A vér által közvetített fagociták internalizálják az urát mikroaggregátumokat és megakadályozzák a netózist
Témák
Absztrakt
A hiperurikémiás betegek szinoviális folyadékától vagy vizeletétől eltérően az nsMSU jelenlétét soha nem írták le a vérben. Az nsMSU jelenléte a vérben kedvezőtlen következményekkel járhat a gazda számára, mivel az nsMSU intravaszkuláris képződése és az ebből következő NETosis kiváltása életveszélyes érelmeszesedés, fokozott érpermeabilitás és trombózis kockázatával jár. .
Jelen tanulmányban a húgysav hiperurikémiás vérben való kristályosodását vizsgáltuk. Kiderítettünk egy új mechanizmust, amellyel a vér által hordozott fagociták megtisztítják az eredetileg hiperurikémiás vérben képződött kis UMA-kat, mielőtt ezek valóban nsMSU-kká válnának. Ha ez a mechanizmus kudarcot vall, az nsMSU és a NET tophusszerű aggregátumokat képez, amelyek nagy obstruktív potenciállal bírnak a DNáz I ellen.
Eredmények
A húgysav ex vivo kristályosodik a hiperurikémiás szérumban és a teljes vérben
( nál nél ) Kis kerek urát mikroaggregátumok (UMA) alakultak ki a hiperurikémiás szérum in vitro inkubálása után. Reprezentatív képek láthatók. ( ) A húgysav kristályosodása elsősorban hűvösebb hőmérsékleten történt, és 6 óra hiperurémiás szérum inkubálás után telített. Az UMA mennyiségét polarizált fénymikroszkóppal értékeltük, feljegyeztük az UMA látómezőnkénti számát (FOV; 200-szoros nagyítás). ( vs. ) A hiperurikémiás teljes vér 6 órás ex vivo inkubálása megmutatta az UMA intracelluláris jelenlétét a vér által hordozott fagocitákban (fehér nyilak) a vérkenetekben. A vörös nyilak az eritrocitákat képviselik. Két hiperurikémiás köszvényes beteg reprezentatív képét mutatják be. Mérlegsorok: 20 μm (betétek: 5 μm).
Teljes méretű kép
A vérrel terjedő fagociták gyorsan internalizálják az AMU-t
A fetuinek hordozófehérjék, amelyek megkötik és feloldják a kalcium-foszfát 18 magkristályait. Ezért megvizsgáltuk, hogy a fetuinok is megkönnyítik-e az AMU fagocitózisát. Az AMU fagocitózisának 40% -os növekedését figyeltük meg a neutrofil sejtekben, amikor az aktív autológ szérum 10% -át 1 mg/ml fetuinnal vagy annak deszializált formájával, asialofetuinnal egészítették ki (2e. Ábra). Érdekes módon az autológ 10% -os hővel inaktivált szérum használata, sem az asialofetuin, sem a fetuin nem könnyítette meg az AMU fagocitózisát a neutrofilek által. Adataink együttvéve feltárják a fetuinek és a komplement fehérjék közötti együttműködés mechanizmusát, hogy megkönnyítsék az AMU neutrofil sejtek fagocitózisát.
A makrofágok felismerik és megszüntetik az UMA-val feltöltött fagocitákat
( nál nél ) Fagociták hiányában az nsMSU a hyperurémiás szérumban fejlődött ki. ( ) A neutrofilek óriási mennyiségű UMA és nsMSU (bal oldali panelek) általi elfogyasztása a H3 hiszton mérsékelt és súlyos hipercitrullinációját okozta tenyésztett granulocitákban (jobb oldali panelek, fehér nyilak). ( vs. ) A hiszton H3 citrullináció (bal oldali panel) és a DNS-felszabadulás (középső panel) elsődlegesen az nsMSU hatására következett be, míg a ROS termelés mind UMA-ra, mind nsMSU-ra (jobb panel) szignifikánsan magasabb volt. Méretarányok: 30 μm (betétek: 10 μm). *** o
(1) Az intravénásan injektált UMA-t (1 mg) a máj szinuszaiban vagy a lép peremén található egerekben eliminálják (a sárga nyilak az UMA-t jelzik), míg a többi szerv nem tartalmazott (szív, vese) ) nagyon kevéssé (tüdő). ) UMA. ( ) A szervenként számított UMA mennyiségét úgy számszerűsítettük, hogy legalább négy különböző látómezőt (FOV) 200-szoros nagyítással elemeztünk az UMA jelenlétére. Méretarány: 100 μm. ** p # p
Más 36, 37 vizsgálattal ellentétben nem figyeltünk meg kristály által indukált NET-ek citotoxikus hatását az endothel sejtekre. Ehelyett a leukociták jelenléte megakadályozta az AMU és az nsMSU gyulladáscsökkentő hatását az endotheliumra. Ez a folyamat magában foglalta a kristályok befogását kiterjedt aggregált TNE-k által. Így, bár általánosságban úgy gondolják, hogy a cMSU-k gyulladásgátló módon hatnak a toll típusú receptorok ligálásával és a 38, 39, 40 jelátvitelű NF KB utólagos aktiválásával, a cMSU gyulladáscsökkentő hatásai csökkennek, ha ezek a NET-ekbe szorulnak. Meg kell jegyezni, hogy azt tapasztaltuk, hogy a DNáz I csak az UMA-t tartalmazó összesített NET-eket bontja szét és oldja fel, míg az nsMSU-ból állóak inkább ellenállnak a DNáz I aktivitásának.
Összességében olyan modellt nyújtunk, amelyben a komplement fehérjék és a fetuinok megkönnyítik a vér által hordozott fagociták és a hiperurémiás vérben spontán kialakuló rezidens AMU makrofágok kooperatív eltávolítását (8. ábra). Ennek a clearance-mechanizmusnak a relevanciája tükröződik az nsMSU azon képességében, hogy kiváltja a NETosis-t, amelynek káros hatásai lehetnek, ha az érrendszerben fordul elő. Hiperurikémiában szenvedő egészséges egyéneknél az AMU felszabadul a keringésből a status nascendi-ban. Ez megakadályozza az új kristályok növekedését és a potenciálisan káros nsMSU képződését. Mivel az AMU clearance-e jelentősen romlik a komplement faktorok vagy a fetuin hiányában, krónikus veseelégtelenségben és/vagy alacsony plazmafehérje-szintben (41, 42, 43, 44, 45) potenciálisan veszélyben lehet a NET kialakulása - indukált érgyulladás.