A tlr2 aktivitás blokkolása csökkenti és stabilizálja az előrehaladott érelmeszesedést

aktivitás

  • Absztrakt
  • Cél:
  • A módszerek:
  • Eredmények:
  • Következtetés:
  • bevezetés
  • Anyagok és metódusok
  • Állatok és kísérleti tervezés
  • Szövetgyűjtés és feldolgozás
  • Biokémiai elemzés
  • Szövettani és immunhisztokémiai festés
  • Tesztelés in situ tól dUTP által közvetített nick-end címkézés által ToT
  • Western blotok
  • statisztikai elemzések
  • Eredmények
  • A TLR2 aktivitás blokkolása csökkenti és stabilizálja a brachiocephalic artéria ateroszklerotikus elváltozásait
  • A TLR2 blokád enyhíti az érelmeszesedéses artériák gyulladását
  • A TLR2 blokád csökkenti a makrofág apoptózist és a CHOP expressziót előrehaladott ateroszklerotikus elváltozásokban
  • A TLR2 részt vesz az ateroszklerózis felgyorsult képződésében, és szabályozza a CHOP expressziót és az apoptózist ApoE-hiányos egerekben, akik HC-étrendet kapnak.
  • Vita
  • Szerző hozzájárulás

Absztrakt

Cél:

Az autópályaszerű receptor 2 (TLR2) jelátvitel alapvető szerepet játszik az érelmeszesedés megindulásában. A tanulmány célja annak vizsgálata volt, hogy a TLR2 aktivitás blokkolásának lehet-e terápiás hatása az előrehaladott érelmeszesedésre.

A módszerek:

A normál étrenddel etetett negyven hetes apolipoprotein E-hiányos (ApoE -/-) egereket intravénásán injektálták neutralizáló TLR2 antitesttel vagy izotípushoz illesztett IgG-vel 18 hétig. Kettős kiütésű ApoE egereket - Tlr2 -/- vettünk pozitív kontrollként. A kezelések végén megmértük a plazma lipidszintjét, és elemeztük a plakk morfológiáját, a pro-gyulladásos citokinek expresszióját és az artériákban az apoptózist. A vizsgálat második részében a 6 hetes ApoE -/- és az ApoE -/- Tlr2 -/- egerek 12–24 héten át táplálták a koleszterinszint-csökkentő étrendet, a TLR2 expresszió és a markerek szintjét mutatták ki. az artériák. megvizsgálták.

Eredmények:

A TLR2 aktivitás blokkolása a TLR2 semlegesítő antitesttel vagy a Tlr2 gén inaktiválása nem változtatta meg a plazma lipidszintjét az ApoE -/- egerekben. A genetikai és farmakológiai manipulációk azonban drámai módon csökkentették a plakk méretét és az érszűkületet, valamint a plakk stabilitását a brachiocephalic artériákban. A TLR2 antagonizmus védőhatásai az IL-6 és TNF-α gyulladásgátló citokinek expressziójának elnyomásával és az NF-KB és Stat3 transzkripciós faktorok inaktiválásával társultak. Ezenkívül a TLR2 aktivitás blokkolása gyengítette a brachiocephalicus artériák stressz okozta makrofág apoptózisát, ami elősegítheti a nekrotikus magok feloldódását előrehaladott ateroszklerózisban. Ezenkívül a magas koleszterinszintű étrend markánsabban felgyorsítja az érelmeszesedés kialakulását és növeli a pro-apoptotikus fehérje CHOP és az apoptózis expresszióját ApoE -/- egerekben az ApoE -/- Tlr2 - egerekhez képest. - .

Következtetés:

A TLR2 aktivitásának farmakológiai vagy genetikai blokádja csökkenti és stabilizálja az előrehaladott érelmeszesedést az ApoE -/- egerekben. Így a TLR2 jelátvitel megcélzása ígéretes terápiás stratégia lehet az előrehaladott érelmeszesedés ellen.

bevezetés

Az érelmeszesedés a szív- és érrendszeri betegségek gyakori oka. A szív- és érrendszeri betegségek a halálozás legfőbb okai, és világszerte egyre nagyobb veszélyt jelentenek az emberi egészségre 1. Az epidemiológiai és kísérleti vizsgálatok megállapították, hogy az atherosclerosis minden szakaszában a gyulladás domináns szerepet játszik, a korai stabil ateroszklerotikus plakkok kialakulásától a fejlett plakkokig, amelyek hajlamosak a 2, 3, 4, 5 felszakadásra. A közelmúltban számos tanulmány vizsgálta a farmakológiai beavatkozások hatását a fejlett plakkok stabilitására, mivel az instabil elváltozások megbomlása hozzájárul a 4, 6, 7 akut koronária szindrómához. Az instabil plakkokat nagy nekrotikus sejtek jellemzik, amelyek vékony rostos kupakkal ellátott kapszulákba vannak töltve, magas szintű gyulladásgátló mediátorok és mátrix proteázok, valamint apoptózis. Az instabil plakkok kialakulása összefügg a veleszületett és adaptív immunrendszer részvételével.

Az autópálya-szerű receptorok (TLR) a mintázatfelismerő receptorok családja, amelyek kulcsszerepet játszanak a veleszületett immunitásban és gyulladásos reakciókat indítanak el. Ezeknek a receptoroknak a ligálása indítja el a nukleáris faktor-KB (NF-KB) aktiválódását, ami a gyulladásos gének 8, 9 széles körének expresszióját eredményezi. A jellemzett TLR-ek közül a TLR2 egyedülálló, mivel képes TLR1-gyel vagy TLR6-tal heterodimerizálni, ami viszonylag széles ligandusspecifitást eredményez, amely magában foglalja mind az endogén, mind az exogén 10, 11 ligandumokat. Megjegyzendő, hogy az összes potenciális endogén TLR2 agonista, beleértve a biglikánt, a nagy mobilitású kromoszóma-fehérjét (HMGB1) és az oxidált lipoprotein-komponenseket, a 12, 13, 14 érelmeszesedéses elváltozásokban található meg. Ezenkívül a TLR2 jelátviteli út az endoplazmatikus retikulum (ER) stresszválaszával társul. Az ER stressz növelheti a TLR2 expresszióját in vitro és in vivo, a TLR2 pedig hozzájárul a 15 lipid által kiváltott ER stressz alatti makrofágok apoptózisához. Így a TLR2 potenciális célpont lehet az érelmeszesedés kezelésében alkalmazott terápiás beavatkozások során.

Anyagok és metódusok

Állatok és kísérleti tervezés

Az ApoE -/- Tlr2 -/- egereket ApoE -/- egerek (C57BL/6 háttér, Jackson Laboratory) és Tlr2 -/- egerek (C57BL/6 háttér, Jackson Laboratory) heterozigóta keresztezéseiből állítottuk elő. A homozigóta kettős knockout vagy ApoE egyszeres knockout egerek genotípusait PCR-rel igazoltuk, a korábban leírtak szerint 18. Valamennyi állatot normál páratartalom, szobahőmérséklet és fekete fény ciklusok között helyezték el, a vízhez és az ételhez ad libitum hozzáféréssel. A vizsgálatokat az állatok biomedicina kutatásának etikai védelmével és kezelésével foglalkozó intézményi bizottság (Peking, Kína) által meghatározott elvekkel összhangban végezték.

A szövetek összegyűjtése és feldolgozása

Miután az egerek 4 órán át böjtöltek, a retro-orbitális vénás plexusból vért vettünk lipidmérés céljából. Ezután az egereket 50 mg/kg ip-pentobarbitállal altattuk, és fiziológiás nyomáson foszfáttal pufferolt sóoldattal infundáltuk a bal szívkamrába. Az aortákat gyorsan kivágtuk, azonnal megfagyasztottuk az aortaívtől a csípő kétágúságáig, és a fehérje elemzése előtt -80 ° C-on tartottuk. Minden állat teljes brachiocephalikus artériáját 4% paraformaldehidben rögzítettük 24 órán át 4 ° C-on, paraffinba ágyazva és sorozatosan (5 µm vastagságban) vágva.