In vitro tesztek a furazolidon, hostaciklin, klóramfenikol és
Dokumentumok
Szövetségi Kisállattenyésztési Kutatóintézetből, Celle
In vitro kísérletek a furazolidon, hostacy klin, kloramfenikol hatásain
és dihidrostreptomycin a Salmonella pullorumon
1954-ben COSGKOVE; Morgók és személyzet; HARWOOD és STUNZ, valamint SMITH rámutattak a furazolidon alkalmasságára a baromfi Salmonella pullorurn fertőzésének kezelésére. SMITH (1954b), WILSON (1956), TITKEMEYER és SCHMITTLE (1957), BELDINC és MAYER (1958) összehasonlító vizsgálatokban azt találták, hogy a furazolidon a kezelés hatását tekintve felülmúlja a korábban alkalmazott szulfonamidokat és antibiotikumokat. De még ezzel a készítménnyel sem lehet teljesen kizárni a látens csírahordozókat a klinikailag egészséges állatok közül, amint azt számos tanulmány bizonyítja: [SMITH (1954b és 1955); GORDON és TUCKER (1955); KIKÖTŐ és ELADÓ (1955); LUCAS (1955); WILSON (1955 és 1956); GYLSTORPF és DORN (1956); HARBOR (1956); SMYSER és VAN ROCKEL (1957); AYACARDI (1958); BELDING és MAYER (1958); HENDERSON és mtsai (1958) l.
Ezek az állítások elsősorban állatkísérleteken alapulnak. In vitro kísérletek a furazolidon sóoldattal való hatására. a pullorum csírákat csak korlátozott mértékben alkalmazták. Az érintett szerzők elsősorban az ígéretes terápiához szükséges dózisok meghatározásával foglalkoztak [YUKCHENCO és YURCHENCO (1953); SMITH (1954 a és b); ROGERS és munkatársak (1956) l. Ezenkívül a következő kérdések érdekelnek, amelyek tisztázása segíthet felmérni a készítmény terápiára való alkalmasságát:
ÉN. Várható-e már a gyakorlatban rezisztens baktériumtörzs? 2. A terápiás adagolás során elengedhetetlenek
A különböző törzsek közötti érzékenységbeli különbségek észlelése?
3. Van-e bakteriosztatikus vagy baktericid hatással?
A furazolidon, a hostaciklin stb. Hatása a Salmonella pullorum 95-re
4. Mennyire lehet provokálni a gyógyszerrezisztenciát a pullorum csírákban, és ez visszafordítható vagy tartós?
5. Hosszú távú, alacsony dózisú készítményekkel stimulálható a csíra növekedése?
6. A rezisztenssé vált csírák elvesztik-e érzékenységüket más készítményekkel szemben is (keresztrezisztencia)? Szélesebb körű in vitro kísérletek adnak választ erre
Kérdések találhatók. A furazolidon mellett a tetraciklin csoport (hostaciklin), valamint a kloramfenikol és a sztreptomicin képviselőjét is bevontuk vizsgálatainkba.
Összesen 24 gyűjtőtörzset használtunk fel, amelyeket 1955 és 1957 között különféle eredetű beadványokból izoláltak és Salmonella pullorurn néven azonosítottak. A törzset úgy kell érteni, mint egy egyedileg tárolt telepről származó genetikailag egyenletes csírát (egyetlen törzs esetében két különálló telepet feltételeztünk, amelyeket ezután a és b névvel jelölünk).
Minden kísérletet, amelyben a készítmény hatékony koncentrációját meg kellett határozni, a csőhígítás segítségével hajtottuk végre, amelyet kettő hatványában alkalmaztunk. A megadott értékek 1 ml-re vonatkoznak, és a következő dózisokon alapultak, amelyeket soha nem használtak 24 óránál régebben: 1. 0,01 g furazolidon 4 ml dimetil-formamiddal ') oldószerként
(Furoxon Boehringer, Mannheim) 96 ml tápoldatban = 100 ilml 2. Tetraciklin 0, olaj g
(Hostacyclin Hoechst) 100 ml tápoldatban = 100 ylml 3. Klóramfenikol O, OI g
(Boehringer, Mannheim) 100 ml tápoldatban = 100 μg/ml 4. Dihidrostreptomicin-szulfát 0,1 g
(Bayer, Leverkusen) 100 ml tápoldatban = 1000 y/ml Az alkalmazott tápoldat a következőkből állt:
1,8 g Vitam Bakt, 1,0 g szőlőcukor, 0,5 g pepton, 0,3 g NaCl, 2 g, sec. Nátrium-foszfát, 0,1 ml bróm-timolkék (1,6% alkohol).
színjelzőként 100 ml desztillált vízben. A pH-t NaOH-val 7,2-re állítottuk be.
Az egyes csövekben lévő csírákat beoltottuk egy anyaggal beoltott 6 órás táptalaj tenyészetek 1 ml-es pipettájának cseppjével. A csíranövekedést vagy a csíra gátlását 24 órás hámozás után leolvastuk a színváltozásról. Az a ritkulás, amelynél a három párhuzamos hígítási sorban nem történt színváltozás, a gátlási értéknek tekinthető.
Az összes hígításból kenetet készítettünk endo- és agar-talajra annak érdekében, hogy egyszer és egyszer ellenőrizzük a tenyészetek tisztaságát.
I) A dimetil-formamid 1: 100 hígításig gátolja a baktériumok szaporodását. A jelen vizsgálati elrendezésben ez a koncentráció 2-3 (0,5 O/o dimetil-formamid) alá esik.
mások képesek eldönteni, hogy a készítmény baktericid vagy csak bakteriosztatikus hatása van-e és milyen koncentrációban.
Három törzset (11., 12. és az újonnan izolált 99. törzs) használtunk az ellenállás kiváltására. A baktériumokat a készítmény koncentrációjában tenyésztették, amely csak lehetővé tette a baktériumok szaporodását, és magasabb koncentrációban. Ha a csírák a 24 órás passzálás alatt jól növekedtek, akkor a megfelelő tenyésztéshez megfelelő alacsonyabb hígításokat használtunk. Ezekhez a kísérletekhez a furazolidont csak 0,4 ml dimetil-formamidban engedték feloldani. A készítmény hiányos oldatát el kell fogadni (lásd F u h o t e 1).
A rezisztenssé vált baktériumokkal felállított provokációs passzusok növekedési kontrolljai megmutatták, hogy előfordul-e szokás a növekedés stimulálása szempontjából.
30 provokációs passzus után (dihidrostreptomicin 8 passzázs) a csírákat 24 óránként egyszerű tápoldatban tápláltuk további 30 passzálás után, és a csőhígítási tesztben időről időre teszteltük a készítmény iránti érzékenységüket.
Az egyik készítményre érzéketlenné vált csírákat keresztrezisztenciára vizsgáltuk a többi készítményrel.
Az 1. táblázat mutatja a furazolidon, a hostaciklin, a klóramfenikol és a dihidrostreptomicin gátló koncentrációit, amelyeket in vitro határoztak meg 24 vizsgált lazacra. pullorurn törzsek jelezték. A táblázat bemutatja azokat a koncentrációkat is, amelyek mellett a készítményeknek baktericid hatása volt.
Elsődlegesen Salm törzsek. pullorum semmiképpen sem volt megtalálható. Ezzel szemben különbségek voltak az érzékenységben az egyes törzsek között a hostaciklin, a kloramfenikol és a sztreptomicin, a 3 hígítási szint és a 4 furazolidon, 4 hígítási szint között. Tápegység/ml tápközeg tömegegységben kifejezve a furazolidon iránti érzékenység 6,25 és 0,39 év között változott; hostaciklinnel és klóramfenikollal 0,78 és 0,095 év között és dihidrosztreptomicinnel 250 és 3 között 1,25 év között.
A gátló értékek a hostaciklinnek voltak a legjobbak - szorosan követte a kloramfenikol. A furazolidonnak átlagosan csaknem tízszeresét, a dihidrostreptomicinnek pedig 300-szorosát kellett adagolni annak érdekében, hogy ugyanolyan gátló hatást érhessen el in vitro. De még egy 100 ylml (24 = a legmagasabb tesztkoncentráció) hostaciklin dózis is csak bakteriosztázist eredményezett; mert a szaporodásra képes baktériumok könnyen kimutathatók a ritkításból, amelyben a csíra növekedését nem jelezte a színváltozás. A klóramfenikol esetében 5 értéke 0 és 2 5;
/ d a baktericid hatás meghatározásához. A furazolidonnak és a sztreptomicinnek baktericid hatása volt (furazolidon 12,5 7; dihidrostreptomycin 250 7), még akkor is, ha a koncentrációt kétszer vagy négyszer növelték, a csírák gátlásához szükséges dózisokkal mérve. A kloramfenikol és különösen a hostaciklin esetében a gátló koncentrációk és a baktericid tulajdonságokkal rendelkező koncentrációk közötti széles tartomány már a hígítási sor értékelésekor is nyilvánvaló volt a színváltozás többé-kevésbé áramló átmeneteivel, míg a dihidrostreptomicin és Furazolidon élesen meghúzva.
Furazolidon, hostaciklin stb. Kitettsége. 3uf Salmonella pullorum 97
T a b e l l e I H e m m w e r t e u n d -
s t r e p t o m y c i n g e n i i b e r 2 4 S a l m. p u l l o r u m - S t a r n m e n
Furazolidon Hostacyclin Chlor- Dihydro-amphenicol streptomycin l) Wacfis- viasz figyelmeztető viasz-
gátolják. gátolják. gátolják. hemrng. turn- baktericid turn- baktericid tum- baktericid tum- bakterizi,