Embrionált csirketojás - biológia
Milyen meleg túl meleg az élethez az óceán feneke mélyén?
Antibiotikumok baktériumoktól
Sejtvándorlás: egy ismert fehérje újonnan felfedezett funkciója
Molekuláris iránytű a sejtek igazításához
Mi teszi a levelek öregedését ősszel
A keselyű gyöngytyúk demokráciája
Ekembo környezete: Az emberek nyílt tájakon is éltek
| Genetika | Mezőgazdaság, erdészet és állattenyésztés
A búzafajtát vad füvek keresztezésével hozták létre
Milyen meleg túl meleg az élethez az óceán feneke mélyén?
Embrionált csirketojás
Az embrióztatott csirketojás technikája
Kizárólag fertőzően ellenőrzött csirkepopulációkból származó csirketojásokat használnak a vírusok szaporítására, mivel az embriót nem szabad előzetesen megfertőzni a csirkebetegségeket okozó természetes kórokozókkal. Ezeket a tojásokat is nevezik meghatározott kórokozóktól mentes (SPF tojás). Megfelelő méretű embrió elérése érdekében a megtermékenyített tyúktojásokat további inkubátorokban inkubáljuk 5–14 napig 38 ° C-on és 60% relatív páratartalom mellett, a később választott fertőzési technikától függően. Ezekben az inkubátorokban van egy esztergáló eszköz is, amely rendszeresen mozgatja a petéket. Speciális fluoreszcens szűrővel az embrió fejlődése megfigyelhető a peték eltávolítása után („puszta”), az elhalt vagy megtermékenyített peték kiválogatása után.
A mellékszervek beoltása
Általában nem magát az embriót, hanem annak mellék szerveit oltják be. A vírusfajtól vagy problémától (szaporodás vagy vírusdetektálás) függően ezek a sárgás tasak, az amnion, az allantois vagy a chorion allantoic membrán (CAM). Mivel ezek az optimális oltási méretet és a vírusokra való fogékonyságot mutatják az embrionális fejlődés különböző időpontjaiban, az alkalmazott peték inkubációs idejének hossza is eltérő. A sárgás tasak fertőzésének legjobb ideje a megtermékenyítés után 5-7 nap, az amnion és az allantois esetében 10 nap, a CAM esetében 11-12 nap. Ha az oltás túl korán megy végbe, a vakbél szerve nem elég nagy, ha túl későn megy végbe, az immunvédelem egyre inkább gátló hatása (ideértve az immunoglobulin Y képződését) vagy a szervek csökkenő érzékenysége megakadályozhatja a sikeres fertőzést.
Az oltást steril körülmények között végezzük, hogy elkerüljük a baktériumok szennyeződését. Fertőtlenítés után a tojáshéjat kis lyukasztással kinyitják. A CAM beoltásakor ez a tojás azon oldalán történik, amelyen az embrió fekszik; az összes többi függelék szervben kinyílik a tompa tojásoszlop. Körülbelül 0,1–0,2 ml vírustartalmú folyadékot (inokulum) injektálunk a megfelelő szerkezetbe kanül segítségével. Ezután a tálat ragasztóval vagy viaszgal lezárják. Egy újabb inkubációs nap után a petéket világítóberendezéssel ellenőrzik, és az elhalt embriókat oltási kárként szétválogatják. További 1–6 nap elteltével a replikált vírusok megszerezhetők az allantoikus vagy magzatvízből (tojásfehérje) vagy a CAM és a sárgás tasak membránjából. Ezt megelőzően a petesejtet egy éjszakán át 4 ° C-on tárolják, így az embrió elpusztul és az erek összehúzódnak. További tisztítási lépéseket, például szűrést vagy ultracentrifugálást követnek általában annak érdekében, hogy a lehető legtisztább víruskészítményeket kapják.
Az embrió fejlődésének értékelése
Az oltott petéket rendszeresen, általában naponta röntgenezik, és felmérik az embrió fejlődési állapotát. Ha kizárjuk a bakteriális szennyeződést és az oltási károsodást, akkor az embrió pusztulása vírusreplikációt jelezhet, ez megfigyelhető például a sárgás tasak herpesz szimplex vírusokkal történő beoltása után. A vírus replikációjának egyéb makroszkóposan látható jelei az embrióban megnövekedett érrendszeri jelek, a gyulladás jelei, petechialis vérzés vagy malformációk. Himlővírus, herpes simplex vírus és Rous sarcoma vírus oltása esetén sötét, foltos változások lépnek fel a CAM-on, az ún. "Pocks". Ezek annyira jellemzőek, hogy vírus észlelésekor diagnózis felállítására használhatók fel. A legtöbb esetben különféle további vizsgálatok követik a kórokozó azonosítását, például elektronmikroszkópos vizsgálat, hemagglutinációs teszt vagy a víruskomponensek (antigének és nukleinsav) közvetlen kimutatása a pontos tipizálás érdekében.
Fontosság a vírusdiagnosztikában
Az embrionált tyúktojás jelentősége a vírusizolációban és a vírusdiagnosztikában korlátozott, emberi vírusok esetében ez most az influenza vírusok elkülönítésére és tipizálására korlátozódik. Ismeretlen, új kórokozók izolálásában a molekuláris módszerek, a sejttenyésztés és az elektronmikroszkópia mellett embrionált tyúktojásokat is alkalmaznak. Az állatgyógyászatban számos kórokozót termesztenek a tojástenyésztésben, köztük a himlővírusok, ortomyxovírusok, herpeszvírusok, togavírusok és különféle madárvírusok képviselői. Az alábbi táblázat áttekintést nyújt a legfontosabb kórokozókról és azok viselkedéséről az embrióba helyezett tyúktojásokban. Egyes vírusok csak akkor szaporíthatók sikeresen és elfogadható hozammal a tyúktojásban, ha a vad típust több szakaszon (vak járatokon) keresztül alkalmazzák a csirke tojásához.
Vakcinatermelés az embriózott tojástojásban
Az embrionált tyúktojásokban a vírusreplikáció nagy előnye a magas vírustermés. Ezt már a hatvanas években használták különféle vakcinák előállításához, például elegendő nyersanyag megszerzéséhez a kanyaróvírus és a különböző influenzavírusok elleni elhalt vakcinákhoz (osztott vakcinák). Különösen ez utóbbival a sejttenyészetekben a szaporodás még nem érte el a kellően magas víruskoncentrációt, így az embriózott tyúktojás a mai napig meghatározza az influenza elleni vakcinák ipari termelését. Ennek a módszernek a problémája azonban a tojásanyag időigényes tisztítása, amely mindig nyomokat hagy a tojásfehérjékből, és ezért csirkefehérje allergia esetén nem adható be.