Ruhr Egyetem Bochum Prof
Ruhr Egyetem Bochum Prof. Dr. med. Ulrich Mittelkötter Munkavégzés helye: Katharinen- Unna Kórház Általános és Visceralis Sebészeti Osztály A c-jun N terminális kinázok (JNK1 és JNK2) szerepe az alacsony dózisú DSS colitis modellben Nyitó disszertáció orvosdoktori fokozat megszerzéséhez a Ruhr-i magas orvosi karon A Bochumi Egyetem, Elisabeth Frick, Orsk/Orenburg előadó, 2009
Dean: Prof. Dr. G. Muhr Előadó: Prof. Dr. U. Mittelkötter játékvezető: Prof. Dr. A. Tannapfel szóbeli vizsga napja: 2009. december 3
Hálásan szenteltem a családomnak
3.1.1 DAI értékelés: JNK1 -/- versus JNK1 +/+. 33 3.1.2 DAI értékelés: JNK2 -/- versus JNK2 +/+. 34 3.2 Crypt Damage Score (CDS) - szövettani értékelés. 35 3.2.1 A CDS értékelése: JNK1 -/- versus JNK1 +/+. 35 3.2.2 A CDS értékelése: JNK2 -/- versus JNK2 +/+. 36 3.2.3 Összegzés. 38 3.3 Az immunfluoreszcencia értékelése. 39 3.3.1 CD8 expresszió Villi-ben: JNK2. 39 3.3.2 CD4 expresszió Villi-ben: JNK2. 41 4 Megbeszélés. 43 4.1 A JNK és más MAPK gátlása az IBD terápiában. 43 4.2 DSS-vastagbélgyulladás mint állatmodell. 44 4.3 Saját eredmények összefoglalása. 45 4.4 Saját eredmények elemzése a jelenlegi vizsgálatok hátterében. 47 4.5 Összefoglalás. 50 5 Irodalomjegyzék. 52 Köszönetnyilvánítás CV 2
Rövidítések listája ábra AK ábra Antitestek AS aminosav ATP adenozin-trifoszfát Bcl-1 B-sejtes leukémia/lymphoma 1 vagy kb. CARD kaszpáz toborzási domén CD differenciálódási csoport CDS Crypt Damage Score CED gyulladásos bélbetegség CU fekélyes vastagbélgyulladás CY2 karbocianin CY3 Indokarbocianin d nap DAI betegség-aktivitási index DAPI 4, 6-diamino-2-fenilindol-dihidroklorid DMD-pimelinsav D-glu-mezo-diamino-pimelsav DNS dezoxiribonukleinsav DSS dextrán-nátrium-szulfát ELK1 transzkripciós faktor ERK extracelluláris szignál által szabályozott kináz et. et alii g gramm GALT bélhez kapcsolódó limfoid szövet G-CSF granulocita kolónia stimuláló faktor GM-CSF granulocita-makrofág kolónia stimuláló faktor GVO genetikailag módosított szervezetek HE hematoxilin/eozin HLA humán leukocita antigén ICAM-1 sejtközi adhéziós molekula IEZ IFN interferon hámsejtek IF immunfluoreszcencia Ig immunglobulin II interleukin IMAC interstinalis makrofágok iv intravénás JIP JNK-kölcsönhatásban lévő fehérje JNK c-jun NH2 terminális kináz kda Kilodalton ko kiütés liter liter LBP LPS-kötő fehérje LPS lipopoliszacharid LRR gazdag leucin ismétlődések M moláris (mol/l) 3
MAPK mitogénnel aktivált protein-kináz MC Crohn-betegség MCP-1 monocita kemo-vonzó fehérje 1 MHC fő hisztokompatibilitási komplex perc perc millió MIP1 makrofág gyulladásos fehérje ml milliliter NBD nukleotidkötő domén NF-kB magfaktor-kb NK sejtek természetes gyilkos sejtek NOD Nukleotidkötő és oligomerizációs domén PBS foszfátpufferolt sóoldat, foszfátpuffer PCR polimeráz láncreakció PP Peyer plakkok PRR kórokozó felismerő receptorok RNS ribonukleinsav RT szobahőmérséklet SAPK stressz-aktivált protein kináz SCID súlyos kombinált immunhiány SEM átlagos hiba az átlagos STAT-3 jelátalakító és aktivátor transzkripció TGF-béta transzformáló növekedési faktor béta Th 1/2 sejtek T-segítő sejtek TJ szoros csatlakozás TLR toll-szerű receptor TNBS trinitrobenzol-szulfonsav TNF tumor nekrózis faktor U egységek éjszakai tartózkodás vs. például µ micro 4
Táblázatok felsorolása 1. táblázat: A colitis néhány állatmodelljének áttekintése. 21 2. táblázat: A klinikai pontszám kiszámítása a fogyás, a széklet minősége és a székletben lévő vér paraméterei alapján (módosítva: Cooper et al., 1993). 25 3. táblázat: A nyálkahártya károsodásának szövettani pontszáma (módosítva: Egger, 1997). 28 4. táblázat: Elsődleges antitestek. 31 5. táblázat: Szekunder antitestek. 31 5
Az ábrák felsorolása 1. ábra: Mitogén-aktivált protein-kináz (MAPK) kaszkád klasszikus szerkezete [22]. 15 2. ábra: A DSS molekuláris szerkezete. 20 3. ábra: A belek képei. 26 4. ábra: Betegség-aktivitási index: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 34 5. ábra: Betegség-aktivitási index: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 35 6. ábra: A Crypt Damage Score értékelése: JNK1 -/- vs. JNK1 +/+. 36 7. ábra: A Crypt Damage Score értékelése: JNK2 -/- vs. JNK2 +/+. 37 8. ábra: A disztális vastagbél reprezentatív HE képei. 38 9. ábra: CD8 expresszió a disztális vastagbél villiáiban (JNK2). 40 10. ábra: IF képek CD8 expresszióhoz JNK2-ben a disztális vastagbélben. 40 11. ábra: CD4 expresszió a disztális vastagbél villiáiban (JNK2). 41 12. ábra: IF képek CD4 expresszióhoz JNK2-ben a disztális vastagbélben. 42 6
A foszforilációs lépések soros kapcsolású kaszkádjai, amelyek az átvitel (jelerősítés) progresszióján keresztül felerősítik a választ. A protein-kinázok nagy csoportja közül az ún. Mitogén-aktivált protein-kinázok (MAPK) családja nemrégiben különös jelentőségre tett szert [59, 66]. Ide tartoznak a c-jun N-terminális kináz (JNK) és a p38 kináz. 1. ábra: Mitogén-aktivált protein-kináz (MAPK) kaszkád klasszikus szerkezete [22]. A JNK-t az MKK4 és az MKK7 aktiválja. Ezeket a MAPKK-t viszont különböző MAPKinase Kinase Kinázok (MAPKKK) aktiválják, amelyeket viszont olyan ingerek stimulálnak, mint a növekedés és a stressz faktorok. 15-én