Szabványosított módszer az Arabidopsis Seeds protokoll nagy áteresztőképességű sterilizálására (lefordítva
Összegzés
A tanulmány célja a fehérítő- és klórgázsterilizálásnak a vetőmag csírázására gyakorolt hatásának meghatározása volt egy sor steril táptalajon tenyésztett Arabidopsis genotípusból. Optimalizált sterilizálási protokollokat dolgoztak ki a mikrobiális szennyeződések növekedésének megakadályozása érdekében, miközben a vetőmag kielégítő túlélését biztosítja.
Absztrakt
Bevezetés
Az Arabidopsis magvak sterilizálásához használt két fő módszer a kereskedelmi forgalomban kapható fehérítőre (folyékony fázis) és klórgázra (gőzfázis) támaszkodik. Különböző módszereket alkalmaztak mind az 1, 4, 5, 6, 7, 8, 9 folyékony fázisú sterilizálásra, a magvak 10 sterilizálására, mind az Arabidopsis 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 gőzfázisú sterilizálására. Bár ezek az eljárások hatékonyak voltak az alkalmazott genotípusú magvak sterilizálásában, a különböző kezelések sterilizálásának a különböző genotípusú magokra gyakorolt hatásának részletes elemzéséről nem számoltak be. Ezért szükséges ezen sterilizálási eljárások optimalizálása annak körülményeinek meghatározása érdekében, amelyek mellett a hatékony sterilizálás magas csírázási sebességgel kombinálódik.
Az Arabidopsis Biológiai Erőforrások Központja (ABRC) egyedülálló helyzetben van, hogy a) tesztelje a különböző genotípusú magok életképességét a gyűjteményben, és b) kihasználja a belsőleg alkalmazott minőségellenőrzési eljárásokat, és válaszul a felhasználók magvak csírázására adott visszajelzésére. Az itt bemutatott kísérletek célja a különböző sterilizálási módszerek számos Arabidopsis genotípus magcsírázására gyakorolt hatásának meghatározása volt. Optimalizált sterilizálási eljárásokat, amelyek magas magcsírázási sebességet eredményeznek, miközben a kórokozó szennyeződését minimális szinten tartják, fehérítő és klórgázzal történő sterilizálásnál mutatjuk be.
Jegyzőkönyv
1. 1 x Murashige és Skoog (MS) tápközeg előkészítése
2. Arabidopsis magok sterilizálása fehérítővel
3. Arabidopsis magvak sterilizálása klórgázzal
4. Arabidopsis növekedése MS lemezeken
Reprezentatív eredmények
A nyílt terepről, az üvegházból és a növekedési kamrából gyűjtött arabidopsis magokat néha különféle mikroorganizmusokkal, például baktériumokkal és gombákkal szennyezik, 1, 4. Így a magok steril táptalajon történő csírázása különösen nehéz lehet a lemezek szennyeződése miatt, különösen, ha a vetőmag mennyisége korlátozott. A fehérítő- és klórgáz-sterilizálás optimalizált protokollja, amelynek eredményeit az alábbiakban mutatjuk be, minimalizálja ezt a problémát és megőrzi a nagy teljesítményű alkalmazásokhoz szükséges magok életképességét.
A fehérítő sterilizálásának hatása az Arabidopsis Col-0 magjának csírázására
Ezen eredmények szerint 1 órán át 6,1% -os gázkoncentrációval történő kezelést (2. táblázat) választották a legjobb gőzfázisú sterilizálási feltételnek, hogy teszteljék a gázsterilizálás hatását a különböző mutáns vonalakon, mivel kombinálja (magas csírázási arány 85%) és nagyon alacsony penészszennyezést (0,02%).