. Partin és munkatársai kimutatták, hogy a normális prosztata szövetben az NMP expressziós mintázat eltér a jóindulatú prosztata hiperpláziától és a prosztataráktól. Korábbi munkáikban specifikus NMP fehérjéket azonosítottak az oszteoszarkóma, a vastagbélrák és az emlőrák kezelésére. Ezek a megfigyelések azt mutatták, hogy az NMP-meghatározások hasznosak lehetnek a különböző daganatokban szenvedő betegek megfigyelésében.
A különféle NMP fehérjék szervspecifikusak. Az NMP22 vagy a nukleáris mitotikus fehérje (NuMA) megtalálható az emberi hámsejtekben, ahol biztosítja a genetikai anyag helyes elválasztását a mitózis során. Az NMP22 koncentrációja rosszindulatú urotheliális sejtekben akár 80-szor nagyobb, mint a normál szövetekben 10. Az NMP22 fehérje felszabadul a vizeletben a sejtes apoptózis 9 eredményeként. A vizelet citológiájától eltérően az NMP22 antigén kimutatása nem függ az ép sejtek helyreállításától 3 .
Az NMP22-nek kétféle tesztet fejlesztett ki a Matritech: kvantitatív és kvalitatív 9 .
Az NMP22 mennyiségi meghatározását enzimhez kapcsolt immunszorbens vizsgálattal végezzük olyan antitestek felhasználásával, amelyek felismerik a fő nukleáris mitotikus fehérje (NuMA) fehérjeszekvenciákat. Stabilizált spontán vizeletminta szükséges.
Az NMP22 meghatározásának hasznossága
- diagnosztikai célokra olyan betegeknél, akiknél a hólyag átmeneti sejtes karcinóma tünetei vagy kockázati tényezői vannak (a határérték 7,5 U/ml) kombinálva nem helyettük szokásos diagnosztikai eljárások;
- hólyagdaganatos betegek műtéti kezelés után történő nyomon követése az okkult vagy gyorsan visszatérő daganatok kimutatása céljából (a határérték 10 U/ml) 10 .
Az FDA 1996-ban jóváhagyta a tesztet a visszatérő hólyagdaganatok prognózisának és monitorozásának (műtét után) felhasználására. 2000-ben a teszt FDA jóváhagyást kapott a hólyagdaganatok diagnosztizálására.
A vizsgálatok célja a vizsgálat érzékenységének és specifitásának meghatározása volt a vizelet citológiájához képest. Bár a citológia magas specifitással rendelkezik a húgyhólyagrákra, fő hátránya az alacsony érzékenység a nem invazív daganatok azonosítására 9 .
Három különálló, körülbelül 400 beteg bevonásával végzett vizsgálatban Soloway, Miyanaga és Landman kimutatták, hogy a kvantitatív NMP22 vizsgálat általános érzékenysége 70-81% a visszatérő urotheliális daganatok kimutatására. A citológia esetében 10-40% -os érzékenységről számoltak be. Fontos megállapítás volt, hogy az NMP22 nagy érzékenységgel rendelkezik a nem invazív daganatokkal szemben. Így Miyanaga és munkatársai bebizonyították, hogy a felszíni daganatokra vonatkozó teszt érzékenysége 70%.
A citológiához képest az NMP22 specifitása alacsonyabb. Carpinito, Soloway és Landman 70-79% -os specificitást jelentett az NMP22-re vonatkozóan, míg a vizeletcitológia 90-94% -os specificitást ért el. A gyakorlatban ez arra utal, hogy az NMP22 sokkal több hamis pozitív eredményt generál, mint a 9; 12; 13 citológia .
Az NMP22 hamis pozitív eredményeit illetően Ponsky és Sharma kimutatta, hogy a klinikai kizárási kritériumok alkalmazása akár 95% -kal növeli a teszt specifitását, és implicit módon csökkenti a hamis pozitív esetek számát. Azt is meg kell jegyezni, hogy a cisztoszkópia általánosan elfogadott érzékenysége 80-85%, és lehetséges, hogy a hamis pozitívnak minősített NMP22 pozitív eredményeinek egy része valóban olyan pozitív eset, amelyet a cisztoszkópián nem észleltek.
A klinikai kizárási kritériumok a következők:
Soloway és Miyanaga azt is kimutatta, hogy az NMP22 teszt nagyon jó negatív prediktív értékkel rendelkezik (86–94,9%); ez azt jelenti, hogy negatív eredmény elérése nagyon nagy valószínűséggel jelzi az urothelialis tumor hiányát 9 .
A hematuria differenciáldiagnosztikájának eredményességét három, több mint 700 beteg bevonásával végzett vizsgálat bizonyította. Akaza, Miyanaga és Carpinito kimutatták, hogy az NMP22 teszt érzékenysége 85,7-90,9% a hematuriában szenvedő betegek urotheliális daganatai diagnosztizálására, míg a vizelet citológiai érzékenysége 50-54,5%.
A hólyagdaganatok monitorozását illetően Stampfer és munkatársai kimutatták, hogy az NMP22 érzékenysége 67%, jobb, mint a vizelet citológiája (40%). Ezenkívül a teszt érzékenységét a tumor stádiumának megfelelően rétegeztük: 59% nem invazív daganatoknál és 90% agresszív daganatoknál 9 .
Betegképzés - nem ajánlott a tesztet a teljes cystectomia után, valamint az invazív eljárás (cisztoszkópia, katéterezés) utáni első 5 napban használni; a betakarítást 0 és 12 óra között kell elvégezni a betegek műtéti kezelés után történő figyelemmel kísérése esetén 10 .
Begyűjtött minta - spontán vizeletminta 10 .
Betakarítási konténer - NMP22 betakarító készlet (tartály stabilizátorral) 10 .
Betakarított mennyiség - 10 ml vizelet; a stabilizált minta kék/zöld 10 .
A bizonyíték elutasításának okai - a minta nem stabilizálása; nem megfelelő stabilizátor használata 10 .
Betakarítás után szükséges feldolgozás - a vizeletet a gyűjtés után azonnal stabilizálni kell 10 .
A minta stabilitása - 2 hét 2-8 ° C-on. A minta nem fagy meg.
Módszer - EIA (immunenzimatikus) 10 .
Kimutatási határ: 2,1 U/ml 10 .
Határértékek és interferencia