SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP szubsztrát készlet - PDF ingyenes letöltés

1 FELHASZNÁLÓI KÉZIKÖNYV SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP szubsztrátkészlet (katalógusszám) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D Heidelberg Telefon, Fax

western

2 Tartalom 1. SERVALIGHT EOSULTRA Általános információk A készlet alkotórészei Tárolási feltételek 2 2. A KIMUTATÁS TELJESÍTÉSE Fontos az elején Szükséges, nem szállított anyagok és megoldások A Western blot detektálási protokoll rendszere 5 3. PROBLÉMAMEGOLDÁSOK 7 4. RENDELÉSI INFORMÁCIÓK 8 Ver 03/12 1

3 1. SERVALight EosUltra 1.1. Általános információk A SERVALight EosUltra rendkívül érzékeny kemilumineszcens szubsztrát a torma-peroxidáz (HRP) konjugátumok, pl. jelzett antitestek az immunblotokon. A szubsztrát jelintenzitása lehetővé teszi az antigén detektálását az alsó femtogram tartományban (10-15). Előnyök: Detektálás filmeken vagy kemilumineszcenciára alkalmas dokumentációs rendszerekkel, pl. ProXima C16Phi +, izogén Nagyon rövid expozíciós idő és/vagy nagyobb antitesthígítás az optimalizált, fényintenzív jelek miatt A SERVALight EosUltra nem alkalmas diagnosztikai vagy egyéb klinikai alkalmazásokra, hanem csak kutatásra és fejlesztésre. A SERVALight gyártója a Cyanagen Srl. A Cyanagen Srl az Egyesült Államok, az EP, az Egyesült Államok és az Egyesült Államok következő szabadalmainak, valamint más országokban már benyújtott és ennek megfelelően érvényes szabadalmak tárgyát képezi. A készlet alkatrészei Cat.-No. SERVALight EosUltra Luminol oldat SERVALight EosUltra Luminol oldat ml 10 ml ml 50 ml ml 100 ml 1.3. Tárolási feltételek Tárolja a készletet 2 8 C-on. Ha az ajánlott hőmérsékleten tárolja, legalább addig használható, amíg: lásd a címkét. 2

6 2.3. Western blot detektáló gélelektroforézis transzfer blokkoló inkubáció vázlata 1. Antitest inkubáció 2. Antitest SERVALight EosUltra inkubációs detektálás 2.4. 1. protokoll: Távolítsa el a blotot a blot készülékről, majd blokkolja szobahőmérsékleten (perc) vagy 2-8 C hőmérsékleten egy éjszakán át. (2) Távolítsuk el a blokkoló reagenst, és adjuk hozzá az első antitest-munkaoldatot megfelelő hígításban. Inkubálás 1 órán át szobahőmérsékleten, vagy egy éjszakán át 2-8 C-on, rázással. (3) A membrán ezt követő mosási pufferrel történő mosása (5 perc). Ismételje meg a mosási lépést 4-6 alkalommal. Nagyobb puffertérfogatok vagy a mosási lépések száma segíthet a háttér csökkentésében. (4) Adja hozzá a HRP konjugátum megfelelő hígítását. A blot inkubálása szobahőmérsékleten 1 órán át, rázással. (5) Ismételje meg a (3) lépést. (6) A kimutatás előtt a kimutatási oldatoknak szobahőmérsékleten kell lenniük. (7) Készítsük elő a szubsztrát munkaoldatát úgy, hogy a peroxid oldatot egyenlő arányban összekeverjük luminol oldattal. A membrán cm 2 -ére 0,1 ml munkaoldatot kell használni. 5.

7 (8) A munkaoldat szobahőmérsékleten 24 órán át stabil. (9) A blotmembrán 5 perces inkubálása szubsztrátmunkálóoldattal. (10) Helyezze a védett blotot (például tekerje be légbuborékoktól mentes ételfóliába) a film kazettába fehérje felével felfelé, és helyezze be a filmet. Itt megfelelő sötét szobában kell dolgoznia. A filmnek az expozíció alatt száraznak kell maradnia. FONTOS: A felesleges szubsztrátumot el kell távolítani a blotból. A filmet óvatosan kell felvenni, mert a jel intenzitása miatt a film/folt enyhe elcsúszása is homályos vagy helytelen jelekhez vezethet. (11) Először is 60 másodperces expozíciós idő ajánlott. A jelerősségtől függően az optimális jelintenzitáshoz szükséges további expozíciós idő ennek megfelelően választható ki. (12) A kitett filmet ezután kifejlesztik. (13) A filmfejlesztés alternatívájaként a detektálás megfelelő dokumentációs rendszerek, pl. ProXima C16 Phi +, izogén. (14) Szükség esetén a blot kimutatás után lehúzható és antitestekkel újratölthető. 6.

9 4. Rendelési információk membránokhoz Kat.- sz. Immobilon (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, pórusméret: 0,2 µm (1 tekercs) Fluorkötő (PVDF), 10 x 10 cm, pórusméret: 0,2 µm (20 lap) fluorkötő (PVDF), 25 cm x 3 m, pórusméret: 0,2 µm (1 tekercs) Protein Standard SERVA Western Blot Protein Standard Reagents Tween Detection Reagents/Kits Chemiluminescence Reagens for torma peroxidáz SERVALight Polaris CL HRP WB szubsztrátkészlet SERVALight Eos CL HRP WB szubsztrátkészlet CL HRP WB hordozó készlet