A tej frakcionálása és egyes összetevőinek elemzése - PDF ingyenes letöltés

1 Kölni Egyetem Zoológiai Intézet WS 2000/2001 Gyakorlatok a továbbképzéshez: Állatfiziológia B A tej frakcionálása és egyes összetevőinek vizsgálata

összetevőinek

2 1. Bevezetés A gyakorlat ezen a napján emlőstejjel foglalkoztunk, csak a tehéntejet vizsgáltuk. Mivel az emlőstej az egyedüli táplálékforrás az újszülöttek számára, feltételezhetö, hogy ez tartalmazza az adott faj összes nélkülözhetetlen tápanyagát. Így következtetéseket vonhatunk le e faj táplálkozási szükségleteiről. Ehhez a tejet komponenseire frakcionálják. Ezek fehérjék (különösen kazein), zsírok, szénhidrátok (különösen laktóz), ásványi anyagok (különösen kalcium) és vitaminok. 2. Anyag és módszerek 1.3 Ad: A tejmintát 2 ml tejjel és 2 ml vízzel készítettük. Egyébként a teszteket a forgatókönyvben leírtak szerint hajtották végre. 3. Eredmények 1. A kazeinek szétválasztása (izoelektromos pont) 1,0 Savcsapadék Ha a 4,6-os pH-érték eléri, megfigyelhető a kazein kicsapódása. 1.1 oltócsapadék: 1. táblázat: oltócsapadék sebessége ml oltási idő [s] 2/2 oldal

3 1.3. Oltócsapadék kontrollkísérlete Az alkalmazott kontrolltételek összetételét egy táblázatban mutatjuk be, hogy tisztázzuk: Annak kiderítése, hogy melyik ion válthatja ki a tej kicsapódását 2. táblázat: A kontrollkísérlet szakaszainak áttekintése Tételszám Reagens folyadék (főtt) EDTA CaCl MgCl FeCl NaCl Megfigyelt csapadék? nem igen igen nem nem nem nem nem + reagens hozzáadva, - a reagens nincs hozzáadva 3. oldal/3

4 2. A tejfehérje jellemzése: Az ismert aminosavkeverékek alapján jól kioszthattuk az egyes sávokat a TLC-ben. Eszerint a kazein a következő aminosavakat tartalmazza: His, Arg, Lys, Gly, Ser, Asp, Thr, Glu, Pro, Ala, Val, Met, Ile, Phe, Leu Az alanin sávja annyira gyenge volt, hogy itt egy végleges Nyilatkozatot nem lehet tenni. A valin és a metionin, valamint a fenilalanin és a leucin esetében a sávok átfedik egymást oly módon, hogy az egyértelmű azonosítás nem lehetséges. A zselatinmintából a következő AS-t tudtuk meghatározni: Thr, Hypro, Ala, Met/Val, Pro, Phe Ebben az esetben a Met és Val azonosítása a sávok alapján nem volt egyértelműen lehetséges. DC-nk szerint a zselatinban a mennyiség szempontjából a legfontosabb aminosav a treonin lenne. A szerkezeti képlet szerint azonban ezt a pozíciót a glicinhez kell rendelni. 4/4-es oldal

5 3. A tejzsír jellemzése 3.1 Jódszám A jódszámot a titrált Na 2 S 2 O 3 mennyiségéből a következő képlet alapján határoztuk meg: g jód (10 ml 0,1 n Na2 S 2O3) 0, jódszám = 100 g zsír g meghatározott zsír 3. táblázat: A jódszám meghatározása ml Na 2 S 2 O 3 jódszám [g jód/100 g zsír] mol jód/100 g zsírvaj 6,3 42,68 0,34 6,4 41,53 0,33 olívaolaj 1,4 99 .21 0,78 1,8 94,6 0,75 Lenmagolaj 1,7 191,5 1,51 1,3 200,73 1,58 Példa számításra: 42,68 g jód/100 g zsír (jódszám) = 0, 34 mol jód/100 g zsír 126,9 (molekulatömeg) 5/5. Oldal

6 3.2 Szappanosítási szám A szappanosítási számot a titrált HCl mennyiségéből a következő képlet segítségével határoztuk meg: 4. táblázat: Szappanosítási szám meghatározása ml HCl elszappanosítási szám [mg KOH/g zsír] Zsírsavak átlagos molekulatömege [g/mol] Vaj 3, 53 4 3 199,5 281,20 Olívaolaj 5,5 157,5 356, 71 tributirin, 49 mg KOH szappanosítási szám g zsír Példa számítás: (10 ml ml 0,5 N HCl) 28 = g meghatározott zsír ((10 ml 3,8 ml HCL) ) x 28)/0,8 g zsír = 217 mg KOH/g zsír 217 mg KOH/g zsír x 1/56100 mg/mol = 0,004 mol KOH/g zsír = X 1/X = 258,53 g/mol (a zsírsavak átlagos molekulatömege ) A kettős kötések átlagos száma Mivel a jód csak a kettős kötésekhez kapcsolódik, a jódszám közvetlenül felhasználható a kettős kötések számának meghatározására. Feltételezzük, hogy 1 mol I/100g megfelel 1 mol kettős kötésnek. 5. táblázat: A kettős kötések száma Jódszám [g jód/100 g zsír] mol jód/100 g zsír mol kettős kötés/100 g zsír Vaj 42,68 0,34 0,17 41,53 0,33 0,16 Olívaolaj 99,21 0,78 0, 39 94,6 0,75 0,37 Számítási példa: 6. oldal/6

7 42,68 g jód/100 g zsír = 21,34 g I 2/100 g zsír 21,34 g I 2/100 g zsír/126,9 (molekulatömeg) = 0,17 mol I 2/100 g zsír = 0, 17 mol kettős kötés/100g zsír 4. Kalcium- és foszfáttartalom Kalciumtartalom: 6. táblázat: A kalciumtartalom meghatározása Savas tejsavó Oltó savó ml EDTA 7,5 3,2 ml EDTA 7,8 3,4 ml EDTA 7,9 3,8 átlagérték 7,73 3, 47 mmol EDTA 0,08 0,03 Az EDTA mennyisége mmol-ban megegyezik a mmol/5 ml savó Ca 2+ -tartalmával. A mmol/l tej Ca 2+ tartalma kiszámítható a megfelelő eredmények átlagértékei alapján. Számítás: (mmol Ca 2+ x ml savó -1) x 2000, mivel 5 ml tejsavó 2,5 ml tejnek felel meg. Ezen eredmények alapján a kalciumionok mennyisége 100 ml tejben kiszámítható a kalcium molekulatömege (40,08 g/mol) felhasználásával. 7/7 oldal

8 7. táblázat: Átalakítás: kalcium tejsavóban tejsavó oltó savó mmol Ca2 +/l tejben 30,93 13,87 mg/100 ml tejben 123,98 55,58 Számítási példa: 0,08 mmol EDTA/5 x 2000 = 30,93 mmol Ca 2 +/l tej 30,93 mmol Ca 2+/l tej * 40,08 (molekulatömeg)/10 = 123,98 mg/100 ml tej Foszfáttartalom: A következő foszfát értékeket határoztuk meg a kalibrációs vonalon három savas válaszfal minta esetében: 8. táblázat: A foszfáttartalom meghatározása a kalibrációs vonallal Minta Extincti ml foszfát mg foszfát mg foszfát/l 1 0,1286 1,1 0,15 136,36 2 0,1448 1,25 0,17 136,0 3 0, 1386 1,2 0,16 133,34 Átváltási tényező:

8.55 4. megbeszélés 1.0 Savcsapadék 4,6 pH-értéknél megfigyelhető volt a kazein kicsapódása. Ennél a ph-nál a kazein eléri az izoelektromos pontját. A teljes molekula nettó töltése ennél a pH-nál tehát semleges, ezért vízben oldhatatlanná válik és kicsapódik. Az így meghatározott izoelektromos pont megfelel az irodalomban szereplő megfelelő pH-nak. 1.1 Oltócsapadék Oltócsapadék esetén a kazeincsapadék különböző módon vált ki. A labor biztosítja, hogy a kazein micellák megsemmisüljenek, és a kazein ily módon kicsapódjon (általában kolloidálisan oldott formában van jelen a tejben.) 1 ml lenoldat hozzáadása után a kazeint 210 másodperc múlva kicsapják. Egy második minta esetében 2 ml hozzáadása után 55 másodperc múlva kicsapódás következett be, ami megfelel a 8. oldal 8. oldalának

10 3.2 Szappanosítási szám Eredményeink szerint az olívaolaj tartalmazza a leghosszabb zsírsavakat, a tributirin csaknem kétszer rövidebb zsírsavakat, míg a vaj valamivel magasabb, mint a tributirin. 4. Kalcium- és foszfáttartalom Kalciumtartalom: Az oltós savó kalciumtartalma lényegesen alacsonyabb, mint a savó savóé. Ez egybeesik az 1.3. Kísérlet eredményeivel, ahol igazolni tudtuk a Ca ++ -ionok fogyasztását az oltóenzim aktivitása szempontjából. Ezzel szemben a savas kicsapáshoz nincs szükség kalciumra, ami azt jelenti, hogy a kalciumtartalom megközelítőleg megegyezik a kísérlet kezdetével. Foszfáttartalom: Enyhe eltéréssel tartalmunk van

136 mg foszfát/l tej képes kimutatni. A vizsgálatot a savas válaszfalon, vagyis a tej felülúszóján végeztük, amelyet savas kicsapással és centrifugálással frakcionáltunk. 10/10 oldal

11 Felhasznált irodalom:! # "% $ & ('*), + $ .- 0/21),), + $"% $: 9 KLM # NOQPSRTJUVXWZY [\ S] ^ _ # `ba cdcea [f gjfbhjijkml fon pq r% str5uv wbijwxwzy

wj J C ƒj ƒjˆ Š Œ Ž: J Ž% Z S Ž # š œ ž. oÿ J m J J š z 5 «ªB%. % ± 2j³µ%. ¹ 0ºCºJž »2¼½¾¼ ÁÀÂCà À ¾.Ç5ÀE» ÃÈ ÉËÊ5ÊÌÊÇƼ Í ÎCÏJÍoÐ ÑJÒmÓ ÍoÔ Õ: Ö% Øt 5ÙËÚ ÛšÑCÛxÛQÜ% ÝÞÁÛjßáàJàJâ 11. oldal 11-ből