A bazális és a forskolin által stimulált lipolízis mérése az inguinalis zsír zsírpárnák protokolljában

Összegzés

Ez a protokoll leírja a bazális és a forskolin által stimulált lipolízis meghatározásának módját inguinalis zsírpufferekben, amelyeket normál étrendből (NCD) vagy magas zsírtartalmú étrendből (HFD) nyernek, vad típusú egerekkel táplált kapszaicinben. A lipolízis nyomán a lágyék zsírszövet párnáiból mértük a glicerin felszabadulást.

bazális

Absztrakt

A lipolízis olyan folyamat, amelynek során a zsírszövetben trigliceridként tárolt lipideket glicerinné és zsírsavakká hidrolizálják. Ez a cikk leírja az alapvető lipolízis és a forskolin (FSK) mérésének módszerét inguinalis zsírpufferekben, amelyeket vad típusú egerekből izoláltak, akár normál étrenddel (NCD), akár magas zsírtartalmú étrenddel. (HFD), akár 0,01% kapszaicint (PAC) tartalmazó magas zsírtartalmú étrendben.: Az átmeneti receptor vanilloid 1 (TRPV1) alcsalád-agonistája 32 héten át Az ex vivo lipolízis elvégzésére itt leírt módszert Schweiger és mtsai .: 1 A glicerin szint UV-látható spektrofotometriával (UV Az itt leírt módszer felhasználható a zsírpufferek inguinalis zsírjának sikeres elkülönítésére lipolízis mérésekhez, hogy következetes eredményeket kapjunk. Az inguinalis zsírpufferek leírt protokollja könnyen kiterjeszthető más szövetek lipolízisének mérésére.

Bevezetés

A zsírszövet zsírként tárolja az energiát, és a 3., 4. termogenezishez zsírsav-oxidációra van szükség. Az étrend által elfogyasztott zsírsavakat chilomicronokban csomagolják az apoproteinekkel, és a véráramon keresztül juttatják el a test különböző szöveteibe. Bár a test legtöbb sejtje energiatartalékokat tárol, a zsírszövet a felesleges energiát 5, 6 zsírként tárolja. A zsírszövetben a lipolízist összetett folyamatok szabályozzák, és a lipolízis molekuláris részletei továbbra is homályosak 7 .

A lipolízis olyan folyamat, amelynek során a zsírszövetben tárolt triglicerideket (TGL) hidrolizálva glicerint és zsírsavakat (FA) állítanak elő a liposzomális zsírlipolízis (GLA) enzim révén 8. A bazális és stimulált lipolízis változásai az elhízás jellemzői. A BAsal lipolízist az ATGL 9 aktiválása szabályozza, amely a TGL-t átalakítja diacilglicerinné (DAG), amelyet ezután monoacil-glicerinné (MAG) hidrolizálnak. A hormonérzékeny lipáz (HSL) adenilil-cikláz által történő aktiválása aktiválja az adenozin és a ciklikus monofoszfát (cAMP) függő protein-kináz A (PKA) stimulációját és lipolízist indukál. Az alap- és stimulált lipolízis mérése ezért fontos az ebben a folyamatban részt vevő fehérjék aktivitásának elemzéséhez. Ezenkívül a lipolízis molekuláris szabályozásának fejlesztése hasznos lehet az elhízás elleni új terápiás stratégiák kidolgozásában 10. Mivel a lipolízist és a zsírsav-oxidációt stimuláló molekulák potenciális jelöltek a raktárakban tárolt zsír csökkentésére, fontos, hogy a reprodukálhatóság szempontjából robusztus tesztet alkalmazzunk.

Korábban publikált adatok arra utalnak, hogy a fehér zsírszövetben expresszált TRPV1 fehérje CAP által fokozott bazális és FSK (adenilil-cikláz) aktiválása stimulálta az inguinalis zsír lipolízisét 11. Korábbi kutatások arra is utalnak, hogy a TRPV1 CAP által történő hosszú távú aktiválása aktiválja a PKA 12-et. Mivel a PKA aktiválása stimulálja a lipolízist 13, 14, mind az alap stimulált lipolízist, mind a stimulált PKA-t NCD vagy HFD (± CAP) egerekből izolált inguinalis zsírban méri 32 hetes etetés után, a megfelelő sémák igazolják a TRPV1 aktiváció szerepét a lipolízisben.

Ez a cikk hatékony módszert ismertet a bazális és stimulált lipolízis meghatározására. Bár rendelkezésre állnak más módszerek, amelyek a glicerin radioaktív izotópjait és a bőséges, nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát vagy gázkromatográfiát/tömegspektrometriát alkalmazzák a 15., 16. mérésekhez, ez a módszer közvetlenebb, egyszerűbb megközelítést kínál és költséghatékony technikát kínál a zsírszövetben a lipolízis meghatározására.

Előfizetés szükséges. Kérjük, ajánlja a JoVE-t könyvtárosának.

Jegyzőkönyv

Minden protokoll követi a Wyomingi Egyetem állatgondozási irányelveit.

1. Tartás és takarmány

MEGJEGYZÉS: Felnőtt vad típusú (C57BL/6) egereket (12–24 hét) a kutatási tenyészállomáson neveltek az Állatok gondozásával és felhasználásával foglalkozó intézményi bizottság (IACUC) által jóváhagyott protokollok szerint.