Értekezés a doktori fokozat megszerzéséről doktor rerum naturalium (Dr

A daganatok biológiai és funkcionális jellemzése a gyomor-bél traktusban a genom egészére kiterjedő génexpressziós elemzéssel és a lehetséges tumor markerek azonosításával Értekezés a doktori fokozat megszerzéséért doktor rerum naturalium (Dr. rer. Nat.) Benyújtva a jenai Friedrich Schiller Egyetem Biológiai Gyógyszerészeti Karának tanácsához Nicole Posorski diplomás biológus, 1981. november 24-én született Suhl-ban

fokozat

A világ tele van szenvedéssel és ugyanúgy tele van a szenvedések legyőzésével. (Helen Keller)

Lektor: A szóbeli vizsga 1. 2. 3. napja.

2 Bevezetés 3 2 Bevezetés A legintenzívebb kutatási erőfeszítések és az átfogó rákkonstrukcióban szerzett molekuláris-biológiai betekintés ellenére a malignus sejtdegeneráció és az ebből eredő rákos megbetegedések továbbra is a második leggyakoribb halálok a szív- és érrendszeri betegségek után (48%) világszerte, 21% -kal. 2008-ban világszerte 12,7 millió embernél diagnosztizáltak rákot, közülük 7,2 millióan haltak meg. 2030-ra 21,4 millió új esetet prognosztizálnak, 13,2 millió halálozással. 1. ábra: A rákos halálozás 20 leggyakoribb oka 2008-ban. Http://www.dkfz.de/de/krebsatlas/ A rosszindulatú daganat kialakulása multifaktoriális, összetett folyamat, amely sok egymást követő egyéni lépést igényel. Az elsőbbség általában a proto-onkogén aktiválása egy szomatikus sejtben, amelyet külső hatások okoznak, például vegyi anyagok (benzol, azbeszt, akrilamid, dohány stb.), Sugárzás (radioaktív sugárzás, röntgen, UV sugárzás) vagy vírusok (papilloma- Vírusok). További génmutációk révén módosított fehérjék találhatók a megindított sejtben

3 A munka célkitűzései 17 1. Kilenc fehérje (biomarker) kvantitatív meghatározása a betegek szérumában lehetővé kell tennie egy meglévő colorectalis carcinoma és vastagbél-polipok (adenomák) mielőbbi diagnosztizálását. Ehhez a vizsgálathoz (II.1.) Vastagbélrákos betegek szérumait vizsgálták. III. A tumor előrehaladásában döntő szerepet játszó fehérjék funkcionális jellemzése. 1. In vitro modell létrehozása neuroendokrin differenciált (kolorektális) sejtvonalakhoz. 2. Az apoptózist gátló survivin fehérjét kódoló BIRC5 gént ki kell üríteni a neuroendokrin és kolorektális sejtvonalakban, valamint az emberi őssejtekben, ezáltal le kell állítani a sejtproliferációt. 3. A vastagbélrák kilenc szérummarkerének koncentrációbeli különbségeit különböző vastagbélsejteken kell vizsgálni. Ezekhez a vizsgálatokhoz (III.1 - III.3) a BON, LCC-18, MIP-101, QGP1, Caco-2, Colo-94H és SW-1116 sejtvonalakat használtuk.

4 Anyag és módszerek 40 4.12 Felhasznált technikai eszközök 9. táblázat: Használt technikai eszközök Eszközök Autokláv blokk termosztát CCD videokamera Elektroforézis kamra Evidence Investigator Fluoreszcens mikroszkóp (G2565CA) Szkenner fagyasztó hibridizációs kemence Cryostat CM 1850 Mikrohullámú készülék Nano Drop (ND-1000 Spektrofotométer) PCR gép (Thermo Cycler) fázisú kontrasztmikroszkóp fotométer ultratiszta vízszűrő rendszer rázógép (Rotamix120) steril pad szoftver: Feature Extraction vs. 10.5.1.1 CGH Analytics v 3.5.14 Gene Spring GX v. 10.0.2 ISIS Vortexer Vízfürdők Fűtőszekrény (sütő) Centrifugák Gyártó KSG Grant Zeiss Hoefer Randox Axioplan 2 (Zeiss, Jena) Agilent Heraeus Agilent Leica Bosch Meqlab MJ Research Zeiss Uvicon 930 (Kontron Instruments) Milipore; Sereal Heidolph Heraeus Agilent Agilent Agilent Metasystems IKA Medingen/GFL Bachofer Benchtop Centrifuga 5415 D (Eppendorf), Microcentrifuga MiniSpin (Eppendorf) Universal 30 RF (Hettich) Megafuge Rotina 35 R (Heidolph)

6mar [cp10]. Az SW-1116 esetében 4 MPP-t lehetett értékelni, amely hipotriploid kariotípust mutatott. A négy kariotípust kariotípussá (összetett kariotípus = cp) egyesítettük az alábbiak szerint: 52