MEA - Petri-csészék öntése - MycoGenetics

A mikroorganizmusok és gombák tenyésztésének bevált módszere a tenyészet Petri-csészékben félszilárd, steril agar táptalajon. Az agar-agar poliszacharid, vörös hínárból készül. Az agar képes megszilárdulni/gélesíteni a vizet. 3 dimenziós hálózat alakul ki, amely optimálisan elősegíti az egészséges micélium növekedését.

Utasítások malátakivonat agar kultúrához

2 x 1 literes üveg tejesüveg fedéllel (megtisztítva)
1 liter desztillált víz
25 g agar-agar
20 g malátakivonat (por)
Opcionális: 2 g élesztő kivonat + 1 g pepton
Alufólia
Kukta
HEPA szűrő
40 x PS Petri-csésze (steril)
Parafilm
Sterilium/Antifect fertőtlenítő
Eldobható kesztyű
Fogvédő

Készítse elő a MEA-t

Először tegye az összes hozzávalót egy fazékba, és melegítse a keveréket zárt fedéllel, és időnként keverje, amíg az összes komponens fel nem oldódik a vízben. Ezután egyenletesen ossza fel az oldatot mindkét tejpalack között. Mivel a malátakivonat forraláskor nagyon habosodhat, az üvegek legfeljebb félig lehetnek tele.

Most vegyen egy bőséges darab alumíniumfóliát - vékony fóliával dupla réteget kell venni -, és helyezze ezt a nyitott tejpalackra. Most tegye kissé a fedelet, és kissé fordítsa el, hogy a nyomás kiegyenlítődjön főzés közben, de a fedél még mindig nem esik le az üveg nyakáról. Most vegyen még egy nagy darab alumíniumfóliát, és tegye a tejesüveg fedele fölé. Nyomja le a fóliát és erősen az üveghez. Győződjön meg róla, hogy a fedél közelében nincsenek-e repedések. Ha szükséges, vegyen be egy újabb réteget alumíniumfóliából.

A MEA táptalaj most sterilizálható 20 perc 121 ° C-on az autoklávban.

Sterilizálja a MEA-t

Ehhez töltse fel az edényt vízzel úgy, hogy az üvegek körülbelül 3-5 cm-re legyenek a vízben. Használja a fazék rostabetétjét is, hogy az üvegek ne álljanak közvetlenül a padlón. Ellenkező esetben fennáll annak a veszélye, hogy az üveg eltörik, vagy a tápközegben található malátakivonat kicsapódik (összeomlik) a túl magas hőmérséklet miatt.

Amikor az autokláv elérte üzemi hőmérsékletét, megkezdődik a 20 perces sterilizálási idő, majd hagyja az edényt kissé lehűlni. Addig előkészítheti munkahelyét a HEPA szűrő előtt.

Készítse elő a HEPA szűrő munkahelyét

Indítsa el a HEPA szűrőt legalább 15 perccel a munka megkezdése előtt. Alaposan tisztítsa meg a munkafelületet felületfertőtlenítővel, és készítse elő a Petri-csészéket. A MEA-val ellátott tejpalackok, amelyek még nem hűltek le, a szűrő működése előtt a legbiztonságosabbak lehűlni. Amint a MEA oldat eléri a kb. 50 ° C-ot, megtöltheti vele a Petri-csészéket.

Öntsön és lezárjon Petri-csészéket

Ehhez használjon eldobható kesztyűt és arcmaszkot. Ezután fertőtlenítőszerrel tisztítsa meg a kezét. Szórja be vele a Petri-csészék csomagolását is. Nedvesítse meg a tejpalack és az alumínium fólia felületét is fertőtlenítőszerrel. Most távolítsa el a fóliát, amennyire csak lehetséges, hogy levehesse a fedelet. Tiszta/steril késsel nyissa ki a Petri-csészék csomagolását, és vegyen ki egyszerre annyi Petri-edényt, amennyit egy kézzel felülről egymásra rakhat. Helyezze az edényeket egymásra, a nyitott MEA-oldatot pedig melléjük. Tisztítsa meg újra a kezét fertőtlenítővel, majd kezdje el önteni a Petri-csészéket.

Ehhez egyik kezével fogja meg felülről a Petri-csészéket, és csak az alsó edény alsó részét hagyja meg. A másik kezével vegye a tejpalackot, és az oldatot gyorsan öntse a tálba. Tegye újra az összes Petri-csészét egymásra halmozottan, és ezúttal vegye fel őket, kivéve a legalacsonyabb már öntött Petri-csészét és a második Petri-csésze alsó részét, amelyet most MEA-val tölthet be, stb.